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Sex Identification of Red-crowned Crane by the Polymerase Chain Reaction
1
作者 LIJian-hong LIShu-ling +1 位作者 BAOJun BAIXiu-juan 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2004年第2期151-155,共5页
Sex determining gene primers of Oriental White Stork were used to amplify sex-linked gene of the Red-crowned Crane′s W chromosome-specific by PCR for sex identification. The sexes of 7 couples of grown Red-crowned Cr... Sex determining gene primers of Oriental White Stork were used to amplify sex-linked gene of the Red-crowned Crane′s W chromosome-specific by PCR for sex identification. The sexes of 7 couples of grown Red-crowned Cranes and 15 youngs were identified. Through DNA sequence analysis, the identity is 94.77% between Red-crowned Crane and Oriental White Stork. The results of this study suggest that the application of the polymerase chain reaction technique is practicable for determining sex in the Red-crowned Crane. 展开更多
关键词 Red-crowned Crane sex determining gene sex identification
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Sex-related gene and sex identification of Crested Ibis Nipponia nippon (Ciconiifor-mes: Threskiornithidae) 被引量:2
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作者 LI Ming DING Changqing +3 位作者 WEI Fuwen MENG Shijie XI Yongmei LU Baozhong 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第8期669-671,共3页
The Crested Ibis (Nipponia nippon) is a critical endangered species of the world. At present, a reintroduction program will be conducted to save this species essentially. However, because the Crested Ibise is a sexual... The Crested Ibis (Nipponia nippon) is a critical endangered species of the world. At present, a reintroduction program will be conducted to save this species essentially. However, because the Crested Ibise is a sexual alike bird, it is very difficult to identify the sex from the morphological character. In order to identify the sex easily and select the right individuals for captive breeding and reintroduction, the sex related gene on W chromosome was amplified and the sex of three Crested Ibises were also identified in the present study. The 262bp fragment was also sequenced, and we found that there were 13 different nucleotide sites with 2.25 of transition/transversion based on the comparison with that of the Oriental White Stork. The sequence will also provide a theoretic base for further designing specific primer for sex related gene in the Crested Ibis. 展开更多
关键词 Crested IBIS Nipponia NIPPON sex-RELATED GENE sex identification.
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家禽胚胎期性别鉴定技术研究与应用进展 被引量:1
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作者 韩国锋 柏宗春 +1 位作者 李延森 李春梅 《智能化农业装备学报(中英文)》 2023年第1期26-35,共10页
性别鉴定是家禽生产的重要环节之一,目前通用的雏鸡翻肛鉴定法费时费工,家禽从业者和科研人员多年来致力于研发家禽孵化期胚胎性别鉴定技术,以提高性别鉴定效率、节能省工并避免淘汰公雏。总结现有家禽胚胎性别鉴定主要方法、最新研究... 性别鉴定是家禽生产的重要环节之一,目前通用的雏鸡翻肛鉴定法费时费工,家禽从业者和科研人员多年来致力于研发家禽孵化期胚胎性别鉴定技术,以提高性别鉴定效率、节能省工并避免淘汰公雏。总结现有家禽胚胎性别鉴定主要方法、最新研究进展和产业化应用情况,以及未来的发展建议,为家禽早期性别鉴定技术研究和应用提供参考。家禽胚胎性别分化由遗传物质决定,性腺的两性分化随着胚胎发育逐渐清晰,随之分泌性激素,导致胚胎雌雄性激素水平差异,随着胚胎的进一步发育,雌雄胚胎会出现其他差异性表观性状(羽色等)。基于上述鸡胚发育规律,可以通过检测雌雄胚胎遗传物质、性激素和其他表观性状的差异进行性别鉴定。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)或环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术分析鸡胚性染色体上的特定基因(CHD、EE0.6、SWIM、Xho-I、DMRT等),可实现性别鉴定,该方法鉴定准确率为100%,但操作复杂,需要采集胚胎组织或血液等带遗传物质的样品,仅适用于科研领域或高价值家禽品种,难以产业化应用。使用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)试剂盒测量鸡胚性激素含量,包括雌酮、雌二醇、睾酮、雄烯二酮和二氢睾酮等,可实现性别鉴定,该方法同样操作复杂,需要采集胚胎血液或尿囊液,但准确率较高,达98%以上。此外,利用光谱图像技术识别种蛋内物质成分和物理特性差异,借用机器学习建立雌雄胚胎识别光谱模型,也可实现鉴定,该方法为非侵入式,速度快,但准确率有限且通用性差。产业应用方面,德国SELEGGT公司开发了一种性激素快速检测试剂并推出一套商用鸡胚性别鉴定技术和装备,已实现产业化应用,准确率达98.5%,但是鉴定速度仅为3600枚/h,远低于市场期望值;德国AAT公司也推出了一种基于高光谱图像技术的全自动鸡胚性别鉴定设备(CHEGGY),检测速度为20000枚/h,鉴定准确率为96%,但仅适用于羽色自别系品种。从家禽产业应用需求角度看,基于光谱图像检测法的性别鉴定技术优势明显,产业化应用潜力最大,需要深入研究家禽胚胎发育期雌雄鸡胚间的生理差异和生理信号检测方法,为高效鸡胚性别鉴定技术和装备研发提供理论支撑。 展开更多
关键词 家禽 孵化期 性别鉴定 光谱图像 激素 基因
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鱼类性别鉴定研究进展
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作者 刘艳丽 应博凯 +3 位作者 孙瑞健 祝斐 陈淑吟 和德康 《水产养殖》 CAS 2023年第12期8-13,25,共7页
简述了鱼类性别的决定,受遗传、环境因素共同影响;介绍了鱼类性别鉴定方法:表观观测法、组织切片、超声鉴定法、血液生化指标及激素判别法、染色体形态以及染色体带型差异判别法、分子标记法、单细胞测序技术等。分析了各种方法的优缺... 简述了鱼类性别的决定,受遗传、环境因素共同影响;介绍了鱼类性别鉴定方法:表观观测法、组织切片、超声鉴定法、血液生化指标及激素判别法、染色体形态以及染色体带型差异判别法、分子标记法、单细胞测序技术等。分析了各种方法的优缺点及其实际应用范围。提出,今后对于鱼类性别鉴定方法,应着重研究性别特异位点,创新筛选技术,并加大性别分化机制和性别控制的研究力度,进一步开发单细胞测序技术在鱼类性别鉴定中的应用,对于鱼类,尤其是具有明显性别二态性的鱼类研究和渔业发展,具有重要意义。 展开更多
关键词 鱼类 性别决定 性别相关基因 性别鉴定
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PCR扩增Sry基因进行鲸类动物性别的鉴定 被引量:5
5
作者 王加连 杨光 +2 位作者 周开亚 魏辅文 严洁 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期20-23,共4页
哺乳动物Y染色体短臂上的Sry基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry基因保守区序列设计引物 ,以非性别特异性的线粒体DNA细胞色素b基因作为阳性对照 ,用PCR扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry基因片断并对其进行凝胶电泳分析... 哺乳动物Y染色体短臂上的Sry基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry基因保守区序列设计引物 ,以非性别特异性的线粒体DNA细胞色素b基因作为阳性对照 ,用PCR扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry基因片断并对其进行凝胶电泳分析来鉴定鲸类动物的性别。通过此方法对 87个已知性别鲸类动物标本的检验 ,结果完全正确 ,并进一步应用此方法成功地完成了另外 33个未知性别鲸类标本的性别鉴定。由此建立了一套简单、快速。 展开更多
关键词 SRY基因 性别鉴定 标本 性发育 PCR扩增 鉴定 特异性 鲸类动物 哺乳动物 引物
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鸟类性别决定机制及性别鉴定的研究进展 被引量:17
6
作者 胡锐颖 李仲逵 丁小燕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期297-301,共5页
鸟类的性别决定是一个多基因参与的级联调控过程。这一过程受 Z染色体连锁的 DMRT1 基因, W染色体连锁的PKC1W 和其他多种因子共同调控。文章综述了性别决定基因及其功能、性别鉴定方法等方面的研究进展。
关键词 鸟类 性别决定 性连锁基因 性别鉴定 PCR
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水牛胚胎性别鉴定的PCR方法 被引量:5
7
作者 付强 张明 +4 位作者 郑海英 秦文松 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1096-1100,共5页
根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进... 根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率。结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24)。该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用。 展开更多
关键词 SRY基因 胚胎 PCR 性别鉴定
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CHD基因与非平胸鸟类性别鉴定 被引量:16
8
作者 刘铸 白素英 田秀华 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期147-150,共4页
自1995年CHD基因被应用于鸟类性别的分子鉴定以来,非平胸类鸟类性别鉴定问题正逐步被解决,CHD基因已经成为非平胸鸟类性别鉴定最重要的分子标记。阐述和分析了CHD基因在扩增目标及引物设计、取样范围及辅助技术和所涉足的科研领域等方... 自1995年CHD基因被应用于鸟类性别的分子鉴定以来,非平胸类鸟类性别鉴定问题正逐步被解决,CHD基因已经成为非平胸鸟类性别鉴定最重要的分子标记。阐述和分析了CHD基因在扩增目标及引物设计、取样范围及辅助技术和所涉足的科研领域等方面的发展及现状。期望随着CHD基因研究的深入,建立起完善的基于CHD基因的鸟类性别鉴定体系,通过更广泛的应用,促使涉及鸟类性别鉴定的科学研究向着更深、更广的方向发展。 展开更多
关键词 非平胸鸟类 性别鉴定 CHD基因 分子标记
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鹌鹑性别鉴定的分子标记方法 被引量:10
9
作者 付晶 孙洪霞 白秀娟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期77-80,共4页
采用PCR方法扩增北京白羽蛋用鹌鹑基因组中性别基因CHD相关片段,探讨鹌鹑性别的分子标记方法。通过特异引物2550F/2718R,对3对已知性别和14只未知性别鹌鹑性别基因片段进行特异性扩增。结果表明,这对引物从雄性鹌鹑中扩增出1条片段,从... 采用PCR方法扩增北京白羽蛋用鹌鹑基因组中性别基因CHD相关片段,探讨鹌鹑性别的分子标记方法。通过特异引物2550F/2718R,对3对已知性别和14只未知性别鹌鹑性别基因片段进行特异性扩增。结果表明,这对引物从雄性鹌鹑中扩增出1条片段,从雌性鹌鹑中扩增出2条片段,可以对鹌鹑的性别作出准确鉴定。该方法可以应用于初生鹌鹑的性别筛选,降低饲养成本,提高经济效益。对2条片段进行克隆测序,片段长度分别为613和446bp。 展开更多
关键词 鹌鹑 性别鉴定 CHD基因
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基于AMEL基因的绵羊性别鉴定技术 被引量:8
10
作者 管峰 朱嵊 +1 位作者 刘军 张明洲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期906-907,共2页
[目的]探讨将牙釉蛋白(AMEL)基因用于绵羊性别鉴定的可行性。[方法]采用酚-氯仿法从湖羊的耳皮肤组织中提取基因组DNA。分别以公羊和母羊的DNA为模板,以AMEL引物和SRY引物进行PCR扩增。[结果]经扩增后母羊得到一条来自X染色体的270bp条... [目的]探讨将牙釉蛋白(AMEL)基因用于绵羊性别鉴定的可行性。[方法]采用酚-氯仿法从湖羊的耳皮肤组织中提取基因组DNA。分别以公羊和母羊的DNA为模板,以AMEL引物和SRY引物进行PCR扩增。[结果]经扩增后母羊得到一条来自X染色体的270bp条带,而公羊则得到270和210 bp的两条带。两种方法对10份已知DNA样品检测结果与实际性别完全一致。PCR产物的电泳条带较为清晰,相同性别电泳条带数完全一致,而不同性别间电泳条带数和片段大小差异显著。AMEL引物扩增雌性个体DNA实际电泳条带数和理论条带数一致,而来自雄性结果却不一致,这可能与非特异性扩增有关。[结论]AMEL基因比SRY基因具有更高的灵敏性,可用于判定XY染色体动物的性别。 展开更多
关键词 AMEL基因 SRY基因 绵羊 性别鉴定
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荧光引物扩增AMG基因鉴定古代人骨遗骸的性别 被引量:5
11
作者 刘树柏 崔银秋 +2 位作者 谢承志 朱泓 周慧 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期139-142,共4页
建立一种用荧光标记引物扩增AMG基因的性染色体同源片段方法,对古代人骨遗骸进行性别鉴定.用其测定5个古代遗骸的性别,其结果与形态学结果一致.
关键词 荧光标记引物 AMG基因 性别鉴定 古代人骨遗骸 聚合酶链式反应 考古学
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利用SRY基因和微卫星标记鉴定反刍动物性别 被引量:16
12
作者 张秀华 吴登俊 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期133-138,共6页
以反刍动物为研究对象,应用多重PCR技术扩增绵羊基因组中X、Y染色体上的4个微卫星标记和SRY基因,根据基因型进行性别鉴定,试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。结果表明所设计SRY基因的引物具有高度特异性,是性别鉴... 以反刍动物为研究对象,应用多重PCR技术扩增绵羊基因组中X、Y染色体上的4个微卫星标记和SRY基因,根据基因型进行性别鉴定,试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。结果表明所设计SRY基因的引物具有高度特异性,是性别鉴定的主要依据,而Y染色体上的MCM158、MAF45两标记由于特异性不好,因此不适用于性别鉴定,对于X染色体上所选的两标记MILVET09和AE25只能进一步验证所鉴定的雄性个体。得出结论在被检个体中,能同时扩增出SRY基因、MCM158、MAF45,X染色体上MILVET09和AE25,且X染色体上的MILVET09、AE25基因型为纯合子的个体为正常的雄性;被检个体中只有Y染色体上MCM158、MAF45和X染色体上MILVET09、AE25的扩增产物,而没有SRY基因的扩增产物,则被检个体为雌性,且MILVET09、AE25的基因型对雌性个体的性别判断无影响。MCM158、MAF45两标记基因型不影响个体的性别鉴定结果。 展开更多
关键词 SRY基因 微卫星标记 性别鉴定
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考古样品中Amelogenin同源基因的提取和检测 被引量:4
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作者 张虎勤 杨周岐 +2 位作者 刘芳娥 张金 赵文明 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期213-216,共4页
目的利用人类性染色体Amelogenin同源基因在X、Y染色体上序列长度的差异,选择设计引物,对考古样本进行古DNA性别信息研究。方法采用苯酚/氯仿-二氧化硅-超滤离心方法提取东岭墓葬群殉人骨骼、牙齿古DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电... 目的利用人类性染色体Amelogenin同源基因在X、Y染色体上序列长度的差异,选择设计引物,对考古样本进行古DNA性别信息研究。方法采用苯酚/氯仿-二氧化硅-超滤离心方法提取东岭墓葬群殉人骨骼、牙齿古DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离和检测古DNA扩增片段。结果8个墓葬16个样品中有7个样品出现阳性扩增检测,目标基因片段清楚,男性为二条带(X、Y),女性为一条带(X),牙齿样品检测成功率优于骨骼样品。结论改进的苯酚/氯仿—二氧化硅—超滤分离法是较好的古DNA提取方法,具有降低PCR抑制剂、消耗成本低和提取成功率高等特点。基于人类X、Y染色体Amelogenin同源基因的古DNA性别分析方法可成为分子考古重要的技术方法。 展开更多
关键词 Amelogenin基因 古DNA 分子性别鉴定 分子考古
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双温多重PCR鉴定猪早期胚胎性别的研究 被引量:3
14
作者 李小平 袁婷 +5 位作者 高飞 武蓉 黄永业 段新平 谢万华 逄大欣 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第14期34-36,共3页
通过PCR扩增哺乳动物雄性决定基因SRY来鉴定胚胎的性别在畜牧业生产上已经得到广泛应用,优化技术路线,缩短鉴定时间对后期实验的成功有非常重要的意义。根据猪的SRY基因和GAPDH(内标)基因序列,分别设计并合成两对引物,通过双温PCR反应... 通过PCR扩增哺乳动物雄性决定基因SRY来鉴定胚胎的性别在畜牧业生产上已经得到广泛应用,优化技术路线,缩短鉴定时间对后期实验的成功有非常重要的意义。根据猪的SRY基因和GAPDH(内标)基因序列,分别设计并合成两对引物,通过双温PCR反应实现对猪早期胚胎性别的快速鉴定,结果表明:母猪只能扩增出404bp的GAPDH基因片段,而公猪能同时扩增出309bp的SRY基因片段和404bp的GAPDH基因片段。阳性率为100%,鉴定时间较常规时间缩短2h时。表明该检测方法快速、准确。该方法为在转基因克隆动物研究中快速鉴定胎儿成纤维细胞系的性别提供了可靠的技术保证。 展开更多
关键词 SRY基因 双温PCR 多重PCR 性别鉴定
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牙釉质基因巢式PCR鉴定猪ICSI胚胎性别 被引量:4
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作者 孙俊丽 廖海洪 +3 位作者 张冰 孙如玉 卢克焕 卢晟盛 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2202-2207,共6页
【目的】建立可准确鉴定猪胚胎性别、可靠的巢式PCR反应体系及研究卵胞浆内单精子显微注射技术(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)对胚胎性别的影响。【方法】根据猪X染色体和Y染色体上牙釉质基因(Amelogenin gene,AMEL)第三内含... 【目的】建立可准确鉴定猪胚胎性别、可靠的巢式PCR反应体系及研究卵胞浆内单精子显微注射技术(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)对胚胎性别的影响。【方法】根据猪X染色体和Y染色体上牙釉质基因(Amelogenin gene,AMEL)第三内含子上9~10 bp的缺失设计了巢式PCR引物,并利用10个猪耳组织基因组DNA样品优化了PCR扩增条件,巢式PCR—荧光标记的半自动基因组扫描技术鉴定205个猪ICSI早期囊胚性别。【结果】特异性扩增了199个ICSI样品,6个ICSI胚胎扩增失败。经PCR产物片段扫描,只在178~179 bp处有峰的,判定为雌性胚胎,在169~171和178~179 bp 2处有峰则判定为雄性胚胎。共确定雄性胚胎71个,雌性胚胎128个,其中公母比例1∶1.8。【结论】基于牙釉质基因的巢式PCR方法可用于猪胚胎性别鉴定。性别比例偏离在一定程度上说明在ICSI囊胚中存在部分孤雌胚胎。 展开更多
关键词 牙釉质基因 猪ICSI胚胎 巢式PCR 性别鉴定
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蛋鸽早期性别DNA分子鉴定 被引量:2
16
作者 任晋东 张昊 +8 位作者 原爱平 王德前 田勇 钟声亮 温积辉 章纪地 林传海 丁育云 卢立志 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期170-173,共4页
蛋鸽早期性别的鉴定一直是制约蛋鸽业发展的瓶颈问题。在本研究中,我们采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测的方法,对20日龄期的100只蛋鸽的性别连锁基因染色体解旋酶DNA结合基因CHD(chromo-helicase DNA binding)进行跨内含子扩增检测。... 蛋鸽早期性别的鉴定一直是制约蛋鸽业发展的瓶颈问题。在本研究中,我们采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测的方法,对20日龄期的100只蛋鸽的性别连锁基因染色体解旋酶DNA结合基因CHD(chromo-helicase DNA binding)进行跨内含子扩增检测。蛋鸽早期DNA分子电泳检测结果与成年后的真实性别核对结果表明:所有雌性蛋鸽扩增结果含有两条带,其大小分别为280bp和250bp,雄性蛋鸽仅有一条280bp的条带;泊松统计分析发现,蛋鸽早期DNA分子判定结果达到统计学上显著水平,可以作为蛋鸽早期性别鉴定的一种方法。本实验实现了以DNA分子为基础的早期蛋鸽性别鉴定,将对蛋鸽业早期的饲养成本降低和早期雄性蛋鸽的淘汰起到准确的指导作用。 展开更多
关键词 蛋鸽 性别鉴定 CHD基因 PCR扩增
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猛禽非损伤性取样的性别分子鉴定方法 被引量:2
17
作者 刘铸 杨春文 +1 位作者 田恒久 金建丽 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期99-101,共3页
利用性染色体上CHD基因的P2/P8和2550F/2718R两对引物及微卫星位点(NVHfp102),对多种猛禽通过非损伤性取样进行性别分子鉴定研究。结果显示:2550F/2718R引物适用于隼形目脱落的有羽根羽毛和无羽根的不完整羽毛,拔取标本的羽毛可以进行... 利用性染色体上CHD基因的P2/P8和2550F/2718R两对引物及微卫星位点(NVHfp102),对多种猛禽通过非损伤性取样进行性别分子鉴定研究。结果显示:2550F/2718R引物适用于隼形目脱落的有羽根羽毛和无羽根的不完整羽毛,拔取标本的羽毛可以进行鉴定尝试,适用于鸮形目脱落的有羽根羽毛,脱落的无羽根不完整羽毛和拔取标本的羽毛不必进行鉴定尝试;利用P2/P8引物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳性别鉴定适用于猛禽脱落的无羽根不完整羽毛和拔取的标本羽毛;微卫星位点(NVHfp102)适用于隼科鸟类各种样本。 展开更多
关键词 鸮形目 隼形目 非损伤性取样 性别鉴定 CHD基因
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基于AMEL基因位点差异的水牛性别PCR鉴别方法 被引量:2
18
作者 李婷婷 左二伟 +9 位作者 李孟琪 谢龙 杨欢 卢晟盛 陆阳清 许惠艳 李永国 陆之泽 杨小淦 卢克焕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1516-1521,共6页
【目的】建立检测不同性别水牛染色体AMEL基因位点差异的PCR鉴别方法,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供简便可靠的检验手段。【方法】采用PCR扩增不同性别水牛染色体中的AMEL基因,Clone Manager 9.0软件分析序列差异,BLA... 【目的】建立检测不同性别水牛染色体AMEL基因位点差异的PCR鉴别方法,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供简便可靠的检验手段。【方法】采用PCR扩增不同性别水牛染色体中的AMEL基因,Clone Manager 9.0软件分析序列差异,BLASTn程序分析基因同源性,MEGA 6.06软件构建系统发育进化树。【结果】以水牛血液基因组DNA为模板、amel B1为引物,引物退火温度60℃,公水牛可扩增出两条清晰条带,长度分别为376(AMEL-X基因)和304 bp(AMEL-Y基因);母水牛仅扩增出1条清晰条带,长度为376 bp(AMEL-X基因)。与AMEL-X基因相比,水牛AMEL-Y基因缺失155-226区域的72 bp,同时存在20个基因型多态位点。临床检测结果证实,基于AMEL基因的PCR鉴别结果与实际性别的吻合率达100%,amel B1引物的灵敏度为0.5 ng模板量。BLASTn比对分析结果显示,水牛AMEL-X和AMEL-Y基因与不同哺乳动物的对应序列存在高度保守性,其相似性均接近或高于90%,与牛存在最近的亲缘关系。【结论】AMEL基因在哺乳动物中高度保守,且在不同性别水牛中呈多态性特征,以其作为分子靶标建立的水牛性别PCR鉴定方法切实可行,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供了一个更便捷、高效的检验手段。 展开更多
关键词 水牛 AMEL基因 位点差异 PCR 性别鉴定
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奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及SRY基因性别鉴定 被引量:2
19
作者 陈华涛 胡林勇 +2 位作者 杨艳 李倩 靳亚平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期1-7,共7页
为了探索和建立奶山羊胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验用组织块培养法分离纯化得到两株奶山羊胎儿成纤维细胞系,进行细胞形态观察、生长曲线及细胞周期和倍性分析。同时根据GenBank... 为了探索和建立奶山羊胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验用组织块培养法分离纯化得到两株奶山羊胎儿成纤维细胞系,进行细胞形态观察、生长曲线及细胞周期和倍性分析。同时根据GenBank上发布的山羊SRY基因设计合成一对PCR引物作为性别鉴定引物,另外根据山羊BLG基因序列设计一对引物作为内参引物,建立PCR反应体系对两株胎儿成纤维细胞系进行性别鉴定。结果表明,分离的胎儿成纤维细胞活力良好,可在体外快速生长、增殖、稳定培养;阳性对照和山羊胎儿成纤维细胞系2经PCR扩增得到337 bp片段和498 bp的BLG基因片段,而阴性对照和山羊胎儿成纤维细胞系1经PCR扩增得到498 bp的β-乳球蛋白基因片段。将337 bp片段和pMD19-T载体连接,构建重组载体pSRY,通过测序证明337 bp片段为SRY基因片段。这说明有337 bp扩增带的细胞系为雄性,无337 bp扩增带的细胞系为雌性。本试验为转基因奶山羊新品种的培育奠定了基础。 展开更多
关键词 奶山羊 成纤维细胞 SRY基因 性别鉴定
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应用巢式及复合PCR对小鼠早期胚胎进行性别鉴定 被引量:6
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作者 王晗 窦忠英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期158-161,165,共5页
根据小鼠SRY基因,设计并合成内外两对巢式PCR引物;同时,根据ZFY—ZFX基因的同源性,设计 合成其共同的巢式PCR引物,对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定,雄性样品可扩增262bp的SRY基 因和137bp的ZFY-ZFX基因片断,而雌性样品只能扩增137b... 根据小鼠SRY基因,设计并合成内外两对巢式PCR引物;同时,根据ZFY—ZFX基因的同源性,设计 合成其共同的巢式PCR引物,对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定,雄性样品可扩增262bp的SRY基 因和137bp的ZFY-ZFX基因片断,而雌性样品只能扩增137bp的ZFY—ZFX基因片断,其鉴定结果与已知性别 一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增,通过常规PCR与巢式PCR、 复合PCR的比较,确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎,其中雄性12 枚,雌性8枚,鉴定准确率为95.2%。 展开更多
关键词 小鼠胚胎 性别鉴定 PCR SRY基因 ZFY-ZFX基因
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