miRNA-485-5p靶向调控SOX5对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响分析

目的 分析miRNA-485-5p靶向调控性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 取结直肠癌癌组织、癌旁组织,检测miRNA-485-5p、SOX5表达,购买结直肠癌结细胞株HT29,细胞培养后分为对照组、空载组、沉默组、过表达组,对照组常规培养,不做转染处理,空载组、沉默组、过表达组分别转染miRNA-485-5p-NC、miRNA-485-5pmimics、anti-miRNA-485-5p。鉴定转染效率,萤光素酶报告基因系统验证miRNA-485-5p、SOX5靶向关系,分析转染miRNA-485-5p对结直肠癌细胞生物学行为的影响。结果 结直肠癌癌组织中miRNA-485-5p表达量低于癌旁组织,SOX5表达量高于癌旁组织(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组miRNA-485-5p表达量降低,过表达组miRNA-485-5p表达量升高(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组SOX5表达量升高,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组细胞增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均升高,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05)。与空载组相比,过表达A组、过表达B组增殖活性、细胞迁移、侵袭数降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与过表达A组相比,过表达B组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-485-5p可抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为靶向调控SOX5表达,有望成为结直肠癌的治疗靶点。

SOX5和PrPc在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中,性别决定区Y框蛋白5(SOX5)及细胞型朊病毒蛋白(PrPc)的表达和临床意义。方法:采用免疫组化法检测94例OSCC组织芯片及30例癌旁组织芯片中SOX5及PrPc的表达情况。结果:OSCC组织中SOX5和PrPc表达阳性率分别为69.15%和68.09%,明显高于癌旁组织中的表达(30.00%和20.00%)(P<0.05)。SOX5的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄、浸润深度、TNM分期、分化程度无关(P>0.05);PrPc的表达与肿瘤分化程度、患者年龄相关(P<0.05),与性别、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。SOX5与PrPc的表达呈正相关(r=0.432,P<0.01)。结论:SOX5和PrPc有可能作为OSCC早期诊断的生物标志物。

miR-892a靶向调控SOX5对前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨miR-892a对前列腺癌细胞的增殖和迁移能力的影响。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载499例前列腺肿瘤及52例癌旁组织的微小RNA(miRNA)的样本资料,再采用R语言的limma包及gplots包进行差异表达分析,绘制火山图和热图,筛选目的基因。采用荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺上皮细胞(RWPE-1)和前列腺癌细胞(DU145、PC3)中miR-892a表达情况。将miR-892a模拟物(miR-892a mimic组)及阴性对照(miR-NC组)分别转染前列腺癌PC3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、低密度集落形成实验及Transwell小室细胞迁移实验检测两组细胞的增殖及迁移,通过生物信息学在线预测网站预测miR-892a的潜在靶基因为性别决定区Y框蛋白5(SOX5),RT-PCR、Western blot实验及荧光素酶报告基因实验验证miR-892a靶向调控SOX5。结果筛选的目的基因为miR-892a。前列腺癌细胞PC3和DU145中miR-892a的相对表达量分别为0.41±0.40和0.47±0.45,明显低于前列腺上皮细胞的1.18±0.35,差异有统计学意义(F=340.330,P<0.01),选择PC3细胞作为后续研究对象。MTT增殖实验结果显示,miR-892a mimic组在24 h、48 h、72 h和96 h光度值均低于miR-NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。低密度细胞集落形成实验中,过表达miR-892a后,miR-892a minic组细胞克隆数为251.00±64.84,miR-NC组为433.28±62.93;Transwell小室细胞迁移实验中miR-892a mimic组穿过小室的细胞数为340.33±31.30,miR-NC组为534.33±61.07,差异均有统计学意义(t=-3.194、-4.906,P值均<0.05)。miR-NC组和miR-892a mimic组的SOX5 mRNA相对表达水平分别为1.021±0.012和0.156±0.017,SOX5的蛋白表达水平分别为0.519±0.014和0.196±0.019,两组差异均有统计学意义(t=71.807、24.097,P值均<0.01)。野生型miR-892a mimic组荧光素酶比值为0.37±0.08,miR-NC组为0.97±0.10,差异有统计学意义(t=12.890,P<0.01)。SOX5的蛋白表达水平低于于NC组(t=71.807,P<0.01),并且miR-892a能够直接靶向SOX5发挥生物学效应(t=12.890,P<0.01)。结论与前列腺上皮细胞相比较,miR-892a在前列腺癌PC3细胞中显著低表达;过表达miR-892a能够抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移,并靶向调控SOX5。

小干扰RNA SOX5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(SOX5)的小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞BGC823增殖及凋亡的影响。[方法]通过qRT-PCR和Western-blot分别检测胃癌细胞系(SGC7901,BGC823,AGS,HGC27)及正常胃上皮细胞GES-1中SOX5 mRNA和蛋白的表达情况;取对数生长周期的胃癌细胞BGC823,通过Lipofiectamine2000将设计合成的SOX5的特异性siRNA以及NC转染BGC823细胞,作为siSOX5组和NC组,不做任何处理的细胞作为空白对照组。qRT-PCR检测各组细胞中SOX5 mRNA的表达情况;Western-blot检测各组SOX5及CyclinD1、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达;MTT检测转染12 h、24 h、48 h、72 h后,各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞的凋亡情况。[结果]与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC7901,BGC823,AGS,HGC27中SOX5 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);转染siSOX5后,siSOX5组SOX5 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);MTT结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞增殖受到抑制,且CyclinD1蛋白表达水平显著下降,p21蛋白表达显著升高(P<0.05);流式细胞检测结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞凋亡率升高,且Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05)。[结论]干扰SOX5能够降低胃癌BGC823细胞中SOX5的表达,抑制BGC823细胞的增殖并促进凋亡。

多能性转录因子OCT4和SOX2在体外发育的小鼠2-细胞胚胎的表达与定位

为探讨多能性转录因子OCT4和SOX2在昆明小鼠(Mus musculus)2-细胞胚胎发育过程中与2-细胞胚胎阻滞发生的相关性,本研究应用实时荧光定量PCR技术检测了小鼠卵母细胞及在M16培养液中培养的不同发育阶段体外受精胚Oct4和Sox2基因的表达,并利用实时荧光定量PCR和免疫荧光技术比较了2-细胞胚、2-细胞阻滞胚和4-细胞胚的OCT4和SOX2的表达与定位。采用ANOVA对实验所得的数据进行分析,P<0.05被认为是具有显著性差异。研究结果显示,2-细胞胚只有24.8%发育成4-细胞胚,75.2%的2-细胞胚发生了阻滞。Sox2和Oct4的m RNA在MⅡ期卵母细胞、原核胚、2-细胞胚、4-细胞胚、桑椹胚和囊胚中都有表达。Oct4 m RNA的表达水平在4-细胞胚显著高于2-细胞胚和2-细胞阻滞胚(P<0.05),Sox2 m RNA的表达水平在2-细胞胚显著高于2-细胞阻滞胚和4-细胞胚(P<0.05),而后两者之间没有差异(P<0.05)。OCT4蛋白在2-细胞胚和4-细胞胚中与核共定位,但在2-细胞阻滞胚中弥散存在于胞质中。SOX2蛋白在以上3类胚胎中始终定位于细胞核。上述结果提示,转录因子OCT4和SOX2的表达和定位与小鼠2-细胞胚胎发育阻滞相关,母源性SOX2表达的维持对胚胎合子基因组激活(ZGA)的发生具有重要作用,母源性OCT4的异常定位可能影响了合子基因组激活相关基因的激活,而合子中Oct4的表达影响合子基因组激活后胚胎的发育。