SerpinA3对胃癌细胞MGC803的增殖行为研究

目的分析SerpinA3高表达对胃癌MGC803细胞增殖行为的影响。方法首先根据试剂操作说明成功构建pcDNA3.1-SerpinA3真核表达载体,分别采用pcDNA3.1-SerpinA3、pcDNA3.1转染人胃癌MGC803细胞系,经G418筛选稳定表达。实验分为三组,即空白对照组(MGC803正常培养)、pcDNA3.1转染MGC803组、pcDNA3.1-SerpinA3转染MGC803组;MTT法检测细胞增殖率、平板克隆形成和软琼脂集落形成实验比较克隆形成和集落形成率、流式细胞术检测凋亡率。结果pcDNA3.1-SerpinA3组细胞增长率显著降低,克隆形成和集落形成率减少,凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SerpinA3可促进胃癌细胞增殖,抑制凋亡,可能参与肿瘤的发生,有望成为诊断胃癌的敏感标志物。

三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ的表达及抗单纯疱疹病毒/人乳头瘤病毒功能研究

目的原核表达三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ(简称MSIK),并在细胞和小鼠水平上对其抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的功能进行研究。方法构建三元融合蛋白MSIK的原核表达质粒pET30-MBP-SERPINA3-IFN-κ,将构建好的质粒转入EL21(DE3)codon Plus大肠埃希菌并利用异丙基硫代半乳糖昔(isopropyl-β-D-thiogalactophyranoside,IPTG)诱导蛋白的表达,经亲和层析纯化得到蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD&PAGE)验证目的蛋白的纯度,用1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)分别在角质细胞中及BALB/c小鼠上验证该蛋白的抗病毒活性,通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测样本中病毒的含量。结果该融合蛋白经IPTG诱导表达并由亲和层析纯化后,获得相对分子质量约为100×10^3的纯化蛋白,经SDS-PAGE法检验,并使用Image J进行灰度分析,该融合蛋白纯度大于95%。在角质细胞中,该三元融合蛋白能够有效抑制HSV-1病毒的复制,在小鼠皮肤创伤模型中,该三元融合蛋白同样能够有效抑制HSV-1病毒的复制并能够促进创口的愈合。结论成功表达了三元融合蛋白MSIK,并利用亲和层析柱进行了有效的纯化。获得的融合蛋白具有良好的生物学活性,能够有效抑制HSV-1病毒的复制并促进创口的愈合。该三元融合蛋白可用于研发有效的抗HPV护创敷料,用来治疗一些由HPV引发的相关疾病。