【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中...【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中牦牛SERPINE1基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增克隆获得高、低嫩度牦牛背最长肌中的SERPINE1基因序列全长,并对其结构及编码蛋白进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR检测不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因表达量。【结果】高、低嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因全长分别为8 315和8 318 bp,均编码402个氨基酸且氨基酸序列完全相同。高、低嫩度背最长肌组织中SERPINE1基因非编码序列中存在3个碱基缺失及22个碱基突变(4个碱基颠换、18个碱基转换)。牦牛SERPINE1基因核苷酸序列与普通牛、瘤牛、美洲野牛、绵羊、山羊、家猪、人、小鼠的相似性分别为99.26%、99.26%、99.59%、96.94%、97.02%、90.49%、86.52%和80.10%。SERPINE1蛋白是一个含有23个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白,位于细胞外,具有34个潜在磷酸化位点,包含1个反应中心环(reactive center loop, RCL)。SERPINE1蛋白二级结构主要由α-螺旋(44.78%)和无规则卷曲(35.32%)构成。实时荧光定量PCR结果显示,SERPINE1基因在高嫩度牦牛背最长肌中表达量极显著高于低嫩度牦牛背最长肌(P<0.01)。【结论】本研究成功从高、低嫩度牦牛背最长肌组织中克隆SERPINE1基因全长并进行了生物信息学特征分析,为后续研究SERPINE1基因参与调控牦牛肉嫩度机制提供理论参考。展开更多
目的探究丝氨酸蛋白酶抑制剂1(serine proteinase inhibitor family E member 1,SERPINE1)在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法通过starBase和TISIDB数据库分析471个结肠癌及41个正常结肠组织中SERPINE1的表达及...目的探究丝氨酸蛋白酶抑制剂1(serine proteinase inhibitor family E member 1,SERPINE1)在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法通过starBase和TISIDB数据库分析471个结肠癌及41个正常结肠组织中SERPINE1的表达及其与临床分期、预后生存的关系;收集联勤保障部队第九四〇医院5例结肠癌患者癌组织与对应的癌旁组织标本,应用RT-qPCR和Western blot验证SERPINE1在结肠癌中的表达。构建SERPINE1过表达与干扰表达的慢病毒载体,进行结肠癌RKO和LoVo细胞株转染,通过RT-qPCR和Western blot评估SERPINE1过表达和干扰表达的效果,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成实验、Transwell实验和Hoechst凋亡细胞核染色评估细胞的增殖、迁移与侵袭能力和细胞的凋亡情况;应用Western blot检测SERPINE1对磷脂酰激酶3(phosphatidyl-inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路的影响。结果数据库分析发现SERPINE1在结肠癌中高表达,且与患者的肿瘤临床分期正相关,与预后总生存期负相关(P<0.05)。转染过表达的慢病毒载体后细胞的增殖、迁移与侵袭能力增强,而细胞的凋亡减弱;反之,在转染干扰表达的慢病毒载体后细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱,而细胞的凋亡增强(P<0.05)。通过Western blot实验发现转染SERPINE1过表达的慢病毒载体后细胞PI3K和AKT表达无明显变化,而磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化AKT(p-AKT)表达增加,反之转染SERPINE1干扰表达的慢病毒载体细胞PI3K和AKT表达无明显变化,而p-PI3K和p-AKT表达减少,灰度值定量分析p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值差异有统计学意义(P<0.05)。结论SERPINE1在结肠癌中高表达,与患者临床分期及预后相关;SERPINE1过表达可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭,抑制其凋亡。展开更多
目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂分支E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)的表达与胃癌的预后及肿瘤免疫细胞浸润的关系。方法通过肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库和TCGA中的胃癌数据,分析SERPINE1的表达。同时使用Kaplan-Meier plot...目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂分支E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)的表达与胃癌的预后及肿瘤免疫细胞浸润的关系。方法通过肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库和TCGA中的胃癌数据,分析SERPINE1的表达。同时使用Kaplan-Meier plotter和基因表达谱互动分析(GEPIA)评估SERPINE1对临床预后的影响。使用基因集富集评分(GSEA)对基因免疫途径进行了富集分析。此外,使用TIMER、TISIDB和GEPIA分析SERPINE1表达与免疫浸润标志物的相关性。结果对来自TCGA胃癌患者的375个肿瘤组织和32个正常组织的RNA测序数据的分析表明,SERPINE1在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织。Kaplan-Meier plotter及GEPIA分析得出SERPINE1高表达与较差的预后明显相关(Hr=1.44,95%CI=1.21~1.71,P<0.05)。TISIDB和TIMER数据库分析后发现,SERPINE1的表达与胃癌患者肿瘤免疫细胞浸润明显相关,并与免疫和基质成分增加相关。结论SERPINE1的表达与胃癌患者的预后和各种类型的免疫细胞浸润相关,可作为判断胃癌预后和免疫治疗的生物标志物。展开更多
Hypoxia,as an important hallmark of the tumor microenvironment,is a major cause of oxidative stress and plays a central role in various malignant tumors,including glioblastoma.Elevated reactive oxygen species(ROS)in a...Hypoxia,as an important hallmark of the tumor microenvironment,is a major cause of oxidative stress and plays a central role in various malignant tumors,including glioblastoma.Elevated reactive oxygen species(ROS)in a hypoxic microenvironment promote glioblastoma progression;however,the underlying mechanism has not been clarified.Herein,we found that hypoxia promoted ROS production,and the proliferation,migration,and invasion of glioblastoma cells,while this promotion was restrained by ROS scavengers N-acetyl-L-cysteine(NAC)and diphenyleneiodonium chloride(DPI).Hypoxia-induced ROS activated hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)signaling,which enhanced cell migration and invasion by epithelial-mesenchymal transition(EMT).Furthermore,the induction of serine protease inhibitor family E member 1(SERPINE1)was ROS-dependent under hypoxia,and HIF-1αmediated SERPINE1 increase induced by ROS via binding to the SERPINE1 promoter region,thereby facilitating glioblastoma migration and invasion.Taken together,our data revealed that hypoxia-induced ROS reinforce the hypoxic adaptation of glioblastoma by driving the HIF-1α-SERPINE1 signaling pathway,and that targeting ROS may be a promising therapeutic strategy for glioblastoma.展开更多
文摘【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中牦牛SERPINE1基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增克隆获得高、低嫩度牦牛背最长肌中的SERPINE1基因序列全长,并对其结构及编码蛋白进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR检测不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因表达量。【结果】高、低嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因全长分别为8 315和8 318 bp,均编码402个氨基酸且氨基酸序列完全相同。高、低嫩度背最长肌组织中SERPINE1基因非编码序列中存在3个碱基缺失及22个碱基突变(4个碱基颠换、18个碱基转换)。牦牛SERPINE1基因核苷酸序列与普通牛、瘤牛、美洲野牛、绵羊、山羊、家猪、人、小鼠的相似性分别为99.26%、99.26%、99.59%、96.94%、97.02%、90.49%、86.52%和80.10%。SERPINE1蛋白是一个含有23个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白,位于细胞外,具有34个潜在磷酸化位点,包含1个反应中心环(reactive center loop, RCL)。SERPINE1蛋白二级结构主要由α-螺旋(44.78%)和无规则卷曲(35.32%)构成。实时荧光定量PCR结果显示,SERPINE1基因在高嫩度牦牛背最长肌中表达量极显著高于低嫩度牦牛背最长肌(P<0.01)。【结论】本研究成功从高、低嫩度牦牛背最长肌组织中克隆SERPINE1基因全长并进行了生物信息学特征分析,为后续研究SERPINE1基因参与调控牦牛肉嫩度机制提供理论参考。
文摘目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂分支E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)的表达与胃癌的预后及肿瘤免疫细胞浸润的关系。方法通过肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库和TCGA中的胃癌数据,分析SERPINE1的表达。同时使用Kaplan-Meier plotter和基因表达谱互动分析(GEPIA)评估SERPINE1对临床预后的影响。使用基因集富集评分(GSEA)对基因免疫途径进行了富集分析。此外,使用TIMER、TISIDB和GEPIA分析SERPINE1表达与免疫浸润标志物的相关性。结果对来自TCGA胃癌患者的375个肿瘤组织和32个正常组织的RNA测序数据的分析表明,SERPINE1在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织。Kaplan-Meier plotter及GEPIA分析得出SERPINE1高表达与较差的预后明显相关(Hr=1.44,95%CI=1.21~1.71,P<0.05)。TISIDB和TIMER数据库分析后发现,SERPINE1的表达与胃癌患者肿瘤免疫细胞浸润明显相关,并与免疫和基质成分增加相关。结论SERPINE1的表达与胃癌患者的预后和各种类型的免疫细胞浸润相关,可作为判断胃癌预后和免疫治疗的生物标志物。
基金This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.81772688 and 81372698)the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions(PAPD)+1 种基金the Research Foundation for Talented Scholars of Xuzhou Medical University(No.RC20552223)the Postgraduate Research&Practice Innovation Program of Jiangsu Province(No.KYCX20_2463),China。
文摘Hypoxia,as an important hallmark of the tumor microenvironment,is a major cause of oxidative stress and plays a central role in various malignant tumors,including glioblastoma.Elevated reactive oxygen species(ROS)in a hypoxic microenvironment promote glioblastoma progression;however,the underlying mechanism has not been clarified.Herein,we found that hypoxia promoted ROS production,and the proliferation,migration,and invasion of glioblastoma cells,while this promotion was restrained by ROS scavengers N-acetyl-L-cysteine(NAC)and diphenyleneiodonium chloride(DPI).Hypoxia-induced ROS activated hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)signaling,which enhanced cell migration and invasion by epithelial-mesenchymal transition(EMT).Furthermore,the induction of serine protease inhibitor family E member 1(SERPINE1)was ROS-dependent under hypoxia,and HIF-1αmediated SERPINE1 increase induced by ROS via binding to the SERPINE1 promoter region,thereby facilitating glioblastoma migration and invasion.Taken together,our data revealed that hypoxia-induced ROS reinforce the hypoxic adaptation of glioblastoma by driving the HIF-1α-SERPINE1 signaling pathway,and that targeting ROS may be a promising therapeutic strategy for glioblastoma.
