资癸益冲方通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路对卵巢颗粒细胞线粒体能量代谢的改善作用

目的探讨资癸益冲方对早发性卵巢功能不全(POI)体外模型线粒体能量代谢的影响。方法应用丙烯醛(ACR)干预人卵巢颗粒细胞KGN构建POI体外模型,给予资癸益冲方含药血清干预,设置对照组、ACR组、资癸益冲方组、EX527(SIRT1抑制剂)组、EX527+资癸益冲方组。流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA法检测细胞ROS水平,Mito-Trakine荧光标记法检测细胞线粒体数量,Seahorse法检测细胞线粒体氧化磷酸化水平,比色法检测细胞ATP水平,RT-qPCR法检测细胞mtDNA拷贝数和SIRT1、PGC-1α、Nrf1、TFAM mRNA表达,Western blot法检测细胞SIRT1、PGC-1α、Ac-PGC-1α、Nrf1、TFAM蛋白表达。结果与对照组比较,ACR组KGN细胞凋亡率和ROS水平升高(P<0.05,P<0.01),线粒体数量和mtDNA拷贝数减少(P<0.01),线粒体有氧呼吸基础值、呼吸最大值、储备值和ATP水平降低(P<0.05,P<0.01),SIRT1、PGC-1α、Nrf1、TFAM mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Ac-PGC-1α蛋白表达升高(P<0.01);与ACR组比较,资癸益冲方组以上指标均改善(P<0.05,P<0.01)。资癸益冲方与EX527联用后,逆转了前者对KGN细胞的上述作用(P<0.05,P<0.01)。结论资癸益冲方可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,改善ACR诱导的KGN细胞线粒体能量代谢障碍。

加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组)。采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,氧糖剥夺2、4、6、8 h后的PC12细胞活性均明显下降(P<0.05),选择氧糖剥夺6 h作为后续实验造模时间。与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P<0.05);细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,加味孔圣枕中丹10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

脑小血管病患者血清SIRT1水平与脑白质病变及认知障碍的相关性分析

目的研究脑小血管病(CSVD)患者血清沉默信息调节因子1(SIRT1)水平与脑白质病变严重程度及认知障碍的相关性。方法选择CSVD患者209例,ELISA法检测入院次日血清SIRT1水平。使用Fazekas量表对入组患者脑白质病变进行评分,并评估CSVD患者的腔隙性梗死、脑微出血和血管周围间隙增大。为评估SIRT1和CSVD疾病进展之间的关系,对CSVD的每个影像学标志物的负荷进行评分,并根据Fazekas量表评分将脑白质病变分为轻度无症状WMH组与中重度WMH组。分析入组患者血清SIRT1表达水平与不同程度的脑白质病变是否相关,以及血清SIRT1表达水平与患者认知功能之间的相关性。结果在多变量logistic回归分析中,校正了其他混杂因素后,SIRT1仍然是中重度WMH(OR=1.25,95%CI=1.034~1.512,P=0.021)的独立预测因素,血清SIRT1表达水平与腔隙性脑梗死(OR=0.979,95%CI=0.817~1.173,P=0.819),脑微出血(OR=0.996,95%CI=0.860~1.153,P=0.958)和中重度EPVS(OR=1.147,95%CI=0.956~1.377,P=0.141)无显著相关。此外,SIRT1与Fazekas评分(r=0.262,P=0.001)、EPVS负荷(r=0.237,P=0.001)呈正剂量依赖性显著相关。结论血清SIRT1水平与CSVD患者WMH严重程度呈剂量依赖关系,并与脑小血管病患者认知功能改变密切相关。这些发现为今后研究CSVD发生发展的病理生理学提供了线索。

miR-34a和SIRT1在盆腔器官脱垂中的表达研究

目的检测盆腔器官脱垂(POP)患者血清微小RNA-34a(miR-34a)、沉默信息调节因子1(SIRT1)水平,并探讨二者表达水平对POP的影响。方法将2019年1月至2020年5月冀中能源峰峰集团有限公司总医院诊治的74例POP患者纳入POP组,将86名同期健康体检的女性纳入对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-34a mRNA、SIRT1 mRNA、MMP-1 mRNA、fibulin-5 mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清弹力蛋白、Ⅰ型胶原蛋白水平;分析POP患者血清miR-34a mRNA、SIRT1 mRNA水平与弹力蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-1 mRNA、fibulin-5 mRNA相关性;分析影响POP发生的因素。结果 POP组miR-34a、MMP-1 mRNA水平高于对照组,SIRT1 mRNA、弹力蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、fibulin-5 mRNA水平低于对照组(P<0.05)。POP患者血清miR-34a与SIRT1 mRNA水平呈负相关(P<0.05)。miR-34a、SIRT1、弹力蛋白均是影响POP发生的相关因素(P<0.05)。结论 POP患者血清miR-34a呈高表达,SIRT1呈低表达,二者可能在POP的发生过程中发挥重要作用。

白藜芦醇对血清剥夺诱导大鼠皮层神经元自噬的影响

目的:研究白藜芦醇(RSV)对血清剥夺诱导大鼠神经元自噬的影响及分子机制。方法:将原代培养的大鼠皮层神经元分为对照组(control)、血清剥夺组(SD)、RSV处理组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX527处理组(RSV+EX 527),利用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞活性,免疫荧光染色检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达变化、Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达水平变化。结果:与正常对照组相比,血清剥夺引起细胞活性下降、SIRT1表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例减少,Beclin1表达降低(P <0. 05);经过RSV处理后,细胞活性增加(P <0. 05),大鼠神经元SIRT1表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例增加,Beclin1表达增加;使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制。结论:RSV通过激活SIRT1活性促进大鼠皮层神经元自噬。

miR-9-5p及其靶基因Sirt 1在华南地区2型糖尿病患者血清中的表达

目的探讨mi R-9-5p及Sirt1的表达量与华南地区2型糖尿病的相关性。方法构建含有野生型及缺失型mi R-9-5p结合位点的Sirt1 3'-UTR报告基因载体,行荧光素酶报告基因。收集华南地区123例糖尿病患者和130例正常者的血清标本,采用q RT-PCR技术检测血清中mi R-9-5p的表达量,采用ELISA检测血清中Sirt1蛋白的表达量。分析mi R-9-5p、Sirt1的表达量与华南地区2型糖尿病的相关性。结果 mi R-9-5p可显著下调野生型而非缺失型Sirt1报告基因的荧光素酶活性,提示mi R-9-5p可靶向调控Sirt1。此外,在2型糖尿病患者血清中mi R-9-5p与Sirt1表达呈负相关(r=-0.087,P=0.033);在正常对照组血清中mi R-9-5p与Sirt1表达也呈负相关(r=-0.076,P=0.041)。且mi R-9-5p的表达量与2型糖尿病患者的年龄呈正相关,而Sirt1则相反(P均<0.05);mi R-9-5p及Sirt1的表达与2型糖尿病患者的性别无关。结论在华南地区2型糖尿病患者血清中,mi R-9-5p高表达,Sirt1低表达,mi R-9-5p联合Sirt1有望成为早期诊断2型糖尿病的联合指标。

急性冠脉综合征患者血清Sirtuin 1与冠脉病变相关

目的探讨急性冠脉综合征患者血清Sirtuin 1(SIRT1)水平与冠脉病变的相关性和影响冠脉病变的因素。方法分析81例中日友好医院心脏科急性冠脉综合征住院患者的临床数据,酶联免疫吸附测定法检测外周静脉血血清SIRT1水平,血运重建前进行SYNTAX评分评估冠脉病变程度。根据SYNTAX评分中位数将患者分为高SYNTAX评分(冠脉病变重度,n=38)和低SYNTAX评分(冠脉病变轻度,n=43)两组。建立多因素线性回归模型,统计分析影响急性冠脉综合征患者SYNTAX评分的因素。结果高SYNTAX评分组患者血清SIRT1水平[379.38(490.14)ng/L vs.242.95(173.85)ng/L,P<0.001]和冠心病家族史阳性率(42.11%vs.20.93%,P=0.039)显著高于低SYNTAX评分组患者,其余临床参数两组间差异无统计学意义。血清SIRT1水平与SYNTAX评分呈显著线性正相关(R=0.452,P<0.010)。多因素线性回归分析结果提示,血清SIRT1(ln处理后)、年龄和估计肾小球滤过率是急性冠脉综合征患者SYNTAX评分(ln处理后)的独立影响因素(Adjusted R2=0.330,P<0.001)。结论本研究首次探讨血清SIRT1和急性冠脉综合征患者冠脉病变程度的相关性,临床医生应注意识别高危患者,制订合理的血运重建策略,努力改善患者预后。

基于H4K16ac介导的细胞自噬探讨电针血清对脑缺血后神经元的保护机制

目的从组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)对细胞自噬调控的角度,研究电针血清对脑缺血后神经元的保护机制。方法电针血清的制备:建立改良的大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,在造模成功后5 min和16 h进行电针干预,针刺人中、百会穴,并接电针治疗仪治疗30 min。第2次电针治疗后7 h取大鼠血清备用。细胞实验:将大鼠大脑皮质神经元细胞分为对照组、模型组、电针组、组蛋白乙酰转移酶MOF(hMOF)抑制剂组与细胞沉默调节蛋白1(Sirt1)抑制剂组,除对照组外,其余各组剥夺氧、糖3 h后再复氧、复糖24 h,并于复氧、复糖的同时给予2%电针血清、15 g/L的hMOF siRNA及8 g/L的Sirt1 siRNA处理。CCK-8检测细胞处理48 h后细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞处理48 h后细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中hMOF、Sirt1、组蛋白H4第16位赖氨酸的乙酰化(H4K16ac)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin1表达;qPCR检测hMOF、Sirt1、Beclin1 mRNA表达;染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测各组神经元细胞的H4K16ac在自噬靶基因Beclin1启动子区的结合程度。结果与模型组相比,电针干预可使细胞增殖活性提高(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.05)。与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可降低hMOF和H4K16ac蛋白的表达(P<0.05),升高Sirt1、LC3-II和Beclin1的表达(P<0.05);而与Sirt1抑制剂组差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示,与模型组比较,电针组和hMOF抑制组剂均可抑制hMOF mRNA表达(P<0.05),而Sirt1和Beclin1 mRNA表达上调(P<0.05)。且与模型组相比,电针组在自噬靶基因Beclin1启动子区域中H4K16ac的富集量增加(P<0.05)。结论电针血清对糖-氧剥夺再灌注损伤神经元细胞具有保护作用,其抗脑缺血再灌注损伤的作用可能是电针通过调节组蛋白H4K16ac的表达进而调控细胞自噬,从而减轻脑缺血再灌注损伤,发挥对神经细胞的保护作用。