三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

PFNA和ALP治疗股骨转子间骨折患者的疗效及对血清SO、DKK-3水平的影响

目的 探究股骨近端防旋型髓内钉(PFNA)和股骨近端解剖型锁定钢板(ALP)治疗股骨转子间骨折患者的疗效及对血清骨硬化蛋白(SO)、Dickkopf-3(DKK-3)水平的影响.方法 选取我院2021年4月1日~2023年3月31日符合条件的78例股骨转子间骨折患者,按照抽签法分为对照组(n=39)和研究组(n=39).对照组患者采用ALP髓外固定治疗,研究组患者采用PFNA髓内固定治疗.评估两组患者的手术相关临床指标、并发症情况以及治疗前后的Harris评分、血清DKK-3与SO水平.结果 研究组患者的手术时间、住院时间、下地负重时间、切口长度明显短于对照组,术中出血量明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组髋内翻、内固定物松动、感染、静脉血栓、压疮、关节脱位等并发症的总发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组疼痛、功能、活动度评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组疼痛、功能、活动度评分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组血清DKK-3、SO水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组血清DKK-3、SO水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 相较于ALP髓外固定治疗,PFNA髓内固定治疗在股骨转子间骨折患者中的应用效果更好,可加速患者术后恢复速度,提高患者髋关节功能,降低并发症发生率,并改善患者血清DKK-3、SO水平.

虎红平板实验防控布病存在的问题及对策

布鲁氏菌病是一种人兽共患传染性病,过去主要在北方流行,进入2000年后随养殖业的发展,传播范围逐步扩大,现在已经波及全国。该病是由布鲁氏菌感染引起的,一般由患病的牛、羊、猪等家畜传染给人。家畜患布鲁氏菌病常常出现流产、不孕、空怀、繁殖成活率降低、使牲畜头数明显减少、产肉、产奶量下降。直接影响着畜牧业的发展各农民致富。布病的诊断以血清学诊断为主,基层常见的布病诊断方法为虎红平凝集试验,这种检测方法有价格便宜,方便等优点,但是也存在一些不足,我就不足之处说几点自己的看法,并提出改进的办法。

无偿献血者HBsAg筛检方法与试剂价值评价

目的 :评价无偿献血者HBsAg筛检方法与试剂筛检价值 .方法 :以卫生部临床检验中心HBsAg临床科研血清盘样本 6 0份及随机抽取 2 0 0份西安市无偿献血者血清为评价样本 ;用国产试剂条法、国产ELISA试剂及进口ELISA试剂对评价样本作盲法筛检 ;以卫生部临床检验中心血清盘及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准 ,用四格表法计算评价真实性及可靠性指标 ,并对ELISA法cut off值的合理性进行评价 .结果 :国产艾康试剂条、国产英科新创ELISA与进口意大利富源ELISA试剂的灵敏度分别为 6 2 % ,86 % ,1 0 0 % ;特异度分别为 99% ,1 0 0 % ,96 % ;尤登指数分别为 0 .6 1 ,0 .86 ,0 .96 ;3种试剂的重复符合率均为 1 0 0 % ;国产英科新创规定的cut off值较合理 ,进口意大利富源HBsAgELISA试剂盒cut off值规定值偏小 .结论 :3种方法与试剂的灵敏度以进口意大利富源试剂盒最好 ,但特异度比国产试剂差 ,3种试剂的重复性均好 ,3种试剂联合筛检可保证输血的安全性 ,试剂条法灵敏度虽差 ,但特异度达 99% ,在无偿献血者的粗筛快检中可降低血液报废率 ,仍有其临床应用价值 .如能使国产HBsAg筛检试剂灵敏度提高 ,进口HBsAg筛检试剂特异度增高 ,将使临床应用价值更大 .

鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清的研制

利用分离鉴定的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌，分别经细菌培养、灭活、浓度调整等方法研制诊断用鸡志贺氏菌凝集抗原，并用鸡志贺氏菌疫苗免疫清洁级小白鼠研制鸡志贺氏菌标准血清。结果显示，制备细菌抗原的最佳培养基是1％葡萄糖营养琼脂，抗原最佳灭活温度和时间为121℃和120min，凝集抗原合适浓度为40亿／mL，最佳稀释液为pH7．2的0．5％石炭酸生理盐水。制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌阳性血清经效价测定分别可达8log2和10log2，阴性血清与鸡志贺氏菌凝集抗原作用无凝集反应发生。通过研究同时确定了平板凝集试验反应的合适温度为20～35℃，结果判定时间为3～5min。研制的凝集抗原及其标准血清具有特异性强、稳定性好、使用方法简便、便于保存和检测结果准确可靠等优点，便于在基层生产单位推广应用。

河南省鸡志贺氏菌病和鸡白痢的血清流行病学调查

为了解腹泻病鸡群中鸡志贺氏菌病和鸡白痢的发生情况，利用鸡鲍氏型、鸡痢疾型志贺氏菌凝集抗原和鸡白痢鸡伤寒多价抗原对河南省6个县市52家鸡场的鸡血清进行血清抗体检测。结果显示：鸡鲍氏型、痢疾型志贺氏菌血清抗体阳性率分别为31．5％和14．6％，鸡白痢为3．2％。所有县市的鸡鲍氏型志贺氏菌血清抗体阳性，4／5的县市鸡痢疾型和鸡白痢血清抗体阳性；78．8％的鸡场为鲍氏型血清抗体阳性，61．2％的鸡场为痢疾型血清抗体阳性，24．4％鸡场为鸡白痢血清抗体阳性。不同鸡群中，鸡鲍氏型血清抗体阳性率为4．4％～85．7％，鸡痢疾型为0．0～60．0％，鸡白痢为0．0～30．0％。不同品种鸡中，罗曼鸡鲍氏型、痢疾型血清抗体阳性率都较高，其次为固始鸡。不同日龄中，22～28日龄鸡的血清抗体阳性率最高，鸡鲍氏型为68．8％，鸡痢疾型为27．1％，而鸡白痢仅为6．5％。混合感染中，鸡鲍氏型和痢疾型混合感染占待检血清总数的10．1％。

速率法与微板法测定定值血清谷丙转氨酶比较

目的 :比较速率法和微板法测定定值质控血清中谷丙转氨酶 (ALT)的准确性和精密度。方法 :应用方法学研究对2种方法测定结果进行比较 ,并进行统计学分析。结果 :速率法测定批号为296UN和141UE的定值血清的偏差率分别为 -2.82 %和 -0.30 % ,微板法的偏差率分别为 -9.23 %和 -5.41 % ;速率法测定两定值血清的批内不精密度分别为2.29 %和0.81 % ,微板法分别为12.03 %和5.32 % ,2种方法的测定结果差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。速率法测定两定值血清的日间不精密度为3.86 %和1.13 % ,微板法为23.92 %和19.44 %。结论 :有条件的采供血单位应当使用自动生化分析仪测定ALT。

跗骨窦切口微创钢板及空心钉轴向内固定联合术后低分子肝素治疗跟骨骨折的效果及对血清sVCAM-1、HMGB1水平的影响

目的探讨跗骨窦切口微创钢板及空心钉轴向内固定联合术后低分子肝素治疗跟骨骨折的效果。方法将2016年2月-2017年4月石家庄市第三医院创伤骨科收治的120例跟骨骨折患者纳入研究,以随机数字表法分为两组,每组60例,分别使用跗骨窦切口微创钢板及空心钉轴向内固定联合低分子肝素治疗(联合组)和常规内固定治疗(常规组),比较治疗效果、Gissane角、Bohler角、凝血功能、血清可溶性细胞间黏附分子1(sVCAM-1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)之间的差异。结果治疗后,两组治疗效果及不良反应差异无统计学意义;两组Gissane角、Bohler角均有明显提升,联合组APTT、PT高于常规组[(39.78±2.56)s vs.(36.18±2.17)s、(24.52±0.82)s vs.(19.32±1.13)s](P<0.05);血清sVCAM-1、HMGB1低于常规组[(467.82±30.25)ng/mL vs.(492.26±30.29)ng/mL、(3.16±1.55)μg/L vs.(6.46±1.62)μg/L](P<0.05)。结论跗骨窦切口微创钢板及空心钉轴向内固定联合术后低分子肝素治疗跟骨骨折患者,血清sVCAM-1、HMGB1水平降低,疗效显著。

无血清培养骺板细胞分泌TGF-β1的实验研究

目的观察骺板细胞在无血清培养液中的生长情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1。方法提取3周龄新西兰兔骺板组织,获得良好生物活性的骺板细胞。采用CCK-8生长曲线检测骺板细胞在无血清培养液中的生长增殖情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1。结果骺板细胞生长情况良好,分泌细胞外基质。AO/PI荧光染色显示存活的骺板细胞呈亮绿色,周围散在有少量红染的死细胞。骺板细胞在DMEM培养液以及无血清培养液培养时生长曲线形态基本相似,在1、2d时细胞增殖缓慢,之后增殖速度逐渐增加,6-7d逐渐进入平台期。第1天时骺板细胞开始释放TGF-β1,然后释放量逐渐增加,第6d时浓度达到167.2pg/ml。结论骺板细胞在无血清培养液中增殖情况良好并能分泌TGF-β1。

布鲁杆菌病常规血清学与细菌学检测方法的临床应用比较

目的通过比较虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)的检测结果,并分别与血培养检测结果比较,分析这4种检测方法对布鲁杆菌病的诊断效率和价值。方法对2014年1月-2016年4月在我院门诊和住院治疗的布病患者以及健康体检者分别采用RBPT、SAT、iELISA和血培养检测,操作步骤按照试剂盒说明书和实验室标准操作规程进行。结果 142例患者标本,血培养检测均为阳性,健康对照组为全阴性;RBPT法检测139例阳性,3例阴性,健康对照组为全阴性;SAT法检测135例阳性,7例阴性,健康对照组为全阴性;iELISA法检测137例阳性,5例阴性,健康对照组为全阴性。3种血清学检测方法两两比较阳性检出率无显著差异(P>0.05);分别与血培养结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论为了降低布病漏检率,临床上可将多种检测方法相互结合。

钛板植入术后血清钛离子浓度变化及其影响因素分析

本研究采用光度比色分析法对５０例正常人和６０例钛板植入患者血清钛离子浓度进行了测定，同时结合术后时间阶段、钛板体积、钛板松动、手术前后等因素对测定值做了分析比较。结论认为正常人５４％血清钛离子浓度小于０．１０μｇ／ｍｌ，４６％为０．２８±０．２０μｇ／ｍｌ．钛板植入后，血清钛离子无升高，而且不随上述因素影响出现波动，但存在显著的个体差异。

碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC).细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达.观察0.1、1.0、10.0和100.0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用3H-TdR和3H-Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响.结果:第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型.随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形.与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成(P＜0.05),其中1.0和10.0μg/L bFGF促RGC增殖的作用与10%胎牛血清(FBS)对照组差异无显著性意义(P＞0.05),但促胶原合成作用较弱,相当于10%FBS对照组的60%左右(P＜0.05).结论:bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1.0～10.0 μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足.

ABO血型反定型梯形微板法的建立

目的建立梯形微板ABO血型反定型检测方法。方法随机选用常规A、B、O、AB型血样各8份。运用正交设计原理选择血浆稀释度、红细胞浓度、反应温度、静止时间4个参数的最佳条件;采用混合血样倍比稀释,确定凝集与非凝集灰区值。根据已确定的最佳条件和灰区值,进行重复性试验、灵敏度试验、准确性试验、脂血干扰试验、溶血干扰试验,并检测6份ABO亚型血样AM、AX、A2B、A3B、AXB、BM和5份含不规则抗体血样抗-M、抗-N、抗-P1、抗-Leb、抗-HI,以评价对特殊血样的检出能力。结果重复性符合率100%。灵敏度可达到与试管法相同效价的检出能力。准确性达99.99%。47份不同脂血程度血样抗干扰试验一次判读正确率100%。溶血干扰试验在Hb≤20g/L时,对梯形微板法试验结果无明显影响,在严重溶血情况下(Hb>20g/L),对凝集端无影响,对非凝集端有影响。对11份特殊血样均有较好的检出能力。结论梯形微板法不仅能够很好地完成普通血样ABO反定型的检测,还具有提高对弱凝集血样检测灵敏度的优势,进而提高试验的准确性。

微创经皮锁定加压钢板内固定术治疗四肢骨折的临床疗效探讨

目的探讨四肢骨折患者采用微创经皮锁定加压钢板内固定术治疗的临床效果。方法对该院收治的四肢骨折患者展开研究,共计选取80例患者为研究对象,病例收集时间在2019年1月—2020年12月,所有患者均拟行手术治疗,按照均等单盲方将80例患者分为对照组(n=40)和观察组(n=40),两组均给予钢板内固定术进行治疗,而观察组在此基础上实施微创经皮锁定加压钢板内固定术进行治疗,对比两组患者的临床治疗效果。结果观察组手术时长、住院时长和骨折愈合时间均短于对照组,手术失血量少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组手术前疼痛评分与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组手术后3 d和手术后1周疼痛评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组手术前白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组手术后IL-6、IL-8、hs-CRP和TNF-α水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组手术前躯体功能、心理功能、社会功能和物质生活状态4个维度生活质量评分与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组手术后生活质量4个维度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组并发症发生率(7.50%)低于对照组(25.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.501,P<0.05)。结论四肢骨折患者采用微创经皮锁定加压钢板内固定术治疗具有创伤小,并发症少的优势,可以有效促进患者尽早康复,提高患者的生活质量,临床治疗效果显著。

白血病细胞在无血清体系中增生能力的探讨

采用无血清甲基纤维素半固体培养方法,对白血病细胞系和原代白血病细胞进行一次集落培养,将形成的集落细胞重新悬浮,进行二次集落培养、计数.结果白血病细胞系的二次植入效率为31.30%,原代髓系白血病细胞的二次植入效率为22.66%.提示白血病细胞存在具有高增殖能力的干细胞性细胞群;原代白血病细胞的再增殖能力低于白血病细胞系.

SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定

目的:探讨SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定方法。方法:采用以6孔悬浮细胞培养板为载体的无血清DMEM/F12培养基(含EGF、FGF、B27)提取与纯化SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定,并在倒置显微镜下观察细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果:SHG44人脑胶质瘤干细胞能在含无血清DMEM/F12培养基的6孔悬浮细胞培养板中存活、增殖并形成干细胞球;悬浮培养3d初步形成呈巢状悬浮生长的胶质瘤干细胞团,7d后干细胞球大小、形态基本不变。经统计分析,悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P<0.05),且呈更规则球形。结论:本研究成功提取、纯化、鉴定出SHG44胶质瘤干细胞,并进行传代扩增培养;Cyagen悬浮细胞培养板可作为筛选胶质瘤干细胞的理想载体。

白痢康复鸡种用及经济价值的评价

本文对某农场688只白痢康复鸡的种用及经济价值进行的评价结果为,日产蛋率比发病前正常水平降低了12.3％,蛋的受精率降低了5.1～8.1％,孵化率降低了18.9％;全血平板凝集试验、血清琼脂扩散及卵黄琼脂扩散反应的阳性率分别为92.5％、90.0％和84.0％。从这些康复鸡所产的鲜蛋,入孵后7日龄和21日龄的死胚以及后代死雏中均分离出鸡白痢沙门氏菌,检出率依次为8.0％(2/25)、16.6％(5/30)、53.3％(16/30)和77.7％(7/9)。为此,该鸡群显然不能留作种用,其继续喂养的经济价值亦低,建议于产蛋期后全部淘汰。

荧光探针包被法测定血浆硫化氢浓度（英文）

目的:在荧光探针的基础上建立一种简易的方法来检测血液中的硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)。方法:将荧光探针包被到96孔板上,冷藏待用。用饱和硫酸铵沉淀血浆或血清中的蛋白,离心后所得的上清液分别加到含包被探针和不含包被探针的微孔中,37℃避光孵育2 h,然后使用分光光度计(波长λEx/λEm340/445 nm)读取微孔的荧光值,计算包被有探针和相应无探针微孔的荧光差值,根据标准曲线浓度计算出血液中H2S的浓度。结果:灵敏度和特异性测试表明,此方法检测灵敏度下限可以达到0.3μmol/L,血液中其他成分甚至其他含硫活性成分和含硫氨基酸等对此方法影响甚微。应用此方法检测188名健康成年志愿者的血清H2S浓度[(12.1±3.5)μmol/L,95%CI:4.6~19.8μmol/L],所得结果呈正态分布(单样本K-S检验,P>0.1)。对30名高血压患者和22名相匹配的健康志愿者血清H2S浓度检测表明,前者H2S浓度低于后者[(3.52±1.49)μmol/L vs.(10.23±2.76)μmol/L],差异具有统计学意义(配对样本t检验,t=9.937,P<0.001)。检测雄性Wistar大鼠血清[(19.66±2.32)μmol/L]和血浆[(18.67±2.07)μmol/L]以及动脉血[(19.34±0.51)μmol/L]和静脉血[(18.99±0.50)μmol/L]中的H2S浓度,结果表明雄性Wistar大鼠血清和血浆以及动脉血和静脉血两者差异都没有统计学意义(重复测量的方差分析,P=0.38)。样品的重复性检测稳定性较好(两因素方差分析,P>0.05)。结论:此方法对检测血液中的H2S具有简单、高灵敏度、特异性和可重复性等优点,出结果快,可适用于大样本的高通量检测,满足实验室基础研究及临床一次性大样本H2S浓度检测的需求。

不同无血清培养方式提取SHG44人脑胶质瘤干细胞的比较研究

目的筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法。方法采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微镜下细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果培养皿和培养瓶初次富集的SHG44胶质瘤干细胞球呈较大不规则形,经二、三次纯化后发现第二与三次纯化后的大部分胶质瘤干细胞呈不规则分化状,大部分胶质瘤干细胞球呈分散、较小、不规则形生长,但第三次比第一、二次有更少的胶质瘤干细胞球却呈更规则球形生长;悬浮细胞培养板提取、纯化的干细胞呈类圆形,基本全部形成胶质瘤干细胞球,且第三次比第一、二次纯化的干细胞球呈更大更规则球形生长;经统计分析悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球较培养皿和培养瓶纯化的胶质瘤干细胞球大且数目多(P<0.05);对于悬浮培养板,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P<0.05),且呈更规则球形。结论无血清培养基以悬浮细胞培养板为载体纯化胶质瘤干细胞是较理想的方法。

乙肝病毒五项标志物检测的布板法改进及优势分析

目的通过对乙肝病毒(HBV)五项标志物检测方法的改变,可以随机快速定性或定量的检测。方法将原来的大样本单项布板改变成小样本量纵向五联法布板,进行干扰试验和携带污染试验。结果方便了实验操作,各板单列时高含量的HB sA g+,HB sA b+,HB eA g+在测试时均有一定的携带污染率。HB sA g酶标液可使HB sA b,HB eA b,HB cA b检测孔呈阳性。HB sA b酶标液可使HB sA g,HB eA b,HB cA b检测孔呈阳性。HB cA b酶标液可使HB cA b检测孔呈阳性。HB eA b,HB eA b的酶标液对各检测孔均无干扰。由于HB sA g,HB sA b的酶标液对HB sA b,HB sA g的包被孔可以相互干扰,而HB eA g的酶标液对两者均无干扰。高含量的HB sA g+,HB sA b+,HB eA g+血清在测试时均有一定的携带污染率。纵向五联排列每列为同一样本不存在携带污染问题。结论可以提高检测结果的准确性,提高抗干扰能力,提高实验方法的精密度,方便结果的报告,加强批间质量控制,可以随机快速定性或定量的检测HBV五项标志物。