NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景:目前已有针对lncRNA\miRNA\mRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的:探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法:取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、miRNA组、ceRNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论:①苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破坏,出现表层糜烂、裂缝形成和软骨组织局部或全层缺失,并随时间延长软骨损伤程度逐渐加重,4组中miRNA组关节软骨炎症进展最缓慢;②qRT-PCR检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量高于其他3组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量低于其他3组(P<0.05);造模后第8,12周,miRNA组软骨组织中的NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量低于ceRNA组、对照组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);③Western Blot检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量始终低于其他3组(P<0.05);miRNA组造模后第8,12周软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);④结果表明,miR-146a-5p作为NONHSAT248596.1的作用靶点会受到其竞争性内源性RNA的作用造成活性被抑制,NONHSAT248596.1作用于miR-146a-5p后调控基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴,影响骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达,造成细胞外基质的降解及蛋白多糖的丢失。

miR-146a调控TLRs信号通路对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的影响

目的:观察miR-146a调控TLRs信号通路对活动期类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的影响。方法:选取20例活动期类风湿关节炎患者,对患者外周血单个核细胞分离培养,分为LPS组和LPS+miR-146a组;同时选取10例健康体检者为健康对照组。采用MTT法测定吸光度,比较外周血单个核细胞变化,检测外周血单个核细胞的凋亡情况。RT-PCR法检测外周血单个核细胞miR-146a、Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)mRNA表达。Western blot法检测外周血单个核细胞miR-146a、TLR2、MyD88蛋白表达。结果:LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞TLR2表达明显升高(P<0.05);LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞中miR-146a、TLR2、MyD88 mRNA表达明显升高(P<0.05);LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞miR-146a、TLR2、MyD88蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:高表达miR-146a可能通过依赖TLR2/MyD88信号通路,抑制活动期类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中TLR2、MyD88表达,减轻炎症反应。

急性脑梗死患者血清miR-27b和miR-146a表达及其与颈动脉狭窄的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者血清miR-27b和miR-146a表达并分析其与颈动脉狭窄的相关性。方法 选取120例ACI患者作为观察组,再选取同期65名健康体检者作为对照组。根据颈动脉狭窄程度将ACI患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、完全闭塞组。检测被试者血清miR-27b和miR-146a表达,分析ACI患者血清miR-27b和miR-146a的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-27b和miR-146a表达对ACI的诊断价值,再以Pearson相关性分析法分析血清miR-27b和miR-146a表达与颈动脉狭窄的相关性,行多因素Logistic回归分析探讨影响ACI发生的危险因素。结果 观察组患者血清miR-27b表达高于对照组,血清miR-146a表达低于对照组(P<0.01)。血清miR-27b和miR-146a表达对ACI诊断价值的ROC曲线显示,单独检测时血清miR-27b的敏感度最高,miR-146a的特异度最高,两者联合检测时曲线下面积可达0.986。不同颈动脉狭窄程度ACI患者血清miR-27b和miR-146a表达水平不同,其中轻度狭窄组miR-27b表达最低,miR-146a表达最高,而完全闭塞组miR-27b表达最高,miR-146a表达最低,各组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-27b表达与颈动脉狭窄程度呈正相关(r=0.775,P<0.01),血清miR-146a表达与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.622,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-27b、miR-146a表达为ACI患者发生中、重度颈动脉狭窄的影响因素(P<0.01)。结论 ACI患者血清miR-27b表达升高,miR-146a表达降低,可作为临床诊断ACI的潜在指标,且两者联合检测的价值高于单独检测。

miR-146b-5p调控CD82介导食管鳞状细胞癌恶性表型

目的探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146b-5p的下游靶基因;Western-blot实验结果显示,相比NC组,KD组CD82在蛋白水平显著性上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,wt+mimic组荧光强度较mut+mimic组显著性下降(P<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向调控CD82促进食管鳞状细胞癌细胞的迁移,为食管鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作后继发脑梗死的临床价值

目的探讨颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作(TIA)后继发脑梗死的临床应用价值。方法选取我院收治的90例TIA患者,根据TIA后30 d内是否继发脑梗死分为脑梗死组42例和非脑梗死组48例,比较两组临床资料、颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a的差异。采用Logistic回归分析筛选TIA后继发脑梗死的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分、血清miR-146a单独及联合应用预测TIA后继发脑梗死的诊断效能。结果脑梗死组与非脑梗死组颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a均为TIA后继发脑梗死的独立危险因素(OR=2.807、2.680、2.762,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a预测TIA后继发脑梗死的曲线下面积分别为0.892、0.854和0.889,其联合应用的曲线下面积为0.925。结论颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a在预测TIA后继发脑梗死中具有较好的临床应用价值。

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景:mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的:验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法:将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论:脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P<0.05),胰岛素样生长因子1的表达较假手术组上升(P<0.05)。与NC组和NC-mimics组比较,mi R-146a-3p mimics组星形胶质细胞凋亡率增加(P<0.01),增殖能力下降(P<0.01),迁移数量减少(P<0.01)。结果表明,脊髓损伤后脊髓组织中mi R-146a-3p表达量下降,胰岛素样生长因子1表达量上升;在星形胶质细胞中mi R-146a-3p靶向调节胰岛素样生长因子1抑制星形胶质细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。

急性冠状动脉综合征患者PCI治疗前后血清miR-34a、miR-146a水平变化及近期预后预测价值

目的探讨急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清微小RNA-34a(miR-34a)、微小RNA-146a(miR-146a)水平变化及近期预后预测价值。方法选取2018年2月~2020年6月收治的拟行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术的ACS患者86例,所有研究对象均采用Judkins法进行冠脉造影,并根据造影图像结果中冠脉血管狭窄程度分为单支病变组(23例),双支病变组(36例),三支病变组(27例);同时对冠脉造影结果进行Gensini评分,<50分为轻度病变组(46例),50~90分为中度病变组(30例),>90分为重度病变组(10例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测ACS患者PCI术前、术后1个月的miR-34a、miR-146a的表达水平。并随访ACS患者术后1年内主要不良心血管事件(MACE)的发生情况,并根据是否发生MACE事件分为MACE组与非MACE组,比较两组血清miR-34a、miR-146a的表达水平。结果ACS患者PCI术前血清miR-34a、miR-146a水平明显高于PCI术后(P<0.001);ACS患者冠脉中度病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于轻度病变组(P<0.001),而重度病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于中度病变组与轻度病变组(P<0.001);ACS患者冠脉双支病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于单支病变组(P<0.05);而三支病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于双支病变组与单支病变组(P<0.05);MACE组患者血清miR-34a、miR-146a表达水平显著高于非MACE组(P<0.001)。结论PCI可明显降低ACS患者体内血清miR-34a、miR-146a的表达水平。而血清miR-34a、miR-146a的表达水平随着冠脉病变程度的加重而增高,故可通过血清miR-34a、miR-146a来预测冠脉的病变程度。同时监测ACS患者PCI术后的血清miR-34a、miR-146a的表达水平也具有重要意义,能预防MACE事件的发生。

miR-146a及MUC5AC在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-146a(miR-146a)及黏蛋白5AC(MUC5AC)在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及其临床意义。方法:选取2022年1月—2023年1月新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科所收治的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者40例(观察组)及同期因鼻外伤、鼻中隔偏曲、单纯鼻窦囊肿接受手术治疗患者40例(对照组)。检测对照组鼻黏膜组织和观察组鼻息肉组织的miR-146a水平及MUC5AC水平,并分析两组的VAS评分、鼻内镜评分,以及鼻息肉组织的miR-146a、MUC5AC表达水平与VAS评分、鼻内镜评分、炎症细胞百分比的相关性。结果:观察组miR-146a水平低于对照组,MUC5AC水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);鼻息肉组织中的miR-146a水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈负相关(r=-0.637、-0.339,P<0.05),而MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈正相关(r=0.525、0.471,P<0.05);miR-146a的表达水平与嗜酸性粒细胞的百分比呈负相关(r=-0.701,P<0.05),MUC5AC的表达水平与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(r=0.587,P<0.05),miR-146a、MUC5AC的表达水平与中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均无相关性(P>0.05)。结论:在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉疾病诊断中,鼻息肉组织的miR-146a水平低表达及MUC5AC水平高表达均提示病情加重,均与组织炎性程度有关。

miR-146a调控TLR4/NF-κB通路对脑出血模型大鼠的保护作用及机制研究

目的:探索miR-146a调控TLR4/NF-κB通路对脑出血模型大鼠炎症损伤及神经保护的作用及可能作用机制。方法:选取40只大鼠,随机分为假手术组、模型组、过表达miR-146a腺病毒注射组及阴性病毒注射组,每组10只。Garcia评分评定神经功能;HE染色观察脑组织改变;ELISA检测炎症因子水平;Western blot及RT-PCR检测脑组织TLR4、NF-κB蛋白、基因表达。结果:与模型组相比,过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠神经功能评分升高(P<0.05)。模型组大鼠脑组织细胞形态异常,伴有水肿及炎症;过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠脑组织细胞形态改善,水肿及炎症减轻。模型组大鼠炎症因子水平较假手术组升高(P<0.05);过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠炎症因子水平较模型组下降(P<0.05)。模型组大鼠TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达较假手术组增加(P<0.05);过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达较模型组下降(P<0.05)。结论:miR-146a可改善脑出血模型大鼠神经功能,减轻炎症损伤,可能通过抑制脑组织TLR4/NF-κB信号通路激活降低炎症因子水平实现。

下调miR-146a对肺部细菌感染大鼠干预及作用机制

目的分析下调miR-146a对肺部细菌感染大鼠的干预效果及作用机制。方法选取周龄在4~6 w的SPF健康雌性SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、空白组、miR-146a转染组,各10只,通过敲低miR-146a实现miR-146a下调,100 nmol/L转染miRNA抑制剂转染miR-146a为miR-146a转染组,模型组、假手术组、空白组使用100 nmol/L转染miRNA抑制剂转染无意义序列。24 h后处死大鼠,统计分析各组miR-146a相对表达、白细胞介素(IL)-4、IL-1β、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、糖链抗原(KL-6)、水性表面活性蛋白(SP-D)、肺泡动脉血氧分压(PaO_(2))、氧合分压〔PaO_(2)/吸入气氧浓度(FiO_(2))〕水平。结果miR-146a转染组miR-146a相对表达明显低于模型组、空白组,明显高于假手术组(P<0.05);模型组、空白组miR-146a相对表达明显高于假手术组(P<0.05);模型组、空白组miR-146a相对表达比较无显著差异(P>0.05)。miR-146a转染组PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)明显低于假手术组、空白组,明显高于模型组(P<0.05);空白组以上指标明显高于模型组(P<0.05),与假手术组无明显差异(P>0.05);模型组以上指标明显高于假手术组(P<0.05)。miR-146a转染组IL-4、IL-1β、IFN-γ、TNF-α、TGF-β、KL-6、SP-D水平明显低于模型组,明显高于空白组、假手术组(P<0.05);空白组以上指标明显低于模型组(P<0.05),与假手术组无明显差异(P>0.05);模型组以上指标明显高于假手术组(P<0.05)。结论下调miR-146a可以有效抑制肺部细菌感染大鼠炎症反应,改善肺部气体交换,同时也可发挥减轻肺组织病理损伤,起到抑制病原菌的效用。

肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系探讨

目的:探讨肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系。方法:选取2021年1月-2023年4月于我院进行手术治疗的163例肺癌患者为研究对象,根据术后3d是否发生肺部感染将患者分为感染组(28例)和未感染组(135例)。比较2组术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a水平,分析术后24h血清各指标水平与临床有差异指标的相关性,Logistic回归分析术后发生肺部感染的危险因素,ROC分析术后24h血清各指标联合检测对术后发生肺部感染的预测价值。结果:2组合并糖尿病、合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分比较,差异显著(P<0.05);术后24h感染组血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平高于未感染组,且各指标水平与合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分均呈正相关(P<0.05);合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分、术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平为肺癌患者术后发生肺部感染的危险因素,且血清各指标联合预测术后发生肺部感染的AUC为0.817,大于各单项指标(P<0.05)。结论:肺癌患者术后并发肺部感染人群血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达上调,其联合检测可作为早期预测术后是否发生肺部感染的有效指标。

乌梅丸通过调控miR-146a对溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨乌梅丸通过调控miR-146a对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠细胞凋亡的影响及机制。方法:选取50只SD大鼠,每组10只,分为正常对照组、模型组、乌梅丸低、中、高剂量组,转染anti-miR-NC、anti-miR-146a、miR-NC、miR-146a,作为anti-miR-NC组、anti-miR-146a组、乌梅丸+miR-NC组、乌梅丸+miR-146a组。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞miR-146a表达;ELISA检测细胞IL-1β、IL-13含量;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bax蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-13含量、miR-146a表达升高(P<0.05);与模型组比较,乌梅丸显著升高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-13含量、miR-146a表达(P<0.05)。抑制miR-146a可提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、IL-1β、IL-13含量、Bax蛋白表达(P<0.05)。过表达miR-146a表达逆转乌梅丸对UC大鼠结肠细胞增殖和凋亡的影响。结论:乌梅丸通过上调miR-146a表达降低UC大鼠结肠细胞凋亡。

超声造影定量参数联合外周血单个核细胞miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的评估价值

目的探讨超声造影定量参数联合外周血单个核细胞(PBMC)miR-34a、miR-146a对乳头状甲状腺癌(PTC)诊断和淋巴结转移的评估价值。方法选取104例PTC患者,根据病理诊断分为甲状腺癌组69例和良性组35例;根据是否发生淋巴结转移,将69例甲状腺癌患者分为未转移组33例和转移组36例。比较各组超声造影定量参数峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、平均通过时间(MTT)、曲线下面积(AUC)和PBMC中miR-34a、miR-146a水平。采用ROC分析超声造影参数联合P BMC miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的评估价值。结果与良性组比较,甲状腺癌组超声造影定量参数及P BMC miR-34a水平均降低(P<0.05),而miR-146a水平升高(P<0.05)。与未转移组比较,淋巴结转移组PI、AUC、miR-146a水平升高(P<0.05),而TTP、MTT、miR-34a水平降低(P<0.05)。超声造影定量参数与PBMC miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的AUC均高于各项指标单独检测值(P<0.05)。结论联合应用超声造影定量参数与PBMC miR-34a、miR-146a指标检测能增强PTC早期诊断与淋巴结转移的评估效能。

miR-146a、miR-23b水平与前列腺癌患者术前临床分期及预后的关系

目的 探索miR-146a、miR-23b表达水平与前列腺癌(PCa)患者术前临床分期及预后的关系。方法 选取2019年3月-2020年3月期间重庆市丰都县人民医院收治的70例PCa患者和70例良性前列腺增生症(BPH)患者,设为PCa组和BPH组,入组后分别进行前列腺组织取样,检测两组前列腺中miR-146a、miR-23b表达水平,分析miR-146a、miR-23b表达与PCa患者临床病理特征及预后的相关性。结果 PCa组miR-146a、miR-23b表达低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);术前PCa患者miR-146a、miR-23b水平随Gleason评分和临床T分期升高而逐次下降(P<0.05);PCa患者术前存在淋巴结转移者miR-146a、miR-23b水平低于无转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PCa患者术前前列腺组织miR-146a、miR-23b表达水平分别与临床分期呈现负相关(r=-0.758、-0.760,均P<0.05);截止随访,预后不良的PCa患者miR-146a、miR-23b低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a、miR-23b联合检测预测PCa预后AUC高于单一检测指标(P<0.05)。结论 PCa患者前列腺组织中miR-146a、miR-23b表达较低,且与临床分期相关,miR-146a、miR-23b表达水平对患者不良预后有一定预测价值。

miR-146a通过调节IPr1基因对结核分枝杆菌感染的AEC Ⅱ型细胞活性作用机制

目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mimics)。RT-PCR检测AECⅡ细胞miR-146a、Ipr1基因表达;CCK8检测AECⅡ细胞增殖;流式细胞仪检测AECⅡ细胞凋亡;双荧光素酶报告测定Ipr1与miR-146a靶向关系。结果 DIO荧光染色的Mtb在感染人AECⅡ细胞12 h内会进入细胞质基质中,并围绕细胞核分布,表明建立的结核分枝杆菌感染模型成功;结核组与NC组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达比较无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达水平升高(P<0.05);结核组与NC组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值比较均无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值均升高(P<0.05);结核组AECⅡ细胞凋亡率与NC组相比无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞凋亡率显著降低(P<0.001)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-146a后野生型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性升高(P<0.05),突变型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性无明显变化(P>0.05),表明Ipr1是miR-146a的靶基因。结论 过表达的miR-146a可增加Mtb感染的AECⅡ细胞活性,降低凋亡,研究机制认为可能与通过激活Ipr1水平相关。Ipr1是miR-146a靶基因,可通过激活表达而发挥减少Mtb对AECⅡ细胞活性的损伤。

弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义探究

目的:探讨分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义。方法:选取DLBCL患者76例(纳入DLBCL组)及淋巴结反应性增生(RHL)患者70例(纳入RHL组),采用实时荧光定量PCR法检测所有患者淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平,并分析二者的表达水平与DLBCL临床特征的关系。结果:miR-193a-3p及miR-146b-5p在DLBCL组中的表达水平均低于RHL组(P<0.05),二者的表达水平与Ann-Arbo分期、国际预后指数(IPI)评分有关。miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平与DLBCL的临床分期呈负相关,随着miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平的降低,DLBCL临床分期越高(P<0.05)。淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达下调是DLBCL临床高分期的危险因子(OR>1,P<0.05)。结论:DLBCL组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平下调,可能参与了DLBCL的发生、发展,二者的表达水平与DLBCL的临床分期有关,可作为DLBCL临床诊治的重要参考依据。

大黄提取物通过上调miR-146a调控PI3K/Akt信号通路影响非小细胞肺癌增殖的机制

目的探讨大黄提取物调控miR-146a对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及机制。方法采用浓度分别为10、20、40μg/ml的大黄提取物处理A549细胞,设不同浓度大黄提取物组和对照组。将miR-NC、miR-146a转染至A459细胞中,并采用大黄提取物处理,记为miR-NC组和miR-146a+大黄提取物组;将anti-miR-146a转染至细胞中,并用大黄提取物处理,记为anti-miR-146a+大黄提取物组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖作用;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-146a表达水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western印迹检测磷酸化(p)-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果大黄提取物可以显著抑制细胞增殖,且呈时间剂量依赖性(P<0.05);与miR-NC组相比,其余组细胞增殖率显著较低,而miR-146a+大黄提取物组显著低于anti-miR-146a+大黄提取物组(P<0.05);与miR-NC组相比,40μg/ml大黄提取物组与miR-146a+大黄提取物组miR-146a水平显著较高,anti-miR-146a+大黄提取物组显著较低(P<0.05);与miR-NC组相比,其余各组细胞凋亡率显著较高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著较低(P<0.05)。结论大黄提取物可以用过上调miR146a抑制NSCLC细胞增殖,其机制可能是通过调控PI3K/Akt信号通路实现的。

子痫前期蜕膜巨噬细胞源性外泌体来源miR-146a-5p通过靶向HIF1α抑制滋养细胞的活力和侵袭能力

目的:探究蜕膜巨噬细胞源性外泌体miR-146a-5p对子痫前期滋养细胞的作用及其分子机制。方法:收集子痫前期(preeclampsia,PE)患者和正常妊娠女性蜕膜组织,使用密度梯度法与流式细胞术分选获得巨噬细胞,提取蜕膜巨噬细胞源性外泌体;为了鉴定外泌体,采用透射电镜观察结构,western blot验证外泌体CD63蛋白表达;采用CCK-8检测外泌体对滋养细胞活力的影响;Transwell实验检测滋养细胞迁移变化;qPCR检测外泌体中miR-146a-5p的表达;western blot检测滋养细胞中HIF1α蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测miR-146a-5p与HIF1α是否存在结合位点。结果:巨噬细胞外泌体呈现直径约30~130 nm的中间凹陷“饼状”结构形态,CD63高表达,符合外泌体特征。与正常组相比,PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体显著降低滋养细胞增殖与迁移(P<0.001)。PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体中miR-146a-5p表达量显著下降,蜕膜巨噬细胞源性外泌体处理滋养细胞后滋养细胞中HIF1α蛋白表达显著升高,miR-146a-5p和HIF1α之间存在靶向结合位点。结论:PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体可以降低滋养细胞增殖与迁移,这可能与外泌体miR-146a-5p表达下降,从而促进滋养细胞HIF1α蛋白表达有关。

miR-146b过表达对脂多糖刺激仔猪肠上皮细胞Toll样受体4基因表达和促炎因子产生的影响

本研究旨在探讨miR-146b过表达对脂多糖(LPS)刺激仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)Toll样受体4(TLR4)基因表达和促炎因子产生的影响。首先利用LPS刺激IPEC-J2细胞,然后使用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测LPS刺激对IPEC-J2细胞中TLR4和促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和干扰素-γ(IFN-γ)等的mRNA表达以及对分泌到细胞培养液中促炎因子含量的影响。在此基础上,通过miR-146b mimic细胞转染试验,探讨miR-146b过表达对LPS刺激的IPEC-J2细胞中TLR4的mRNA表达和促炎因子产生的抑制作用。结果表明:1)与未刺激处理相比,LPS刺激处理的IPEC-J2细胞中TLR4、IL-1β、TNF-α、IL-8和IFN-γ的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),细胞培养液中TNF-α、IL-8和IFN-γ含量极显著升高(P<0.01)。2)与LPS处理相比,LPS+miR-146b mimic处理的miR-146b的相对表达量极显著升高(P<0.01),IPEC-J2细胞中TLR4、TNF-α、IL-8和IFN-γ的mRNA相对表达量分别显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞培养液中TNF-α、IL-8和IFN-γ含量极显著降低(P<0.01)。由此可见,miR-146b在LPS刺激的IPEC-J2细胞中可通过抑制促炎因子的产生发挥抗炎作用。

大蒜素对PC-3细胞生物学行为及miR-146a-5p表达的影响

目的探讨大蒜素对PC-3细胞生物学行为及miR-146a-5p表达的影响。方法取PC-3细胞株分为A组(无药物干预的PC-3细胞株)、B组(A组+25μmol/L大蒜素溶液)、C组(A组+50μmol/L大蒜素溶液)及D组(A组+100μmol/L大蒜素溶液),采用噻唑蓝(MTT)检测PC-3存活率,Hoechst染色检测凋亡程度,Transwell小室检测侵袭数目,Western印迹检测ROCK1及Rhoc蛋白,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测时增加E组(D组+miR-146a-5p激动剂)检测5组ROCK1、Rhoc及miR-146a-5p mRNA表达。结果A、B、C、D组细胞存活率、侵袭数目、ROCK1和Rhoc蛋白及mRNA依次降低,凋亡率及miR-146a-5p mRNA依次增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大蒜素能够抑制PC-3细胞生物学增殖和侵袭,增加凋亡,并呈现浓度依赖性,这与激活miR-146a-5p减少ROCK1、Rhoc表达相关。