聚乙二醇衍生物修饰的IL-12制备及体外评价

目的:制备聚乙二醇衍生物修饰的IL-12,确定其修饰位点,并在稳定性、血象恢复、抗肿瘤等多方面对其进行体外评价。方法:使用聚乙二醇丙醛、马来酰亚胺衍生物修饰IL-12,超高效液相色谱(UPLC)确定两种不同衍生物的修饰位点;使用重组人IL-12、PEG-IL-12刺激NK92细胞,试剂盒评估IFN-γ活性及细胞毒性;刺激CD34+评估其血象恢复潜力;刺激NK细胞杀伤活力评估其在提高免疫力、抗肿瘤方面的效果。结果:与重组人IL-12相比,PEG-IL-12具有更高的稳定性、血象恢复潜能和抗肿瘤效果。结论:PEG-IL-12可有效克服重组人IL-12的诸多缺点,显著提高IL-12在临床试验中广泛应用的可能。

IL-12、IL-27和P53与卵巢上皮性肿瘤临床病理特征及预后的相关性研究

目的:观察IL-12、IL-27、P53在卵巢癌组织、卵巢上皮性良性肿瘤组织、正常卵巢组织中的表达,探究其与卵巢上皮性肿瘤临床病理特征及预后的相关性。方法:免疫组化法检测IL-12、IL-27和P53在50例上皮性卵巢癌(上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC))、40例卵巢上皮性良性肿瘤及18例正常卵巢组织中的表达情况,探讨IL-12、IL-27和P53表达与EOC临床病理特征及预后的关系。结果:EOC中IL-12、IL-27和P53表达与FIGO分期、病理类型、组织分化程度有关(P 0.05)。IL-12、IL-27和P53在EOC中表达呈正相关(r = 0.364)。EOC中IL-12、IL-27和P53高表达与患者不良预后密切相关,IL-12、IL-27和P53高表达者的总生存期明显缩短(P < 0.05)。结论:IL-12、IL-27和P53可能参与EOC的发生、发展,有望作为EOC临床预后预测指标。

血清SAA、IL-12及IL-6水平在儿童手足口病病情中的评估价值

【目的】探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、白细胞介素-12(IL-12)及白细胞介素-6(IL-6)水平在儿童手足口病病情的评估价值。【方法】100例手足口病患儿作为观察组,同期100名体检健康的儿童作为对照组,根据病情严重程度将观察组患儿分为轻症组(n=46)、重症组(n=34)和危重组(n=20)。比较手足口病患儿及健康儿童的血清SAA、IL-12、IL-6水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SAA、IL-12及IL-6水平诊断手足口病的价值,比较不同病情严重程度患儿的相关资料,分析血清SAA、IL-12及IL-6水平与病情严重程度的相关性。【结果】观察组患儿血清SAA、IL-12、IL-6水平显著高于对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清SAA、IL-12及IL-6水平诊断手足口病的曲线下面积分别为0.873、0.843、0.840,敏感度分别为0.870、0.820、0.830(均P<0.05);危重组患儿血清SAA、IL-12、IL-6水平显著高于轻症组及重症组,重症组显著高于轻症组(P<0.05);相关性分析显示,血清SAA、IL-12及IL-6水平与患儿病情严重程度呈正相关(均P<0.05)。【结论】血清SAA、IL-12及IL-6水平可预测手足口病患儿的病情严重程度,其水平越高,患儿病情越严重。

PCT、IL-12水平检验联合CT检查肺结核的诊断价值研究

目的:研究分析血浆降钙素原(PCT)、血清白介素-12(IL-12)联合CT检查诊断肺结核的价值。方法:选取兰州市第二人民医院2022年2月—2024年2月收治的84例疑似肺结核患者,均进行胸部CT检查并检验血浆PCT、血清IL-12水平,将病理活检作为金标准,分析PCT、IL-12水平检验联合CT检查诊断结果。结果:84例疑似肺结核患者经病理诊断,确诊为肺结核50例,检出率59.52%(50/84);CT诊断肺结核的灵敏度、特异度和准确率分别为82.00%(41/50)、88.24%(30/34)、84.52%(71/84)。确诊的50例患者中,CT检查发现胸膜病变、支气管扩散灶、肿块状病变、可见斑片状阴影、肺叶或肺段实变分别为26例、12例、13例、12例、9例。肺结核患者PCT水平为(0.28±0.13)ng/mL,显著高于非肺结核患者的(0.11±0.05)ng/mL,IL-12水平(44.57±5.54)pg/L显著低于非肺结核患者的(54.84±9.62)pg/L(P<0.01)。绘制ROC曲线,与单一指标和CT检验相比较,PCT、IL-12水平与CT联合检验的特异度和灵敏度显著更高,分别为100.00%、91.18%。结论:在肺结核的临床诊断中,CT有着较高的应用价值,但是这种诊断方式仍存在着漏诊和误诊,不利于临床治疗,PCT、IL-12指标在肺结核的诊断中有着良好的应用优势,将这两项指标与CT联合,能够有效提升肺结核的诊断准确性,为临床治疗提供可靠指导。

IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制研究

分析IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制。方法:选取本院2021年12月~2022年12月期间收治的30例急性髓系白血病患者,提取患者BM-MNC,构建NK细胞诱导体系,A组加入SCF、IL-7、IL-12、IL-15,B组加SCF、IL-7、IL-2、IL-15。5周诱导分化结束后,对NK细胞活化情况进行检测。对NK细胞相关基因表达水平进行实时定量PCR检测,取K562细胞和患者来源原代白血病细胞分别作为靶细胞,取培养第5周的A、B组的NK细胞作为效应细胞,对NK细胞杀伤活性进行检测。结果:诱导分化前,BM-MNC中NK细胞和CD34+细胞所占比例分别为(0.46±0.11)%、(80.35±5.12)%。诱导分化后,A组NK细胞所占比例明显高于B组(P<0.05);但两组CD34 细胞所占比例组间差异不明显(P>0.05)。A组CD69+、Kp46+、NKG2D+表达比例均明显高于B组(P<0.05)。经组间差异检验,B组GranzymeB、TNF-α和IFN-y基因相对表达水平均显著低于A组(P<0.05)。对两组NK细胞对不同效靶比K562细胞与患者来源细胞的杀伤率进行统计和比较,结果显示,在不同的效靶比下,NK细胞对本组K562细胞以及骨髓血来源白血病细胞的杀伤率均存在一定的差异。其中,均呈现出效靶比越大,相应的杀伤率越高的特点。对两组NK细胞在同一效靶比下对不同细胞的杀伤情况进行比较,可知,对患者来源细胞的杀伤率均明显高于K562细胞(P<0.05)。开展组间比较,结果显示在同一效靶比下,A组细胞组合对K562细胞以及患者来源细胞的杀伤率均显著高于B组(P<0.05)。结论:IL-12、IL-15细胞因子组合可体外诱导分化CD34+白血病细胞为NK细胞,且具有一定的杀伤活性。

IL-12和IL-17强直性脊柱炎患者的外周血表达水平及两者之间相关性研究

目的检测强直性脊柱炎(AS)患者白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-17(IL-17)在外周血的分子水平和mRNA相对表达水平,探讨其在AS发病的作用。方法采用ELISA、RT-q PCR法,分别检测45例AS患者和45例健康对照者血清IL-12、IL-17分子水平及其在外周血单个核细胞中mRNA相对表达水平。结果病例组血清IL-12、IL-17水平显著高于对照组(P<0.05),病例组IL-12 mRNA、IL-17 mRNA相对表达含量显著高于对照组(P<0.05);IL-12血清水平和IL-12 mRNA分别与IL-17血清水平和IL-17 mRNA呈正相关性。结论 IL-12和IL-17在AS患者中是相关联的分子,可能在AS发病机制中起重要作用。

IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7'二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化。结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)%高于正常人(47.20±4.26)%(P<0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异。结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高。IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力。

乙肝疫苗无、弱应答与B7-CD28及IL-12、IL-10的相关性

目的 研究乙肝疫苗无、弱应答与B7 CD2 8分子及IL 1 2、IL 1 0的相关性。方法 分离并培养乙肝疫苗强应答和无、弱应答者PBMCs ,以PHA或rHBsAg刺激。用流式细胞术检测培养细胞CD80、CD86及CD2 8的表达 ;酶标法检测上清IL 1 2、IL 1 0的水平 ;MTT法检测细胞增殖反应。结果 rHBsAg刺激后 ,无、弱应答组与强应答组比较 ,CD80和CD86的表达率、IL 1 2和IL 1 0水平、细胞增殖反应均降低 ,差异显著 ;但CD4+、CD8+细胞CD2 8的表达率无显著差异。PHA刺激后 ,上述指标在2组之间均无显著差异。结论 乙肝疫苗无、弱应答者一般的细胞免疫功能正常。抗 HBs低下与CD80、CD86表达及IL 1 2、IL 1 0产生不足等有关 ,但无T细胞CD2

自身免疫甲状腺病患者血清中IL-12和IL-18水平的分析

目的:提供自身免疫甲状腺病(AITD)患者体内Th1/Th2平衡紊乱的依据。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定27例Graves病(GD)、24例甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎(HT)、25例甲状腺功能低下的HT患者及20例正常对照者血清中IL12和IL18的浓度,并检测GD患者的甲状腺刺激性抗体。结果:GD患者与甲状腺功能正常的HT患者血中IL12、IL18水平无明显差异,但均高于正常对照者的相应水平。甲状腺功能低下的HT患者血中IL12和IL18的水平与正常对照者无差异。在GD和甲功正常的HT,IL18与IL12呈明显正相关。在GD,IL12和IL18均与其甲状腺刺激性抗体(TSAb)活性呈正相关。在甲状腺功能正常的HT还存在IL12和IL18二者与甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的显著性正相关。结论:提示Th1型细胞在GD和HT两种AITD的发病中均起重要作用。通过抑制Th2型免疫反应,促进向Th1型的转变来治疗GD时,有可能导致病情恶化。

结缔组织病并间质性肺病患者血清IL-32、IL-12的临床意义

目的探讨结缔组织病并间质性肺病患者(CTD-ILD)与非结缔组织病引起的间质性肺疾病(IFP+NSIP)患者及正常人外周血血清中白细胞介素32(IL-32)和白细胞介素12(IL-12)水平的差异及意义。方法选择8例结缔组织病并间质性肺病患者(CTD-ILD),其中包括6例类风湿性关节炎(RA)并间质性肺病患者(RA-ILD组),2例硬皮病(SSA)并间质性肺病患者(SSA-LD组);10例非结缔组织病引起的间质性肺疾病(IPF+NSIP),其中包括8例特发性肺间质纤维化患者(IPF组),2例非特异性间质性肺炎患者(NSIP组);选择10例正常人(control组),采用特异的酶联免疫吸附法测定外周血血清中IL-32、IL-12的水平。结果 CTD-ILD组外周血血清中IL-32、IL-12水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CTD-ILD组外周血血清中IL-32、IL-12水平明显高于IPF+NSIP组,差异有统计学意义(P<0.05)。

IL-12以及IL-12P40对子宫内异症患者NK细胞功能的免疫调节

目的 :通过观察正常人及子宫内膜异位症 (EM)患者外周血及腹腔液中IL 1 2、IL 1 2P40含量变化 ,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响 ,探讨IL 1 2、IL 1 2P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性。方法 :ELISA酶联免疫检测IL 1 2、IL 1 2P40含量以及MTT释放法检测NK细胞毒活性。结果 :①EM患者腹腔上清液可使正常人外周血NK细胞杀伤活性 ( 1 6 80 %± 3 6 % )明显下降 ( 8 37%± 4 5% ) (P <0 0 5)。②EM患者IL 1 2含量血清为 6 6 38± 1 2 6pg ml,低于对照组 84 97± 1 3 7pg ml( P <0 0 5) ;腹腔液中为 77 76± 1 4 6pg ml ,低于对照组 1 0 6 92± 1 0 7pg ml( P <0 0 5)。③EM患者IL 1 2P40含量血清为 35 6 4± 1 0 6pg ml,与对照组无明显差异 ;腹腔液含量为 79 76± 1 2 6pg ml ,高于对照组 40 54±1 0 0pg ml(P <0 0 5) ,并与疾病的程度呈负相关。④IL 1 2能增强NK细胞对子宫内膜细胞的杀伤 ,并呈剂量依赖。在 1 0ng ml浓度诱导后杀伤率为 31 90 % ,高于对照组的 1 6 80 %。⑤IL 1 2P40能拮抗IL 1 2对NK细胞活性的诱导 ,当加入IL 1 2P40后 ,使IL 1 2诱导的活性 ( 2 9 3% )下降为 1 9 36 %。结论 :子宫内膜异位症患者腹腔液中IL 1

生殖器疱疹患者血清IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ水平的研究

目的研究IL-8、IL-12、TNFα-、IFN-γ在生殖器疱疹发病机理中的作用。方法采用EL ISA双抗体夹心法,测定42例生殖器疱疹患者及30例正常人血清IL-8、IL-12、TNFα-、IFN-γ含量。结果生殖器疱疹患者血清IL-8、IL-12、IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.05或P<0.001),而TNF-α水平高于正常对照组(P<0.001)。同时IL-8与IL-12、IL-8与IFN-γ、IL-12与IFN-γ间存在正相关关系(P<0.01)。结论生殖器疱疹患者体内存在细胞因子表达异常,尤其是T h1、T h2细胞因子失衡。

绿脓杆菌制剂与IL-12在诱导人NK细胞IFN-γ产生中的协同作用

探讨绿脓杆菌制剂(piliated Pseudomonas Aeruginosa,PPA)与IL-12协同诱导人PBMC和NK细胞IFN-γ的产生。分离健康人PBMC和纯化NK细胞分别与培养液、PPA、IL-12或PPA+IL-12共同培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测无细胞培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析PPA和IL-12诱导IFN-γ产生的淋巴细胞亚群。结果显示,单独应用亚适剂量的IL-12或PPA刺激人PBMC或纯化NK细胞,不能诱导或只能诱导低水平IFN-γ的产生。当PPA和IL-12共同与人PBMC或纯化NK细胞孵育后,PPA呈时间和剂量依赖性与IL-12协同诱导PBMC和纯化NK细胞产生大量IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,PPA和IL-12协同诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。PPA与IL-12协同促进NK细胞IFN-γ的产生,提示PPA和IL-12能直接刺激NK细胞发生免疫应答。

中药复方多糖对鸡IFN-γ、IL-4和L-12质量浓度的影响

通过观察和比较盐酸左旋咪唑、黄芪多糖和对鼠免疫增强效果显著的中药复方多糖对雏鸡细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12质量浓度的动态变化,筛选出可显著提高雏鸡细胞因子质量浓度的中药复方多糖的最佳剂量。将300羽雄性良凤青脚麻鸡随机分为6组,即生理盐水组(对照)、黄芪多糖组(APS)、盐酸左旋咪唑组(LM)、高剂量中药复方多糖组(cCHMPSH)、中剂量中药复方多糖组(cCHMPSM)和低剂量中药复方多糖组(cCHMPSL),每组50只。于8日龄时分别皮下注射生理盐水、25g/L APS、50g/L LM、50g/L cCHMPS、25g/L cCHMPS、12.5g/L cCHMPS,每只注射0.2mL,连续注射7d,在免疫后第8、14、21、28、35、42天采血,测定外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度。结果表明,黄芪多糖和中药复方多糖均能显著提高外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度,调节Thl/Th2免疫平衡,并且中剂量中药复方多糖免疫效果优于黄芪多糖和高、低剂量中药复方多糖,提示中药复方多糖具有开发成疗效确切、稳定、无毒的免疫增强剂的潜力。

IL-12诱导肝癌微环境中NK细胞活化发挥抗肿瘤作用

目的:探讨IL-12通过诱导肝癌微环境中NK细胞活化诱导抗肿瘤的效果。方法:NOD/SCID小鼠皮下注射肝癌HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),建立HCC-huPBL荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为IL-12组和PBS对照组,瘤内注射IL-12后,观测荷瘤小鼠瘤体积、体重、一般状况的变化,IL-12瘤内注射后第30天ELISA法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中IL-12、INF-γ含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amin-otransferase,AST)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量,免疫组化法检测IL-12治疗后肝癌微环境中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46,以及抑制性受体KIR2DL3/CD158b、NKG2A/CD159a的表达。结果:第12、18、24、30天IL-12组荷瘤小鼠瘤体积均小于PBS组[(594.47±205.51)vs(832.10±187.49)mm3,(963.61±427.95)vs(1 350.87±468.23)mm3,(1 285.02±368.56)vs(1 975.49±655.54)mm3,(1 903.64±471.34)vs(2 568.77±784.68)mm3,均P<0.05]。IL-12组小鼠肝癌组织中IL-12与INF-γ的表达水平均明显高于PBS组[(2.96±1.02)vs(1.35±0.75)pg/ml,(12.26±4.11)vs(7.81±3.46)pg/ml,均P<0.05]。IL-12组与PBS组相比,血清ALT水平第7天显著升高[(73.85±10.71)vs(41.73±13.13)U/L;P<0.05],第14天达到高峰。IL-12组治疗后肝癌组织中NK细胞活化性受体NKG2D、NKp44、NKp30的表达较PBS组高(P<0.05),NKp46的表达未见明显升高;而NK细胞抑制性受体CD158b和CD159a表达较PBS组低(P<0.05)。结论:肝癌模型小鼠瘤体内IL-12注射可上调瘤组织内NK细胞活化性受体、IL-12、IFN-γ的表达,下调抑制性受体的表达,从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长。

寻常性银屑病皮损及非皮损中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达

目的检测寻常性银屑病患者皮损及非皮损处IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测寻常性银屑病患者皮损、非皮损处及正常人皮肤中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达水平。结果寻常性银屑病患者皮损中IL-23p19及p40(IL-23/IL-12)mRNA的表达均高于非皮损组织和正常皮肤组织(P<0.05),且非皮损处高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);IL-12p35mRNA在银屑病皮损处、非皮损处和正常对照中表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论在寻常性银屑病发病过程中,IL-23可能发挥较IL-12更重要的作用。

五加皮抗肿瘤活性物质Age对单核细胞产生TNF-α和IL-12的影响

目的 :研究五加皮抗肿瘤成分Age对单核细胞功能的影响 ,揭示Age抗肿瘤机制。方法 :使用对TNF敏感的L92 9细胞采用生物法测定了TNF含量 ,用ELISA法测定了IL 12的含量。用RT PCR法分析了单核细胞的细胞因子mRNA表达。用同位素法分析了Age对单核细胞吞噬功能的作用。结果 :Age与单核细胞共同培养后 ,单核细胞TNF α、IL 12等细胞因子的产生明显增加 (P <0 0 1) ,而且有较好的量效关系。在单核细胞与LPS的培养液中加入不同浓度的Age ,经培养后与单独加入LPS相比TNF α分泌的量显著增加 ,显示了Age对LPS的单核细胞刺激有相加作用。经Age处理后 ,单核细胞的TNF α、IL 12等细胞因子的mRNA表达也明显增强。体内实验结果也显示 ,Age对单核细胞的细胞因子产生有一定的影响。荷瘤小鼠经口连续投入Age后 ,血清中和脾脏分离的单核细胞体外培养上清中TNF α和IL 12含量明显提高 ,单核细胞TNF α、IL 12mR NA表达也明显增强 (P <0 0 1) ,从蛋白水平和分子水平证明了Age对单核细胞的细胞因子产生有促进作用。结论 :中药五加皮抗肿瘤有效成分Age对单核细胞有较强的刺激作用。通过促进其细胞因子的分泌和吞噬功能的增强杀伤肿瘤或抵抗肿瘤发生 ,所分泌的细胞因子还可通过调节免疫功能达到治疗肿瘤作用。该结果对五加皮?

IL-18、IL-12及相关因子在大鼠实验性自身免疫心肌炎心肌中的表达时程和特征

目的:探讨IL-18、IL-12及相关细胞因子在大鼠实验性自身免疫心肌炎(EAM)心肌中的表达时程和特征。方法:以猪心脏肌球蛋白加等体积弗氏完全佐剂,辅结核杆菌H37Ra株之乳液为抗原,于Lewis大鼠双后肢皮下注射造模(EAM);用胶原酶灌流和网筛过滤法分离纯化心肌细胞;经免疫组化技术评估心肌损伤程度;按实时荧光定量法测急性期和慢性期,IL-18、IL-12及相关因子(IL-18R,IL-18RAcPL,IL-18BP以及IL-12p40,IL-12p35,IL-12Rβ1,IL-12Rβ2)mRNA表达情况。结果:IL-18、IL-12及相关因子表达主要在急性期,免疫后2周表达增多并达峰值(P<0.01,与正常对照组比较),4周后减少,并与EAM病程正相关;IL-18、IL-12及相关因子主要在巨噬细胞表达,其受体复合物在αβT细胞表达;慢性期仅IL-18BP在心肌细胞有表达。结论:IL-18、IL-12及相关因子参与EAM病理过程,各因子主要集中于急性期巨噬细胞和αβT细胞表达。

人颗粒溶素与小鼠单链IL-12真核共表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

目的构建人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠单链IL-12基因的真核共表达载体pZM02并在RAW264.7细胞中进行表达。方法将人GLS和小鼠单链IL-12基因同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到真核共表达质粒pZM02,以pZM02转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过RT-PCR、免疫细胞化学和ELISA的方法检测目的基因的表达。结果在转染后的RAW264.7细胞中同时检测到了人GLS和小鼠IL-12的表达。结论人GLS能够与小鼠IL-12在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中实现共表达,pZM02的成功构建为进一步研究GLS与IL-12的协同细胞免疫作用机制和免疫治疗作用奠定了基础。

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-12和IL-18表达水平的影响及其作用机制

目的：观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（ EAMG）大鼠血清中IL-12、IL-18表达水平的影响，分析针灸治疗重症肌无力（MG）的作用机制。方法：采用乙酰胆碱受体α1（AchRα1）129～145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠，建立EAMG模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只，分为针灸治疗组10只、药物对照组10只及模型对照组10只，并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗，30 min／次，1次／d，7 d为1疗程，疗程间休息1 d，连续治疗2个疗程；药物对照组予以溴吡斯的明灌胃治疗，18.5 mg／（ kg· d），连续治疗15 d；其余2组不予任何特殊处置，仅作对照观察。治疗后抽取大鼠尾根静脉血，采用ELISA法测定大鼠血清中IL-12和IL-18的表达水平。结果：经治疗后，针灸治疗组、药物对照组与模型对照组比较，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平，均明显降低（ P＜0.05或P＜0.01）；针灸治疗组和药物对照组的组间比较显示，两组EAMG大鼠血清的IL-12和IL-18表达水平无显著性差异（ P＞0.05）。结论：“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清IL-12和IL-18的表达水平，从而达到治疗MG的作用，且其治疗效果与溴吡斯的明相近。