利用替代寄主增殖SfaMNPV的研究

利用替代寄主棉铃虫增殖SfaMNPV时 ,不同的接种浓度、虫龄及饲养温度对棉铃虫增殖病毒都有一定的影响。用 1× 1 0 7PIB/ml接种浓度感染三龄幼虫 ,幼虫饲养温度为 2 5℃时 ,获得的病毒产量最高 ,为每克虫尸含多角体 78.34亿。

替代宿主传代后的SfaMNPV的毒力测定及电镜观察

对四种替代宿主传代后的芹菜夜蛾核型多角体病毒（ＳｆａＭＮＰＶ，Ｓｙｎｇｒａｐｈａｆａｌｃｉｆｅｒａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）进行毒力测定，表明其对棉铃虫和小菜蛾仍具较高毒性，ＬＣ＿(５０)值分别为３．８０７×ｌ０￣４ＰＩＢ／ｍＬ和２．３６４×１０￣６ＰＩＢ／ｍＬ。超薄切片电镜观察，经过替代宿主传代后，ＳｆａＭＮＰＶ的包理类型发生了变化，表现在以多粒包埋为主向以单拉包埋为主的转变。

SfaMNPV-D克隆株感染小菜蛾的生物测定

芹菜夜蛾核型多角体病毒-D克隆株感染2龄和3龄小菜蛾幼虫,测得LC50分别为2.01×105和2.82×107PIBs/lml,相同浓度的病毒感染小菜蛾,致死率与幼虫虫龄呈负相关。

棉铃虫增殖SfaMNPV的产量试验

用棉铃虫作为芹菜夜蛾核型多角体病毒的替代宿主，研究了影响该病毒产量的几个因素．结果发现，当３龄棉铃虫用４．９４×１０５ＰＩＢｓ／ｍＬ饲喂６０ｈ得到的ＰＩＢ产量最高．每头棉铃虫平均产量达到７．６５１×１０９ＰＩＢＳ．全程死亡天数１１ｄ．同时发现幼虫死亡体重与ＰＩＢ产量之间存在显著的直线回归关系，斜率为０．０１３７２，即死亡幼虫体重每增加１ｍｇ，ＰＩＢ数目就要增加１．３７２×１０７．在比较温度对ＰＩＢ产量影响的试验中，２６℃比３０℃更有利于病毒生产，其增殖曲线典型，有较长的对数增殖期，最终病毒滴度高．

几种荧光增白剂对SfaMNPV的增效作用

利用化学增效因子提高杆状病毒的毒力,是扩大其实用性的重要途径.笔者以棉铃虫Helicoverpa armigera 3龄幼虫为供试虫,测试了几种荧光增白剂对芹菜夜蛾核型多角体病毒Syngrapha falcifera multiple nuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV 包含体(OB)、多角体来源病毒粒子(PDV)毒力的增效作用.

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。

芹菜夜蛾核型多角体病毒感染5种昆虫细胞系的研究

用０．５ＭＯＩ的ＳｆａＭＮＰＶ病毒感染液感染５种昆虫细胞系：Ｂｍｅ、Ｐｘ、Ｈｖ、Ｔｎ和ＬｅＨ．结果表明：这５种细胞系对ＳｆａＭＮＰＶ都敏感．感染１４４ｈ后，受染细胞百分率分别是２．８４％、１１．８３％、８％１、６．６５、６．２２和７．０２．电镜观察可见感染细胞核中出现病毒发生基质、病毒粒子和多角体，病毒形态大小分别是：多角体１．４５±０．１０μｍ，病毒粒子３８．１±２．０９×３０６±１４．５ｎｍ，多角体晶格为７０Ａ．

两种核多角体病毒感染甜菜夜蛾血细胞系的电镜观察

用苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV)和芹菜夜蛾核多角体病毒(SfaMNPV)感染甜菜夜蛾(Laphgma exigua)血细胞系Le-H-HNPU_7,通过光镜和电镜技术证实,该细胞系对这两种NPV都很敏感,病毒在细胞中的发生呈现出典型的NPV病理发展过程。电镜下可以见到受染细胞核中病毒发生基质、病毒粒子和多角体。其病毒形态大小分别是:AcMNPV病毒粒子为27.8±1.83×214.4±33.5nm,多角体为1.82±0.35μm,多角体蛋白质晶格为60.7A;SfaMNPV病毒粒子为38.1±2.09×306±14.5nm,多角体为1.45+0.1μ,多角体蛋白质晶格为70A。

芹菜夜蛾核型多角体病毒的毒力测定

sfaMNPV是新近从美国引进的一株杆状病毒，它能感染多种鳞翅目昆虫．本实验成功地利用它感染了小菜蛾、棉铃虫和甜菜夜蛾三种昆虫的幼虫，扩大了它的宿主范围．并测定了它对这三种昆虫的毒力．结果表明，SfaMNPV不仅能感染这三种昆虫，且能在这三种昆虫幼虫体内大量增殖，能作为这三种昆虫的生物杀虫剂使用．

杆状病毒诱导凋亡昆虫细胞中的线粒体反应和Ca^(2+)的变化

以罗丹明123作为线粒体跨膜电位荧光标记探针,流式细胞术和激光共聚焦显微镜研究显示,SfaMNPV诱导凋亡的斜纹夜蛾SL-1细胞,线粒体跨膜电位(?Ψm)产生明显改变,病毒接种后4h,膜电位开始下降,随着病毒感染进程的延续,线粒体膜电位?Ψm持续降低.利用Western杂交分析定位于线粒体的Bcl-2蛋白,结果表明,线粒体Bcl-2蛋白含量随病毒感染逐渐减小,表达水平降低,病毒感染下调了Bcl-2蛋白的表达.Western杂交检测到显示细胞色素c从线粒体向细胞质中释放,并在细胞质逐渐积累,呈时间依赖性特征.病毒感染诱发的线粒体反应,提示杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡,可能存在线粒体介导的凋亡信号转导途径.以Ca2+荧光探针Fluo-3/AM负载,激光共聚焦显微镜观察和荧光分光光度计测定凋亡细胞[Ca2+]i浓度的变化,检测到病毒诱导凋亡细胞内的[Ca2+]i浓度明显升高,细胞外Ca2+内流;在EGTA抑制胞外钙离子内流和细胞质Ca2+钳制状态下,PI染色后流式细胞仪检测显示细胞凋亡不受影响,说明胞质内游离Ca2+升高和胞外钙离子内流不是细胞凋亡的主要诱因,提示内质网钙库Ca2+排空可能是SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡信号转导通路中的重要媒介.