Sestrin2蛋白通过Nrf2/HO-1信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤

目的探讨Sestrin2蛋白在大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制。方法体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。细胞分为对照组、缺氧4 h组、复氧2 h组和复氧4 h组。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;微量酶标法检测心肌细胞损伤标记物乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。构建针对Sestrin2蛋白沉默的siRNA与其阴性对照(si-NC),利用脂质体转染法导入H9C2心肌细胞,后将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧4 h+si-NC组(阴性对照组)、缺氧4 h+siRNA组、复氧4 h+si-NC(阴性对照组)、复氧4 h+siRNA组。Western blot检测Sestrin2蛋白的表达;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测Sestrin2蛋白、核转录相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达。结果与对照组比较,复氧4 h组细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05),LDH水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,Sestrin2蛋白表达在缺氧组和缺氧复氧组均显著增高(P<0.01),且缺氧复氧组Sestrin2蛋白表达量显著高于单纯缺氧组(P<0.01)。转染siRNA特异有效地下调了Sestrin2蛋白表达(P<0.05),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.05),Nrf2蛋白表达降低(P<0.01),HO-1蛋白表达降低(P<0.05)。结论Sestrin2蛋白对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1相关信号通路有关。

组蛋白去甲基化酶3调控SESN2介导的线粒体自噬在脓毒症心肌损伤中的机制研究

目的探讨组蛋白去甲基化酶3(JMJD3)调控SESTRIN 2蛋白重组蛋白(SESN2)介导的线粒体自噬在脓毒症心肌损伤(SIMI)中的作用,并分析其机制。方法20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和SIMI组,每组10只。SIMI组大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(2 mL/kg)构建脓毒症大鼠模型,对照组大鼠按2 mL/kg注射0.9%氯化钠注射液。采用HE染色检测大鼠心脏组织病理学变化,ELISA法测定大鼠血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)、TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定大鼠心脏组织中JMJD3和SESN2蛋白表达水平。使用LPS(10μg/mL)处理H9C2细胞48 h,构建脓毒症细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+JMJD3表达的小干扰RNA(si-JMJD3)组、LPS+si-JMJD3+SESN2表达的小干扰RNA(si-SESN2)组、LPS+SESN2过表达(oe-SESN2)组和LPS+oe-SESN2+JMJD3过表达(oe-JMJD3)组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法测定细胞凋亡水平,ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X基因(Bax)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3(LC3)、重组人自噬效应蛋白(Beclin1)、选择性自噬接头蛋白(p62)]及JMJD3和SESN2蛋白表达水平。结果与对照组比较,SIMI组大鼠心脏组织心肌纤维束排列松散,部分心肌纤维断裂溶解,伴有间质水肿和炎症细胞浸润。与对照组比较,SIMI组大鼠血清中cTnT、TNF-α和IL-6水平均升高,心脏组织中JMJD3蛋白表达水平升高,而SESN2蛋白表达水平降低(均P<0.01)。与对照组比较,LPS组细胞培养上清液TNF-α和IL-6水平升高,JMJD3蛋白表达水平升高,SESN2蛋白表达水平降低,同时,细胞活性减弱,凋亡水平增强(均P<0.05)。JMJD3敲低后SESN2蛋白表达水平升高,细胞活性增强,凋亡水平减弱,同时自噬水平增强(均P<0.05),而进一步敲低SESN2后,以上趋势发生逆转。相反,SESN2过表达后,细胞自噬水平增强,细胞活性增强,凋亡水平减弱(均P<0.05);而进一步过表达JMJD3后,SESN2蛋白表达水平降低,同时oe-SESN2对LPS-H9C2的作用能被oe-JMJD3逆转。结论JMJD3通过调控SESN2介导线粒体自噬,促进心肌细胞损伤和凋亡,从而促进SIMI的发展。

血清Sesn1、Sesn2与老年稳定期慢性阻塞性肺疾病并发肌少症的关系研究

目的 探讨血清Sestrin 1蛋白(Sesn1)、Sestrin 2蛋白(Sesn2)与老年稳定期慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)并发肌少症的关系。方法 选择2020年3月至2023年3月于河北省胸科医院呼吸科门诊复诊的192例老年稳定期慢阻肺患者,根据是否并发肌少症将患者分为肌少症组(56例)和非肌少症组(136例)。检测两组患者血清Sesn1、Sesn2水平、肺功能指标以及体脂成分。Pearson检验分析肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平与肺功能指标、体脂成分的相关性。收集患者的临床资料,采用多因素Logistic回归模型分析老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Sesn1、Sesn2对老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的诊断价值。结果 肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平、FEV1、FEV1/FVC、SM、AM、FFM低于非肌少症组(P<0.05)。肌少症组血清Sesn1、Sesn2水平与FEV1、FEV1/FVC、SM、AM、FFM呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄偏大是老年稳定期慢阻肺并发肌少症的危险因素(P<0.05),高体质量指数、高Sesn1水平、高Sesn2水平、高FEV1/FVC则是保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Sesn1、Sesn2单独检测诊断老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.810(95%CI:0.747~0.863)、0.827(95%CI:0.766~0.878),联合检测诊断的AUC为0.903(95%CI:0.852~0.941),高于各指标单独诊断(Z=3.265、3.012,P<0.05)。结论 老年稳定期慢阻肺并发肌少症患者的血清Sesn1、Sesn2水平降低,且与肺功能降低、肌肉质量减少有关,二者水平升高是老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症的保护因素,二者联合检测对老年稳定期慢阻肺患者并发肌少症具有较高的诊断价值。

应激诱导蛋白Sestrin2对脂多糖诱发树突状细胞坏死性凋亡的影响

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(SESN2)对脂多糖(LPS)联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法将培养至第3~10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h,并按照刺激时间点进行分组,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组细胞SESN2蛋白表达水平。将过表达空载慢病毒(NC)、SESN2基因过表达RNA序列慢病毒(SESN2 LV-RNA)、小干扰空载慢病毒(NS)以及SESN2基因小干扰RNA序列慢病毒(SESN2 siRNA)分别转染至DC2.4细胞中,转染后72 h,于倒置荧光显微镜下观察细胞荧光表达改变。各转染组细胞给予LPS刺激24 h,同时设立空白对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)并培养24 h,采用Western blotting检测SESN2蛋白表达水平;给予LPS+zVAD刺激24 h,同时设立空白对照组给予PBS并培养24 h,采用Western blotting检测混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平,使用激光共聚焦显微镜观察p-MLKL变化及阳性细胞数量,采用流式细胞术和Hoechst染色检测坏死性凋亡细胞比例。结果与LPS刺激0 h组相比,LPS刺激24 h组细胞SESN2蛋白表达明显升高,故将24 h作为后续实验LPS刺激时间点。成功转染慢病毒后培养24 h,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显高于NS+LPS+zVAD组;SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显低于NC+LPS+zVAD组;且NS+LPS+zVAD组和NC+LPS+zVAD组MLKL磷酸化水平分别高于NS+PBS组、NC+PBS组。激光共聚焦显微镜下显示,各组细胞p-MLKL蛋白荧光表达数量及荧光强度变化趋势与上述结果一致。流式细胞术和Hoechst染色检测结果均显示,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显高于NS+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(30.800±1.153)%比(20.800±1.114)%,Hoechst染色:(75.267±0.451)%比(46.267±3.371)%,均P<0.05〕,提示敲减SESN2表达可以进一步加剧细胞坏死性凋亡发生;SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显低于NC+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(7.160±0.669)%比(19.240±2.322)%,Hoechst染色:(32.433±3.113)%比(48.567±4.128)%,均P<0.05〕,提示过表达SESN2可以逆转上述改变。结论SESN2对于脓毒症状态下DC坏死性凋亡具有明显抑制效应,干预SESN2有助于调节脓毒症时DC介导免疫反应进程。

超早期滋养性肠内营养联合高压氧治疗急性缺血性脑卒中的临床疗效

目的:探究超早期滋养性肠内营养(EN)联合高压氧治疗(HBOT)对急性缺血性脑卒中(AIS)患者临床疗效及血清Sestrin2蛋白(Sestrin2)、人帕金森蛋白(PARK7)的影响。方法:按照治疗方法不同将106例AIS患者分为观察组(n=51)和对照组(n=55)。观察组行超早期滋养性EN联合HBOT治疗;对照组行常规EN联合HBOT治疗。比较两组的神经功能缺损评分(NIHSS)、改良Rankin评分(mRS)、外周血营养指标[白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)和血红蛋白(Hb)]、Sestrin2/PARK7表达水平及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组NIHSS、mRS评分均低于对照组(P<0.05),血清ALB、PA及Hb浓度、PARK7、Sestrin2表达水平均高于对照组(P<0.05)。观察组感染、消化道出血的发生率均低于对照组(33.33%vs.52.73%;7.84%vs.23.64%,P<0.05)。结论:超早期滋养性EN联合HBOT治疗AIS效果较好,血清Sestrin2、PARK7的水平降低可能是其中的重要机制。

TGF-β1、IFN-γ及SESN2细胞因子在多种关节炎中的表达及临床应用

探讨不同种关节炎病人的转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)及人Sestrin2蛋白(SESN2)细胞因子变化水平和在临床上的价值。方法 选择2021年5月-2023年11月潍坊市人民医院治疗的159例关节炎病人,根据类型不同分成痛风性关节炎组(n=53例)、骨性关节炎组(n=51例)和类风湿性关节炎组(n=55例);选择该时间段体检者57例为对照组;采用酶联免疫吸附试验测定TGF-β1、IFN-γ及SESN2水平,分析TGF-β1、IFN-γ及SESN2在多种关节炎中的诊疗效能。结果 观察组TGF-β1、IFN-γ及SESN2水平高于对照组(P<0.05);类风湿性关节炎组TGF-β1、IFN-γ及SESN2高于骨性关节炎组(P<0.05),低于痛风性关节炎组(P<0.05),上述指标痛风性关节炎>类风湿性关节炎>骨性关节炎;ROC曲线结果表明,TGF-β1、IFN-γ及SESN2联合测定在不同类型关节炎中具有比较高的诊疗效能,要比单一生化指标高(P<0.05)。结论 对于确诊的关节炎病人伴有TGF-β1、IFN-γ和SESN2水平升高,能在一定的程度上反应病人的病情严重程度,且不同的指标测定能提高诊疗效能。

Sestrin2蛋白对动脉粥样硬化的干预效果及作用机制研究

目的探讨Sestrin2蛋白对动脉粥样硬化病变干预效果及作用机制。方法选择30只雄性ApoE-/-小鼠,建立动脉粥样硬化模型。模型建立后分为3组:9只小鼠经慢病毒处理(沉默组,Sestrin2基因沉默,原计划该组纳入10只小鼠,因其中1只处理后出现病态表现遂予以剔除),10只经过表达Sestrin2腺病毒处理(过表达组),余10只为对照组。分组处理完毕后20 d检测动脉粥样硬化斑块相关指标:斑块面积、最小管腔直径、管腔面积、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10、基质金属蛋白酶(MMP)8、MMP12、MMP13,以及与Sestrin2蛋白表达相关联的磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)表达水平。结果对照组管腔直径、管腔面积大于沉默组(P<0.05),但均低于过表达组(P<0.05);沉默组斑块面积明显大于对照组和过表达组(P<0.01),且过表达组明显小于对照组(P<0.01)。沉默组IL-1β、TNF-α水平明显高于对照组和过表达组(P<0.01),而过表达组明显低于对照组(P<0.05);沉默组IL-10水平明显低于对照组和过表达组(P<0.01),而过表达组明显高于对照组(P<0.01)。沉默组MMP8、MMP12及MMP13水平高于对照组和过表达组(P<0.05),而过表达组又明显低于对照组(P<0.01)。过表达组p-JNK蛋白表达水平明显高于对照组和沉默组(P<0.01),而对照组表达水平又高于沉默组(P<0.01);各组小鼠p-c-Jun蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Sestrin2蛋白通过调控MMP、IL等因子表达水平抑制动脉粥样硬化病变过程。

银杏二萜内酯葡胺联合阿替普酶治疗急性缺血性脑卒中临床研究

目的:观察银杏二萜内酯葡胺联合阿替普酶对急性缺血性脑卒中(AIS)患者神经功能、Sestrin2蛋白、同型半胱氨酸(Hcy)、血浆黏度、红细胞比容及血小板黏附率的影响。方法:选取200例AIS患者,按随机数字表法分为对照组与观察组,每组100例。对照组给予阿替普酶治疗,观察组在对照组基础上加用银杏二萜内酯葡胺治疗。比较2组治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,Sestrin2蛋白、Hcy水平及血液流变学指标。结果:治疗后,2组NIHSS评分均较治疗前降低(P<0.05),观察组NIHSS评分低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组Sestrin2蛋白、Hcy水平及血浆黏度、红细胞比容、血小板黏附率均较治疗前降低(P<0.05),观察组Sestrin2蛋白、Hcy水平及血浆黏度、红细胞比容、血小板黏附率均低于对照组(P<0.05)。结论:银杏二萜内酯葡胺联合阿替普酶可改善AIS患者的神经功能、血液流变学指标,降低Sestrin2蛋白、Hcy水平。