1994年～2004年杭州地区O139群霍乱弧菌携SXT元件和整合子的特征

目的了解杭州地区O139群霍乱弧菌菌株携带SXT元件和整合子的特征。方法对1994年～2004年杭州地区腹泻患者分离的ctxA阳性霍乱弧菌O139群菌株25株（1994年～2004年）、O1群菌株（1997年～2001年）18株，应用PCR进行SXT元件和Ⅰ类整合子检测，并对Ⅰ类整合子携带的基因盒进行核酸序列测定，同时检测菌株对10种抗生素的耐药谱。结果1994年分离的浙江省首株O139群菌株即开始携带SXT元件。1994年～2004年分离的25株O139群菌株中，SXT元件携带率为96．00％（24／25）；18株O1群菌株（1997年～2001年）均属O139群出现后分离的，SXT元件为83．33％（15／18）。Ⅰ类整合子最早出现于1998年分离的O139群菌株，总阳性率为60．00％（15／25）；在2000年以后检出的O139群菌株中，携带率为81．25％（13／16）；Ⅰ类整合子中的基因盒阵列有两种：一为aadA2，占93．33％（14／15）；另一为dfrAI2＋orfF＋aadA3c，占6．67％（1／15）。18株O1群菌株（1997年～2001年）中未发现有Ⅰ类整合子。结论SXT元件在O139群（1994年～2004年）和O1群（1997年～2001年）霍乱弧菌中有较高的携带率。Ⅰ类整合子在2000年以后检出的O139群菌株中有较高的携带率。携带的基因盒提示，O139群菌株与其他细菌可能通过Ⅰ类整合子途经交换对抗生素耐药基因。

杭州市健康人群粪便中检出O1和O139群霍乱弧菌无毒力株

目的 对杭州市饮食、服务行业人员粪便标本进行霍乱弧菌监测。方法 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 1年 7月采集 2 6 2 5 2名饮食、服务行业从业人员健康体检者粪便标本 ,分别接种于碱性蛋白胨水和 4号琼脂中。通过培养特性、菌落形态、革兰染色、动力和生化试验等检查 ,对所分离的疑似霍乱弧菌菌株进行初步鉴定。采用霍乱弧菌O1群及O139群单克隆抗体的玻片凝集试验、噬菌体分型、霍乱弧菌ctxA和tcpA基因的PCR进一步鉴定各疑似霍乱菌株。 结果 上述标本中检出O1血清群和O139血清群霍乱弧菌各 2株。 2株O1血清群霍乱弧菌的噬菌体分型分别为 19k和 5k ,为埃尔托生物型非流行菌株 ;2株O139血清群霍乱弧菌的噬菌体分型分别为 2 0k和 31k ;但ctxA和tcpA基因PCR检测结果均为阴性。结论 尽管所检出的 4株霍乱弧菌均为无毒力的非流行菌株 ,但因携带者从事职业的特殊性 ,仍应引起高度重视。

下城区健康人群粪便中检出O1和O139群霍乱弧菌毒力株和无毒力株

目的：对下城区饮食、服务行业人员粪便标本进行霍乱弧菌监测。方法：2007年1月-2007年9月采集25052名饮食、服务行业从业人员健康体检者粪便标本,分别接种于碱性蛋白胨水增菌后分离4号琼脂。通过培养特性、菌落形态、革兰染色、动力和生化试验等检查,对所分离的疑似霍乱弧菌菌株进行初步鉴定,采用霍乱弧菌O1群及O139群单克隆抗体的玻片凝集试验、噬菌体生物分型、霍乱弧菌ctxA和tcpA基因PCR检测进一步鉴定各霍乱菌株。结果：上述标本中检出O1血清群和O139血清群霍乱弧菌各1株。1株O1血清群霍乱弧菌噬菌体生物分型为1 L,属埃尔托生物型非流行菌株,霍乱弧菌ctxA和tcpA毒力基因PCR检测结果为ctxA阴性,tcpA阳性,判定为有毒力的非流行菌株。另1株O139血清群霍乱弧菌ctxA和tcpA基因PCR检测结果均为阴性,为无毒力非流行菌株。结论：尽管所检出的2株霍乱弧菌均为非流行菌株,但因携带者从事职业的特殊性,仍应引起高度重视。

兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体。方法用经Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白(rMSHA)免疫日本大耳兔,收集免疫兔血清。Western Blot检测重组蛋白的免疫原性;ELISA测定该抗体的效价。结果兔抗rMSHA抗体能与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶25 600。结论成功地制备了兔抗rM-SHA抗体,该抗体能够识别原核表达的重组蛋白rMSHA,为研制霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。

O139霍乱弧菌检测方法的研究─诊断血清的制备

本文以Ｏ１３９死菌免疫健康家兔，经吸收去除非特异性凝集素制成的特异性诊断血清，专供诊断霍乱弧菌Ｏ１３９之用。采用玻片凝集试验对５株Ｏ１３９菌株及１２６株肠道菌进行验证，在敏感性和特异性方面均获得满意的结果。

戊型肝炎病毒实验室诊断进展及问题

戊型肝类（ＨＥ）是一种呈流行性，潜伏期短，临床表现类似甲型肝炎的，以肠道传播为主的传染病。随着分子生物学的发展，戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）亦得到了深入研究；本文着重就有关ＨＥＶ的生物学特性，实验室诊断技术进展及存在问题作一综述。

Lessons from Vibrio Pathogen and the Comparative Study of Vaccines Developed

Cholera continues to be one of the most common causes of morbidity and mortality among children and adults in developing countries. Vaccine against cholera is an approach in the control of this epidemic and pandemic disease. From the development of very early oral cholera vaccine, advances in vaccine development documented due to a good illustration of the epidemiology, outbreak strategy, and pathophysiology of the disease causing pathogen. The newer-generation oral cholera vaccines are safe and guarantee a high level of protection during outbreak settings for several years. Yet infants and young children in developing countries are hyporesponsive to vaccines and show poor protection against cholera. In this review, we survey and analyse our current knowledge on the etiology of cholera, its clinical manifestation, global epidemiology and elaborate the vaccine candidates, which are effective against the pathogen and the corresponding immune responses to the available vaccines. These reviews comprehensively cover the salient features of recent discoveries related to Vibrio cholerae virulence, past and present vaccine candidates and their advantages and disadvantages with their development strategies. We believe that the advances that have been included in this review will give a comprehensive insight to the prevention and control of cholera outbreaks and development of effective cholera vaccines.

2022年陕西省一起霍乱疫情调查及全基组溯源分析

目的对2022年陕西省城固县1起霍乱疫情调查溯源。方法对病例进行个案调查,对现场环境进行卫生学调查,收集当地气温及降水资料。采集病例、同餐人员及同期腹泻患者粪便或肛拭子样本,采集剩余食品、环境水体、水产品样本,进行霍乱弧菌核酸检测及分离培养。对分离到的霍乱弧菌进行血清学和质谱鉴定,利用国家致病菌识别网药物敏感试验指南进行药敏试验,提取菌株DNA进行毒力基因检测,利用二代测序平台进行全基因组测序,用测序拼接数据进行毒力基因及耐药基因预测,与既往分离的霍乱弧菌、pubMLST下载的国内外霍乱弧菌基因组序列进行核心基因组多位点序列分析(cgMLST)及核心基因组单核苷酸多态性分析(cgSNP)。结果本起疫情从1例霍乱病例和1例带菌者中各分离到1株霍乱弧菌,均为O139群,携带ctxAB毒力基因,对磺胺类、碳青霉烯类、三代头孢菌素类、喹诺酮类、β-内酰胺类药物均敏感,而对氯霉素、多粘菌素类、四环素类、氨基糖苷类有抗药性;cgMLST分析结果显示,菌株为大流行菌克隆株序列型(ST)69型,与陕西省既往霍乱菌株无关联。同餐人员及同期腹泻病例共106人均未检出霍乱弧菌。水体样本96份,鱼类样本35份,环境样本7份,畜禽粪便样本7份。经霍乱弧菌核酸检测阳性2份,分别为文川河某处采集的鱼类样本2份中检出霍乱弧菌hlyA、O139群基因核酸阳性,ctxAB毒力基因阴性。结论本起疫情为霍乱弧菌O139群引起的散发疫情,其病原为国内的大流行菌株,感染来源可能与水产品污染有关,高温、干旱等因素是霍乱发生的原因之一。

云南省一起O139群霍乱弧菌引起食源性霍乱暴发的调查

2009年1月15-17日云南省玉溪市通海县四街镇四寨村发生一起因参加丧宴而致的O139霍乱暴发,本研究对这次霍乱暴发进行流行病学调查. 1.对象与方法： （1）调查对象：在四寨村参加丧宴人员和未参加丧宴的部分村民.重点调查参加丧宴并于1月16-25日期间出现的腹泻病例、携带者以及部分对照人员。

中国O139群霍乱弧菌核糖体基因多态性的研究

目的 分析国内O139群霍乱弧菌分离株的遗传多态性。方法 以 16srRNA和 2 3srRNA核糖体基因作探针 ,对内切酶消化的菌株染色体DNA进行Bouthern杂交 ,分析杂交图谱。结果 选择的 12 2株O139群霍乱弧菌得到 10种核糖体基因型。 9株ctxAB、zot和RS均为阴性的无毒菌株 ,分属于 4种独特的核糖体基因型。结论 O139群霍乱弧菌在遗传分化及克隆群的地区分布上存在多态性 ,提示国内O139霍乱流行的复杂性。

O139群霍乱弧菌耐药谱和相关耐药基因研究

目的:通过检测分析2004年-2007年31株O139群霍乱弧菌临床分离株对13种抗菌药物耐药情况和相关耐药基因携带情况,为O139群霍乱弧菌预防和治疗提供理论依据。方法:K-B纸片扩散法药物敏感实验检测细菌13种抗菌药物耐药情况,用常规PCR方法扩增TEM、aadA2、strA、strB、tetA、floR和sul1等7种耐药基因和1型耐药整合子。结果:药物敏感实验表明31株O139群霍乱弧菌临床分离株只存在一种耐药谱型,对头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星和氟哌酸敏感,对氨苄西林、羧苄西林、氯霉素、复方新诺明、四环素、强力霉素、庆大霉素、卡那霉素和链霉素耐药,均扩增出TEM、aadA2、strA、strB、floR和sul1耐药基因和1型耐药整合子结构。结论:O139群霍乱弧菌已对多种抗生素耐药并存在相关耐药基因,应引起临床重视。

非O1非O139群霍乱弧菌多重PCR和SYBRGreen实时PCR检测方法的建立

目的建立检测非01非0139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法。方法分别以霍乱弧菌的外膜蛋白基因（omplV）、01和0139群O抗原编码基因（帕）设计引物，建立多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法，评价两种方法检测非01非0139群霍乱弧菌的特异性、重复性和一致性及最低检测菌量。结果建立了检测非01非0139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法，根据特异性条带（多重PCR）和特异性熔解温度（SYBRGreen实时PCR），两种方法均能特异性检测非01非0139群霍乱弧菌，并能鉴别其他弧菌（5种）和肠道杆菌（3种）；两种方法的最低检测菌量分别为7×10。cfu／ml（多重PCR）和7×10^2cfu／ml（SYBRGreen实时PCR），差异有统计学意义（P〈O．05）；对实时PCR的重复性检测，批内变异系数（cV）为0．22％～0．92％，批间CV为O．27％～1．41％；经370株非01非0139群霍乱弧菌的检测，两种方法的一致性均为100％。结论建立的两种方法其特异性、敏感性及重复性均好，可适用于不同条件下非01非0139群霍乱弧菌的检测和鉴定。

2009年通海县一起食源性O139霍乱暴发疫情的调查与应急处置

[目的]总结O139霍乱疫情应对经验,为今后的霍乱防治和处置提供借鉴。[方法]对2009年1月在玉溪市所属通海县四街镇四寨村发生一起霍乱暴发疫情,从病例的发现、确诊、报告、现场调查与处理、技术应对与行政应对等方面进行分析。[结果]在所有参宴的639人中,通过粪便或肛拭子检验,结合临床症状,确诊O139型霍乱病例20例(其中实验室确诊17例,临床诊断3例),罹患率为3.13%;检出O139型霍乱弧菌健康带菌者27人,带菌率为4.23%。未发生二代病例、无死亡病例,疫情在1周内完全控制。检测霍乱病例和带菌者的密切接触者228人,检测当地未参加丧宴的67例腹泻病例标本,检测暴发点外环境标本432份,均未检出霍乱弧菌。条件Logistics回归分析结果,丧宴提供的煮萝卜是发病/带菌的危险因素,OR值为3.71。[结论]这是一起由O139霍乱弧菌引起的输入性食源性霍乱暴发疫情,由于发现、诊断、报告及时,应急处置措施得当,疫情得到快速彻底控制。

某高校一起非O1/非O139群霍乱弧菌引起的食源性疾病暴发事件调查报告

目的回顾分析合肥市某高校一起非O1/非O139群霍乱弧菌引起的食源性疾病调查处置过程,探讨事件发生原因,为类似事件处置提供参考。方法对患者和食堂从业人员进行流行病学调查并采集肛拭子和病人呕吐物;对食堂及食品加工过程、环境卫生及水质状况进行现场调查和采集相关样本,采集的样品进行微生物检测。采用病例对照方法进行危险因素分析。结果本次事件共发病91人,96.7%患者以腹泻为主,潜伏期在7～48h,在2份留样食品、11名患者、2名食堂A员工粪便/肛拭和1份餐具等涂抹样中检出非O1/非O139群霍乱弧菌。病例对照研究显示,食堂A是危险因素,OR95%CI为2.77～5.33,且发病与到食堂A就餐次数呈剂量反应关系(χ2=19.44,P<0.001)。多因素logistic回归分析,5月29日中餐、30日早餐和中餐是可疑餐次。结论该起事件由非O1/非O139群霍乱弧菌引起的食源性疾病暴发,原因可能为学校食堂员工污染食物和餐具引起。

产毒型O139群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系的建立

目的:建立针对O139群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系。方法:根据O139群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-0139和霍乱弧菌肠毒素A亚基的编码基因ctxA的特异性序列设计引物及探针,利用TaqMan标记探针和便携式Smartcycler II荧光实时PCR检测平台探讨该检测体系的检测敏感性,用19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌评价该检测体系的特异性。结果:实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0×102拷贝每反应体系;对O139群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1.0×100pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时均不存在非特异性扩增;整个反应在2 h内完成。结论:本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应检测体系可作为O139群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,并可同时检测O139群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力。

一起霍乱疫情的病原检测及药敏分析

【目的】对2018年浙江省海盐县一起霍乱疫情进行霍乱弧菌病原学检测及药敏分析,为霍乱防控工作提供参考。【方法】采集病例、密切接触者粪便样本和外环境、食品样本进行菌型鉴定和毒力基因检测,并对菌株进行临床常用的20种抗菌药物的药敏分析。【结果】本次疫情共采集1例病例及其密切接触者粪便样本101份、外环境样本35份、食品40份,总计176份样本。在1份病例的首次粪便样本中检出O139群霍乱弧菌,经实时荧光PCR法检测为毒素基因ctxA阳性,其余175份样本均未检出霍乱弧菌。药敏试验结果显示该菌株对喹诺酮类(诺氟沙星、左氟沙星、环丙沙星)、头孢类(头孢噻肟、头孢噻吩)、青霉素类(氨苄西林、阿莫西林)等多种抗生素敏感,对四环素、强力霉素、新霉素、卡那霉素、链霉素、利福平耐药。【结论】本次霍乱疫情检出1株携带ctxA毒素基因的O139群霍乱弧菌,诺氟沙星、左氟沙星等抗生素可作为临床治疗与预防用药选择参考,该菌株出现多重耐药及耐药谱变化的现象需引起关注。