血清Sesn1、Sesn2与老年稳定期慢性阻塞性肺疾病并发肌少症的关系研究

目的 探讨血清Sestrin 1蛋白(Sesn1)、Sestrin 2蛋白(Sesn2)与老年稳定期慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)并发肌少症的关系。方法 选择2020年3月至2023年3月于河北省胸科医院呼吸科门诊复诊的192例老年稳定期慢阻肺患者,根据是否并发肌少症将患者分为肌少症组(56例)和非肌少症组(136例)。检测两组患者血清Sesn1、Sesn2水平、肺功能指标以及体脂成分。Pearson检验分析肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平与肺功能指标、体脂成分的相关性。收集患者的临床资料,采用多因素Logistic回归模型分析老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Sesn1、Sesn2对老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的诊断价值。结果 肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平、FEV1、FEV1/FVC、SM、AM、FFM低于非肌少症组(P<0.05)。肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平与FEV1、FEV1/FVC、SM、AM、FFM呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄偏大是老年稳定期慢阻肺并发肌少症的危险因素(P<0.05),高体质量指数、高Sesn1水平、高Sesn2水平、高FEV1/FVC则是保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Sesn1、Sesn2单独检测诊断老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.810(95%CI:0.747~0.863)、0.827(95%CI:0.766~0.878),联合检测诊断的AUC为0.903(95%CI:0.852~0.941),高于各指标单独诊断(Z=3.265、3.012,P<0.05)。结论 老年稳定期慢阻肺并发肌少症患者的血清Sesn1、Sesn2水平降低,且与肺功能降低、肌肉质量减少有关,二者水平升高是老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的保护因素,二者联合检测对老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症具有较高的诊断价值。

2型糖尿病患者血清GPER1、SESN2水平与糖尿病视网膜病变的关系研究

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者血清G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)、应激诱导蛋白2(SESN2)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法回顾性选取2020年2月—2022年2月联勤保障部队第九四〇医院眼科诊治的T2DM患者162例为T2DM组。根据眼部检查结果,将T2DM患者分为DR亚组(n=68)和非DR亚组(n=94);根据DR病情程度,将DR患者分为增生性亚组(n=28)和非增生性亚组(n=40)。另选取同期医院健康体检者60例为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清GPER1、SESN2水平;多因素Logistic回归分析DR的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清GPER1、SESN2水平对DR的预测价值。结果T2DM组血清GPER1水平高于健康对照组,血清SESN2水平低于健康对照组(t/P=36.850/<0.001,28.112/<0.001);DR亚组糖尿病病程、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清GPER1高于非DR亚组,肾小球滤过率(eGFR)、血清SESN2低于非DR亚组(t/P=11.552/<0.001,3.078/0.009,17.226/<0.001,21.915/<0.001,11.100/<0.001);增生性DR亚组血清GPER1水平高于非增生性DR亚组,血清SESN2水平低于非增生性DR亚组(t/P=12.151/<0.001,3.534/<0.001);多因素Logistic回归结果示,糖尿病病程长、HOMA-IR高、GPER1高是DR的独立危险因素[OR(95%CI)=1.237(1.096~1.397),1.265(1.079~1.483),1.347(1.054~1.721)],eGFR高、SESN2高是DR的独立保护因素[OR(95%CI)=0.736(0.598~0.906),0.759(0.596~0.967)];血清GPER1、SESN2水平及二者联合预测DR的曲线下面积(AUC)分别为0.731、0.710、0.820,二者联合的AUC大于血清GPER1、SESN2水平单独预测(Z=4.711、4.816,P均<0.001)。结论DR患者血清GPER1升高,SESN2降低,两者均参与DR的发生发展,两者联合检测对DR的发生具有较高的预测价值。

组蛋白去甲基化酶3调控SESN2介导的线粒体自噬在脓毒症心肌损伤中的机制研究

目的探讨组蛋白去甲基化酶3(JMJD3)调控SESTRIN 2蛋白重组蛋白(SESN2)介导的线粒体自噬在脓毒症心肌损伤(SIMI)中的作用,并分析其机制。方法20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和SIMI组,每组10只。SIMI组大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(2 mL/kg)构建脓毒症大鼠模型,对照组大鼠按2 mL/kg注射0.9%氯化钠注射液。采用HE染色检测大鼠心脏组织病理学变化,ELISA法测定大鼠血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)、TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定大鼠心脏组织中JMJD3和SESN2蛋白表达水平。使用LPS(10μg/mL)处理H9C2细胞48 h,构建脓毒症细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+JMJD3表达的小干扰RNA(si-JMJD3)组、LPS+si-JMJD3+SESN2表达的小干扰RNA(si-SESN2)组、LPS+SESN2过表达(oe-SESN2)组和LPS+oe-SESN2+JMJD3过表达(oe-JMJD3)组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法测定细胞凋亡水平,ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X基因(Bax)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3(LC3)、重组人自噬效应蛋白(Beclin1)、选择性自噬接头蛋白(p62)]及JMJD3和SESN2蛋白表达水平。结果与对照组比较,SIMI组大鼠心脏组织心肌纤维束排列松散,部分心肌纤维断裂溶解,伴有间质水肿和炎症细胞浸润。与对照组比较,SIMI组大鼠血清中cTnT、TNF-α和IL-6水平均升高,心脏组织中JMJD3蛋白表达水平升高,而SESN2蛋白表达水平降低(均P<0.01)。与对照组比较,LPS组细胞培养上清液TNF-α和IL-6水平升高,JMJD3蛋白表达水平升高,SESN2蛋白表达水平降低,同时,细胞活性减弱,凋亡水平增强(均P<0.05)。JMJD3敲低后SESN2蛋白表达水平升高,细胞活性增强,凋亡水平减弱,同时自噬水平增强(均P<0.05),而进一步敲低SESN2后,以上趋势发生逆转。相反,SESN2过表达后,细胞自噬水平增强,细胞活性增强,凋亡水平减弱(均P<0.05);而进一步过表达JMJD3后,SESN2蛋白表达水平降低,同时oe-SESN2对LPS-H9C2的作用能被oe-JMJD3逆转。结论JMJD3通过调控SESN2介导线粒体自噬,促进心肌细胞损伤和凋亡,从而促进SIMI的发展。

Sestrin2蛋白对动脉粥样硬化的干预效果及作用机制研究

目的探讨Sestrin2蛋白对动脉粥样硬化病变干预效果及作用机制。方法选择30只雄性ApoE-/-小鼠,建立动脉粥样硬化模型。模型建立后分为3组:9只小鼠经慢病毒处理(沉默组,Sestrin2基因沉默,原计划该组纳入10只小鼠,因其中1只处理后出现病态表现遂予以剔除),10只经过表达Sestrin2腺病毒处理(过表达组),余10只为对照组。分组处理完毕后20 d检测动脉粥样硬化斑块相关指标:斑块面积、最小管腔直径、管腔面积、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10、基质金属蛋白酶(MMP)8、MMP12、MMP13,以及与Sestrin2蛋白表达相关联的磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)表达水平。结果对照组管腔直径、管腔面积大于沉默组(P<0.05),但均低于过表达组(P<0.05);沉默组斑块面积明显大于对照组和过表达组(P<0.01),且过表达组明显小于对照组(P<0.01)。沉默组IL-1β、TNF-α水平明显高于对照组和过表达组(P<0.01),而过表达组明显低于对照组(P<0.05);沉默组IL-10水平明显低于对照组和过表达组(P<0.01),而过表达组明显高于对照组(P<0.01)。沉默组MMP8、MMP12及MMP13水平高于对照组和过表达组(P<0.05),而过表达组又明显低于对照组(P<0.01)。过表达组p-JNK蛋白表达水平明显高于对照组和沉默组(P<0.01),而对照组表达水平又高于沉默组(P<0.01);各组小鼠p-c-Jun蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Sestrin2蛋白通过调控MMP、IL等因子表达水平抑制动脉粥样硬化病变过程。

Sestrin2参与调控新生鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞自噬机制

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2,对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞自噬作用及其机制。方法选择80只新生10日龄SD大鼠(受试鼠)为研究对象。对其中60只建立HIBD模型,并根据这60只受试鼠缺氧缺血(HI)后的处死时间点,将其分别纳入HI后4、8、12、24、72 h组(除HI后24 h组为20只受试鼠外,其余均为10只)。对剩余的20只受试鼠仅分离右颈总动脉,既不结扎右颈总动脉,亦不进行缺氧处理,处死时间对应于HI后24 h组,纳入假手术组(n=20)。①对HI后4、8、12、24、72 h组及假手术组(各组受试鼠均为10只),获取海马组织标本后,采用蛋白质印迹法,检测Sestrin2、肝酶B1(LKB1)、磷酸化LKB1(p-LKB1)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链(LC)3及凋亡相关蛋白活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(CC)3在受试鼠海马组织中的相对表达量,并采用方差分析及最小显著性差异(LSD)-t法,对上述指标进行6组之间,或HI后4、8、12、24、72 h组分别与假手术组的组间比较。②对于HI后24 h组与假手术组各组剩余的10只受试鼠,获取大脑标本后,采用免疫组织化学SP法,检测海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平,包括积分吸光度(IA)值测定及染色结果,并采用t检验,对这3项指标的IA值进行2组比较。本研究通过四川大学动物实验伦理委员会批准[审批文号:SYXK(川)2013-185]。结果①蛋白质印迹法检测结果显示,HI后4、8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR及CC3水平,均分别高于假手术组;HI后12、24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、p-mTOR、Beclin1、LC3及CC3水平,均分别高于假手术组;HI后72 h组受试鼠海马组织中Sestrin2及CC3水平,均高于假手术组;并且这些差异均有统计学意义(P<0.05)。其中,HI后8 h组受试鼠海马组织中p-mTOR水平最高,HI后24 h组受试鼠海马组织中Sestrin2、p-LKB1、p-AMPK、Beclin1、LC3及CC3水平均最高。6组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平比较,以及HI后4、8、12、24、72 h组受试鼠海马组织中LKB1、AMPK及mTOR水平分别与假手术组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②免疫组织化学SP法IA值检测结果显示,HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3表达水平分别为(24106±2393)、(41892±4094)、(61670±4696),均高于假手术组的(15593±1575)、(18941±2131)、(20279±1912),并且差异有统计学意义(t=9.398、P=0.035,t=15.723、P<0.001,t=25.812、P<0.001)。免疫组织化学SP法染色结果显示,HI后24 h组受试鼠海马组织中p-AMPK、LC3及CC3呈阳性细胞的表达水平较高。结论10日龄新生SD大鼠发生HIBD时,其大脑海马组织中Sestrin2可能通过LKB1/AMPK/mTOR信号通路,参与调节神经细胞自噬及凋亡。

血清人附睾分泌蛋白4、应激诱导蛋白2水平与脓毒症相关ARDS患者病情严重程度、预后的关系研究

目的探讨血清人附睾分泌蛋白4(HE4)、应激诱导蛋白2(Sestrin 2)水平与脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者病情严重程度、预后的关系。方法选取2020年2月—2023年2月广东省中医院海南医院收治的90例脓毒症相关ARDS患者为ARDS组,根据氧合指数(OI)将其分为轻度亚组(OI为201~300 mmHg,n=26)、中度亚组(OI为101~200 mmHg,n=37)、重度亚组(OI≤100 mmHg,n=27),根据入院28 d内死亡情况将其分为死亡亚组(38例)和存活亚组(52例)。另选择同期在广东省中医院海南医院体检中心进行体检的健康志愿者75例为对照组。比较ARDS组与对照组、不同病情严重程度患者血清HE4、Sestrin 2水平;脓毒症相关ARDS患者死亡的影响因素分析采用单因素分析及多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线以评估血清HE4、Sestrin 2水平及二者联合对脓毒症相关ARDS患者死亡的预测价值。结果ARDS组血清HE4、Sestrin 2水平高于对照组(P<0.05)。中度亚组血清HE4、Sestrin 2水平高于轻度亚组,重度亚组血清HE4、Sestrin 2水平高于轻度亚组和中度亚组(P<0.05)。死亡亚组与存活亚组脓毒症分级、病情严重程度、急性生理和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、机械通气时间及血清HE4、Sestrin 2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,病情严重程度、APACHEⅡ评分及血清HE4、Sestrin 2水平是脓毒症相关ARDS患者死亡的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清HE4、Sestrin 2水平及二者联合预测脓毒症相关ARDS患者死亡的AUC分别为0.809〔95%CI(0.713~0.884)〕、0.865〔95%CI(0.777~0.928)〕、0.980〔95%CI(0.925~0.998)〕。二者联合预测脓毒症相关ARDS患者死亡的AUC分别大于血清HE4、Sestrin 2水平单独预测脓毒症相关ARDS患者死亡的AUC(P<0.05)。结论脓毒症相关ARDS患者血清HE4、Sestrin 2水平升高,且ARDS病情越严重血清HE4、Sestrin 2水平越高;血清HE4、Sestrin 2水平是脓毒症相关ARDS患者死亡的影响因素及预测因素,且二者联合的预测价值高。