Sh-RNAi对NG108-15细胞膜受体基因TNF-R1的干扰

目的NG108-15细胞膜肿瘤坏死因子(TNF)受体(TNF-R)1在受到基因干扰后,阿黑皮素原(POMC)、神经肽(NP)Y和刺鼠相关肽(AGRP)神经内分泌基因受到干扰的情况。方法采用sh-RNAi基因干扰技术干扰TNF-R1的基因表达,并利用RT-PCR技术检测TNF-R1、POMC、NPY和AGRP基因的表达情况。结果针对TNF-R1受体的膜外半胱氨酸富集区1(CRD1)所设计的sh-1干扰序列,对TNF-R1受体的基因表达具有明显的下调作用,并进而对POMC、NPY和AGRP等神经内分泌基因产生程度不同的下调影响。结论可通过sh-RNAi干扰技术来治疗TNF-α诱发的下丘脑神经内分泌性疾病。

shWnt5a重组慢病毒的制备及其对黑素瘤细胞侵袭的抑制作用

目的构建下调人Wnt5a基因表达的重组质粒并制备重组慢病毒,感染黑素瘤细胞后,观察其对该细胞侵袭的影响。方法构建下调人Wnt5a基因表达的重组质粒pLKO.1-shWnt5a,利用pLKO.1慢病毒包装系统和HEK293T细胞包装、制备携带shWnt5a的重组慢病毒颗粒,并感染WM793B黑素瘤细胞,建立稳定低表达Wnt5a的WM793BWnt5a-黑素瘤细胞株。采取细胞迁移与侵袭实验检测Wnt5a对黑素瘤细胞侵袭的影响。结果成功制备了携带shWnt5a的重组慢病毒,建立低表达Wnt5a的稳定转染细胞株WM793BWnt5a-,细胞迁移与侵袭实验证明抑制Wnt5a基因的表达可以显著抑制黑素瘤的侵袭能力。结论下调Wnt5a基因的表达对黑素瘤的侵袭能力有明显的抑制作用。