长柄石杉中Serratene三萜成分的研究

目的对长柄石杉中Serratene三萜成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、制备性薄层层析分离化学成分,根据波谱数据及理化常数进行结构鉴定。结果分离鉴定了7个化合物,分别为(β-sitosterol)(Ⅰ)s,erratenediol-3-acetate(Ⅱ)s,erratenediol(Ⅲ)2,1-epi-serratenediol(Ⅳ)l,ycoclavanol(Ⅴ),3α,21β,24-trihydroxyserrat-14-en-16-one(Ⅵ)1,6-oxo-3α-hydroxyserrat-14-en-21β-ol(Ⅶ)。结论 7个化合物均首次从该植物中分离得到。

柱前衍生-气相色谱-质谱联用法同时测定茯苓中的可溶性糖与三萜酸

[目的]通过建立柱前衍生-气相色谱-质谱(GC-MS)法实现茯苓(Poria cocos)各成分的快速高效分离检测,为茯苓有效成分的分析提供新方法并为茯苓原料品质判断提供参考.[方法]采用超声辅助提取法,以反油酸为内标物,甲氧胺(MOX)和N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺[含1%(质量分数)三甲基氯硅烷](MSTFA+1%TMCS)为肟化-硅烷化衍生试剂,采用GC-MS同时检测茯苓中的果糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、茯苓酸、茯苓新酸A和茯苓新酸B.[结果]优化后的衍生条件为:200μL茯苓的甲醇提取液氮气吹干后,加入50μL MOX,于40℃反应2 h,然后加入250μL(MSTFA+1%TMCS),于40℃下反应30 min.衍生后的目标化合物在40 min内完成分离分析,线性关系良好,相关系数均在0.9935以上,该方法的定量限为0.008~1.000μg/mL,检测限为0.003~0.300μg/mL.茯苓样品加标回收率为82.0%~122.4%,相对标准偏差为1.05%~4.43%.[结论]本方法样品用量少,结果稳定且灵敏度高,可用于检测茯苓样品中可溶性糖和微量的三萜酸类化合物,同时也为检测其他样品中的三萜酸类化合物提供更多的选择.

枇杷叶三萜酸联合重组人表皮生长因子对激素依赖性皮炎豚鼠皮肤屏障功能的修复及免疫失衡的影响

目的 观察枇杷叶三萜酸(TAL)联合重组人表皮生长因子(rh-EGF)对激素依赖性皮炎(HDD)豚鼠模型皮肤屏障功能修复及免疫失衡的影响。方法 选取40只无特定病原(SPF)级豚鼠,随机分为对照组、模型组、rh-EGF组、TAL组和联合组,每组各8只。除对照组外,其他各组涂抹0.05%卤米松乳膏,连续45 d,构建HDD模型。构建成功后,rh-EGF组涂抹rh-EGF凝胶,TAL组涂抹TAL溶液,联合组涂抹TAL和rh-EGF凝胶,对照组和模型组涂抹生理盐水,共15 d。记录各组临床症状并打分;检测经皮水分丢失(TEWL)、角质层含水量(WCSC)和皮脂量(SC);HE染色观察各组豚鼠皮肤组织病理变化;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测总免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果 与对照组比较,模型组症状明显、皮肤组织损坏严重,TEWL增加,WCSC和SC减少;免疫因子Ig E和IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(P<0.05)。与模型组比较,rh-EGF组、TAL组和联合组用药后临床症状减轻、皮肤组织损伤不明显;TEWL减少,WCSC和SC增加,免疫因子IgE和IL-4水平降低、IFN-γ水平升高(P<0.05)。且联合组与rh-EGF组和TAL组比较,作用效果更加明显(P<0.05)。TAL组和联合组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAL联合rh-EGF可有效缓解HDD豚鼠的临床症状,改善皮肤细胞损伤,修复皮肤屏障功能,提升免疫能力。

脂肪酸对牛樟芝液态发酵产三萜的影响

为提高牛樟芝菌丝体产三萜类化合物的能力,以5种常见的脂肪酸为外源添加物,筛选出促进牛樟芝菌丝体生长和提高总三萜得率的最优培养基及培养方法,并对比分析空白对照组和添加脂肪酸的实验组所得菌丝体形态、发酵液颜色及黏度的差异。研究结果表明:不同脂肪酸的添加对牛樟芝菌丝体产三萜均有促进作用,其中亚麻酸对三萜生产的促进效果最强,其他脂肪酸的促进效果排序为亚油酸>油酸>硬脂酸>软脂酸;在添加亚麻酸的最优条件下(添加2.0 g/L亚麻酸、培养8 d)获得最大三萜得率为(5.0±0.1)%,是空白对照组的2.1倍。该研究方法操作容易,成本较低,效果显著,是促进牛樟芝菌丝体生长和三萜合成的有效策略,为牛樟芝三萜的规模化发酵提供参考和借鉴。

固态发酵三七渣产灵芝三萜的工艺条件优化

该研究通过单因素试验考察发酵温度、接种量、发酵时间对固态发酵三七渣生产灵芝三萜的影响,并采用响应面法对其发酵工艺条件进行优化。结果表明,发酵温度、接种量、发酵时间对灵芝三萜含量影响均极显著(P<0.01),这3个因素对于发酵培养物中灵芝三萜含量影响程度排序为:接种量>发酵时间>发酵温度。发酵温度和接种量之间的交互作用对灵芝三萜含量的影响极显著(P<0.01);而接种量和发酵时间、发酵时间和发酵温度之间的交互作用对灵芝三萜含量的影响不显著(P>0.05)。在实验室小试条件下最佳发酵工艺条件为:发酵温度30℃,发酵时间16 d,接种量为11%。在此优化条件下,灵芝三萜含量为(4.110±0.186)mg/g,比优化前提高了12.0%。

基于网络药理学及分子对接探究地参三萜酸保肝作用机制

目的基于网络药理学、分子对接探究地参三萜酸有效成分的保肝作用机制。方法检索TCMSP、PharmMapper、PharmMapper数据库获取三萜酸化合物及靶点,通过Swiss Target Prediction、uniprot数据库获取作用靶点,通过OMIM、Genecards数据库获取肝病相关疾病靶点,在Venny 2.1在线软件作图工具平台得到共同靶点。使用Cytoscape 3.9.1软件,构建“成分-靶点-疾病”网络并输入到STRING数据库中进行检索构建蛋白相互作用的PPI网络。利用David数据库对共同靶点进行GO与KEGG富集分析,借助分子对接(Molecular docking)手段对分析结果加以验证。结果获取药物-疾病共同靶点58个,由活性成分-靶点-疾病网络图可以看出地参中三萜酸成分对应靶标来发挥对肝脏的保护作用。GO结果显示,交集基因共富集至281条生物过程通路中;交集基因共富集至33条细胞组分表达过程中;交集基因共富集至76条分子功能相关的过程中,58个共同靶点经David数据库KEGG富集分析后共得到126条KEGG通路。结论本研究通过网络药理学及分子对接技术表明地参三萜酸(白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸)具有一定的保肝作用。

高产三萜灵芝新菌株‘沪农灵芝5号’的选育

为选育高产三萜灵芝(Ganoderma lucidum)新品种,以抗杂菌能力强、生物学效率高的‘沪农灵芝1号’(H 1)和三萜含量高、抗杂菌能力弱的‘灵芝G 8’(G 8)为亲本,将原生质体单核菌株进行杂交,从130个杂交组合中筛选出菌丝长势较好的25个杂交菌株,并对其进行栽培试验,考察菌包成品率、生物学效率等农艺性状及子实体三萜含量,从中筛选出杂交菌株Z18。与亲本G8相比,Z18菌包成品率提高66.67%、生物学效率提高22.54%;与亲本H1相比,Z18子实体中三萜含量提高51.26%。ERIC-PCR分析结果显示,Z18与亲本存在遗传差异。Z18达到新品种审定标准,已通过上海市非主要农作物品种认定,定名为‘沪农灵芝5号’。

提高羊肚菌液态发酵三萜含量的诱导条件优化

为了充分综合利用羊肚菌资源,提高羊肚菌三萜含量,该研究通过单因素试验确定多种诱导子提高羊肚菌液体发酵时三萜含量的最佳条件,通过响应面试验来优化多种诱导子对羊肚菌液态发酵三萜含量的促进条件,并对三萜合成途径中的两种关键酶的酶活进行了测定。结果表明,最佳处理为磁场强度2.81 mT、赤霉素0.56 g/L、水杨酸214.54mmol/L。在此条件下,羊肚菌三萜的积累量最大达到60.26mg/g,是优化前的160.72%(m/m),法尼基焦磷酸合成酶(SS)酶活和鲨烯合酶(FPS)酶活分别为39.93 IU/L和71.08 IU/L分别是对照组的190.85%和178.02%(m/m)。因此,采用磁场、赤霉素结合水杨酸作为处理可以显著提高羊肚菌三萜含量,且三萜的积累是通过提高其合成途径中的两种关键酶所致。本研究为羊肚菌富集有益代谢产物的诱导剂及羊肚菌新产品的开发提供了理论依据。

油茶果壳中齐墩果烷三萜皂苷抗炎活性及作用机制研究

该研究以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7细胞为炎症模型,采用Griess实验、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blotting和免疫荧光等技术,评价油茶果壳3-O-β-D-葡萄糖苷(1″→6′)α-L-鼠李糖基27-羟基齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄糖苷(3-O-β-D-glucopyranosyl(1″→6′)α-L-rhamnosyl 27-hydroxy oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside,OA)的抗炎活性。实验设置对照组、LPS组和OA组(5、10、20和40μmol/L)。结果显示,不同浓度OA处理对脂多糖诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌具有一定的抑制活性,当浓度为20或40μmol/L时,OA对脂多糖诱导的炎症小体nod样受体家族,含pyrin结构域3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,NLRP3)和半胱天冬酶1(cysteine aspartate protease 1,Caspase 1)蛋白表达的抑制活性较好;当药物处理1 h和6 h时,OA显著下调了胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)和p38蛋白(p38 protein,p38)磷酸化水平,当药物处理2 h时,OA对p38和Jun氨基端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平具有抑制活性;而且药物处理6 h时,不同浓度OA对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)核转位具有明显的阻滞作用。这些结果揭示了OA的抗炎活性,为针对性开发油茶果壳资源和以OA为基础的活性产品提供了科学依据。

甘草中三萜皂苷类成分抗肿瘤及联合抗肿瘤机制研究进展

甘草中三萜皂苷包括甘草酸、甘草次酸、乌拉尔甘草皂苷等,是甘草的主要活性成分之一。近年来,甘草三萜皂苷在抗肝癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤及联合抗肿瘤方面的研究取得了一定进展。其可通过诱导肿瘤细胞凋亡、自噬、调控信息通路等机制抑制肿瘤细胞的增殖,在肿瘤的治疗上具有药用价值。

山楂叶中黄酮和三萜类成分定量分析

山楂叶作为一种中药材,有着多种活性成分。探讨了以水和不同比例乙醇溶液作为溶剂提取山楂叶的黄酮类和三萜类成分的得率。使用回流提取法,利用不同溶剂对山楂叶进行提取,利用紫外-分光光度计分别对两种溶剂下山楂叶的提取物中的黄酮和三萜类进行含量测定。结果表明:无论是黄酮类还是三萜类,在体积分数为50%乙醇溶液中的提取率最高,且黄酮含量总是大于三萜含量,水提浸膏中的三萜含量较少,推测山楂叶中的三萜类多为苷元结构。通过对山楂叶中黄酮类和三萜类进行含量测定,优化了溶剂选择,为山楂叶活性成分的提取分离提供理论支持。

高效液相色谱法测定大果山楂果实中6种三萜酸类成分的含量

建立同时测定大果山楂果实中蔷薇酸、2α,19α-二羟基-3-羰基-12-烯-28-乌苏酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),并对这6种三萜酸在广西6个产地大果山楂果实中的分布及含量进行分析。采用Diamonsil C_(18)(2)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液/甲醇(v/v)为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,柱温30℃。结果表明:6种三萜酸在线性范围内质量浓度与色谱峰峰面积具有良好的线性关系,相关系数均>0.9990,检出限0.46~2.00μg/mL,定量下限1.53~6.67μg/mL,变异系数均<5.0%,加标回收率99.2%~101.3%;6个产地的大果山楂果实中三萜酸含量丰富,均检出蔷薇酸、2α,19α-二羟基-3-羰基-12-烯-28-乌苏酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸6种三萜酸,均为五环三萜酸化合物,其中蔷薇酸、2α,19α-二羟基-3-羰基-12-烯-28-乌苏酸首次检出,以熊果酸、蔷薇酸、2α,19α-二羟基-3-羰基-12-烯-28-乌苏酸为主,三者含量之和占总三萜酸的71.82%~81.38%,总三萜酸含量在808.74~1090.75μg/g FM之间,其中柳州柳江区和桂林平乐县的果实总三萜酸含量相对较高,分别达到1090.75μg/g FM和1045.20μg/g FM。本研究的HPLC法可作为大果山楂果实中三萜酸含量的检测方法,为大果山楂果原料和产品的品质评估提供科学参考。

响应面法优化超声辅助提取蕨麻总三萜工艺研究

目的:优化超声辅助提取蕨麻总三萜工艺条件研究。方法:在单因素试验基础上,利用响应面法评估液料比、提取时间、提取温度对总三萜提取得率的影响。结果:超声辅助提取最佳工艺参数为液料比20∶1 mL/g,提取时间63 min,提取温度60℃,蕨麻总三萜提取得率可达4.73%±0.01%。结论:响应面法优化提取工艺切实可行,操作简单,总三萜含量高,可为蕨麻进一步开发利用提供依据。

凌霄花总三萜的超声辅助提取工艺优化

目的 优化凌霄花总三萜类化合物的超声辅助提取工艺。方法 以总三萜提取率为评价指标,考察料液比、乙醇浓度、超声时间、超声功率等因素对提取率的影响,采用单因素试验和正交试验优化提取工艺。结果 凌霄花总三萜的最佳提取工艺为:料液比1/40(g·mL^(-1)),乙醇浓度60%,超声时间40min,超声功率100W。该条件下,凌霄花总三萜平均提取率为4.11%。结论 本研究优化了凌霄花总三萜的超声辅助提取工艺,该工艺稳定,提取效率较高,适合该药材三萜类化学成分的提取。

基于液相色谱-三重四级杆质谱仪的栀子及水栀子中萜类物质鉴定及成分差异研究

目的建立栀子中萜类物质的高通量分析方法,并将其应用于栀子与水栀子的成分差异研究。方法结合液相色谱-三重四级杆质谱仪中的全扫描、子离子扫描、母离子监测、中性丢失离子扫描、多反应离子监测、动态多反应离子监测等多种技术提出栀子中萜类物质的定性、定量分析策略,进一步应用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多元变量分析方法研究栀子与水栀子的成分差异。结果共鉴定出并相对定量81种萜类物质,发现栀子与水栀子间萜类物质含量差异显著,其中13种物质可作为鉴别栀子与水栀子的差异标志物。结论所建立的方法操作便捷,结果准确,为栀子药材鉴别及质量评价提供了新思路,并为栀子资源的合理开发利用提供了参考依据。

酶辅助提取盐肤木总三萜工艺研究

目的:确定酶辅助提取盐肤木三萜类成分的工艺参数。方法:采用紫外分光光度法测定盐肤木总三萜含量。以总三萜含量为评价指标,通过单因素试验筛选酶辅助提取的主要影响因素及水平,进行响应面优化。结果:酶辅助提取的最优条件为:添加2000 U(40 mg)纤维素酶,调节pH5.4,45°C下酶解75 min。在最佳酶辅助提取条件下进行验证试验,盐肤木中三萜化合物的提取得率为1.186%,与预测值接近。结论:该工艺合理可行,可为盐肤木三萜类成分提取研究提供参考。

灵芝三萜提取工艺的优化

以灵芝孢子粉为原料,使用体积分数为70%的乙醇为提取剂,采用酶解与超声辅助提取相结合的方法,将不同液固比、超声时间、酶解时间和酶用量设定为4个因素,进行单因素试验并设计响应面试验,以确定最优提取方式及其影响因素.利用大孔树脂层析法对灵芝三萜进行分离纯化,通过优化分离纯化工艺,确定最佳洗脱树脂、洗脱液体积分数、上样液流速以及上样液质量比.采用高效液相色谱法分析灵芝总三萜的组分差异.通过预实验分析,与单一提取法相比,酶+超声辅助提取更高效.采用乙醇为提取剂提取灵芝中三萜类化合物可提高三萜的纯度.最优条件下可实现对三萜含量的快速、精确测定,为灵芝三萜的分离纯化提供理论依据.

射干不同部位总三萜提取工艺优化及其抗氧化活性分析

试验以射干为原材料,采用响应面法优化射干果皮总三萜(BCPT)和根茎总三萜(BCRT)提取工艺,分析其抗氧化活性。以温度、液料比、乙醇浓度、提取时间为主要影响因素,在单因素试验的基础上,以总三萜提取率为响应值,利用响应面试验优化BCPT和BCRT的提取条件。利用香草醛-冰乙酸-高氯酸法对BCPT、BCRT定量分析,并测定BCPT、BCRT对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)自由基的清除能力。结果显示:BCPT的最优提取工艺为提取温度70℃、液料比35 mL/g、乙醇浓度75%、提取时间210 min;BCRT的最优提取工艺为提取温度75℃、液料比35 mL/g、乙醇浓度70%、提取时间210 min。在最优条件下,BCPT、BCRT提取率分别为18.0772%、18.0743%。BCPT和BCRT对ABTS+自由基清除率分别为96.08%、94.32%;BCPT和BCRT对DPPH自由基的清除率为78.92%、58.01%。研究表明,试验建立的射干总三萜提取工艺简单合理,BCPT、BCRT均具有良好的抗氧化活性。

乌苏烷型五环三萜类化合物抗肿瘤研究进展

乌苏烷型五环三萜类化合物在植物中广泛存在,来源丰富,甘草、枇杷叶、苹果等含量较高。药理学研究表明此类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等生物活性,具有较大的医用价值和开发潜力。因此,本文针对近年来国内外有关乌苏烷型五环三萜类化合物抗肿瘤活性和作用机制的文献报道进行梳理,以期对此类化合物的进一步研究和抗肿瘤应用开发提供参考。

响应面法优化畲药盐肤木总三萜纯化工艺

目的:研究合适树脂对畲药盐肤木总三萜的最佳纯化工艺条件。方法:通过静态动态实验筛选树脂型号、样液pH值、上样流速、上样浓度、上样量、洗脱曲线对盐肤木中三萜类化合物的影响,以总三萜转移率为指标,通过响应面法优选出除杂溶剂流速、富集溶剂流速、径高比的最佳条件。结果:最佳纯化工艺条件:AB-8大孔吸附树脂,径高比1:10,样品pH值6.0,上样量60 mL,上样浓度1.00 mg/mL,上样流速1 BV/h;除杂溶剂浓度、流速及用量:60%乙醇、2 BV/h、5 BV;富集溶剂浓度、流速及用量:90%乙醇、4 BV/h、5 BV。在最佳纯化条件下进行验证试验,总三萜纯化率为55.21±0.31%,总转移率为98.24±0.87%。结论:AB-8大孔吸附树脂能够有效富集盐肤木中的三萜类成分,并提高有效成分的纯度,为盐肤木三萜类有效成分的分离纯化提供基础。