饲粮不同能量水平对陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和微生物组成的影响

旨在探究饲粮不同能量水平对陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和菌群结构的影响。选择40只体重[(13.80±1.60)kg]接近的陕北白绒山羊断奶公羔随机分为4组,饲喂消化能水平分别为9.16(Ⅰ组)、9.66(Ⅱ组)、10.16(Ⅲ组)和10.66 MJ·kg^(-1)(Ⅳ组)4种饲粮,所有饲粮的粗蛋白质水平均为11.8%。饲养试验持续60 d,包括7 d预试期和53 d正试期。试验结束后采集所有动物瘤胃液,测定瘤胃发酵参数,提取瘤胃液总DNA,PCR扩增16S rRNA的V3~V4区进行高通量测序及分析。结果显示:1)随着饲粮能量水平的提高,瘤胃液pH、氨态氮(NH3-N)含量和乙酸/丙酸的比值逐渐降低,总挥发性脂肪酸、乙酸和丙酸含量呈现出先增加后降低的变化趋势,微生物菌体蛋白(MCP)、丁酸和戊酸含量逐渐升高;Ⅳ组pH显著低于其他3组(P<0.05),Ⅰ组丙酸含量显著低于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组乙酸/丙酸的比值极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01)。2)瘤胃微生物物种多样性结果表明,随着饲粮能量水平的提高,Shannon和Simpson指数逐渐降低,而Chao1、faith_pd和observed_OTUs指数均呈现出先增加后降低的变化趋势,Ⅰ组和Ⅱ组Chao1和observed_OTUs指数均显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05)。3)对瘤胃微生物的物种组成分析发现,拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)是所有试验羊瘤胃优势菌门,且随着饲粮能量水平的提高,拟杆菌门的相对丰度逐渐降低,厚壁菌门和变形菌门的相对丰度逐渐升高。普雷沃氏菌属(Prevotella)和瘤胃球菌属(Ruminococcus)是所有试验羊瘤胃优势菌属,且随着饲粮能量水平的提高,普雷沃氏菌属相对丰度逐渐降低,而瘤胃球菌属相对丰度极显著升高。4)瘤胃微生物的物种差异性方面:门水平上,Ⅳ组变形菌门(Proteobacteria)相对丰度最高,且显著高于其他3组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组TM7相对丰度极显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组互氧菌门(Synergistetes)相对丰度显著高于其他3组(P<0.05);属水平上,Ⅰ组瘤胃球菌属(Ruminococcus)相对丰度极显著低于其他3组(P<0.01),Ⅰ组和Ⅱ组颤螺旋菌属(Oscillospira)相对丰度极显著低于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01),Ⅰ组和Ⅲ组未分类拟杆菌(Unspecified_Bacteroidales)相对丰度显著高于Ⅱ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)、未分类韦荣氏球菌科(Unspecified_Veillonellaceae)、未分类毛螺菌科(Unspecified_Lachnospiraceae)和未分类梭菌(Unspecified_Clostridiales)相对丰度显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅳ组Unspecified_RF32相对丰度显著高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组Unspecified_F16相对丰度显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P<0.05)。综上所述,饲粮不同能量水平影响陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性,随着饲粮能量水平的提高,瘤胃微生物的丰富度有逐渐降低的变化趋势,显著改变了变形菌门(Proteobacteria)、互氧菌门(Synergistetes)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)和解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)等细菌的相对丰度(P<0.05),且消化能水平为9.66 MJ·kg^(-1)的饲粮能够有效改善陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和细菌组成。

饲料中添加高羊毛氨酸硒对陕北白绒山羊羯羊瘤胃古菌结构与组成的影响

为明确不同剂量高羊毛氨酸硒(SeHLan)对陕北白绒山羊羯羊瘤胃古菌结构与组成的影响,本研究选取发育一致的陕北白绒山羊羯羊32只,均分为4组,分别饲喂硒含量为0.016 mg/kg(CK)、0.300 mg/kg、0.600 mg/kg和1.200 mg/kg的饲料,饲养70 d后,采集羯羊瘤胃液,提取DNA并利用古菌特异性引物进行PCR扩增,对古菌V4-V5区进行高通量测序和羯羊瘤胃液古菌结构与组成分析。结果表明:随着SeHLan添加量增加,各处理瘤胃液古菌α多样性指数呈现出先降低后增高的变化趋势,但处理间瘤胃液古菌α多样性指数差异均不显著。各处理瘤胃液,在门水平上广古菌门(Euryarchaeota)古菌,在科水平上甲烷短杆菌科(Methanobacteriaceae)古菌,在属水平上甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)古菌的相对丰度均接近80%,且随着饲料中SeHLan添加量增加,相对丰度呈现先降低后升高的变化趋势。0.600 mg/kg硒含量饲料处理的羯羊瘤胃液在门水平上广古菌门(Euryarchaeota)古菌,在科水平上甲烷杆菌科(Methanobacteriaceae)古菌,在属水平上甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)古菌,相对丰度显著低于其他3个处理。综上所述,饲料中添加SeHLan显著影响陕北白绒山羊羯羊瘤胃液古菌组成及结构,0.600 mg/kg硒含量饲料处理的羯羊瘤胃产甲烷菌丰度显著低于其他处理。

陕北白绒山羊卵巢颗粒细胞分离及培养条件的优化

为了解析颗粒细胞的生物学特性及其在卵巢排卵、母羊高产中的生物学作用,试验以陕北白绒山羊卵巢为研究对象,比较了切剖法和注射器抽吸法分离卵巢颗粒细胞,检测细胞活率;分别用DMEM、DMEM/F12和MEM培养基加入10%FBS、β巯基乙醇和1%双抗培养颗粒细胞(即DMEM组、DMEM/F12组和MEM组),用CCK-8法检测培养24 h、48 h的细胞活力,EdU掺入法检测细胞增殖,RT-PCR法检测增殖相关基因(PCNA、CyclinD1、CDK2)及凋亡相关基因(BAX、BCL-2、Caspase3)的表达。结果表明:注射器抽吸法分离卵巢颗粒细胞所得的细胞活率高于切剖法,切剖法可以获得更多的细胞数量;MEM组的细胞活力极显著高于DMEM/F12组和DMEM组(P<0.01),DMEM/F12组细胞活力在24 h、48 h时高于DMEM组但差异不显著(P>0.05)。MEM组与DMEM/F12组EdU染色阳性细胞数差异不显著(P>0.05),MEM组与DMEM/F12组均显著高于DMEM组(P<0.05);MEM组PCNA、CyclinD1基因的表达量高于其他两组,但差异不显著(P>0.05),CDK2基因的表达量极显著高于其他两组(P<0.01),DMEM/F12组和DMEM组的PCNA、CyclinD1和CDK2基因的表达量差异不显著(P>0.05)。MEM组Caspase3的表达量低于其他两组但差异不显著(P>0.05),BCL-2/BAX的相对表达量极显著高于DMEM/F12组和DMEM组(P<0.01)。说明采用抽吸法分离卵巢颗粒细胞并辅以MEM培养基培养,可以实现对陕北白绒山羊卵巢颗粒细胞的有效体外培养。

陕北白绒山羊Notch2基因多态性与绒毛和生长性状的相关性分析

【目的】探究陕北白绒山羊Notch2基因插入/缺失(insertion/deletion, InDel)遗传多态性及其与绒毛和生长性状的相关性,为陕北白绒山羊分子辅助育种提供理论依据。【方法】采集1 469只成年雌性陕北白绒山羊耳组织,提取基因组DNA,并测定绒长、毛长、体长、体高等绒毛与生长性状数据。参考GenBank和Ensembl数据库提供的山羊Notch2基因InDel遗传变异信息设计引物,利用PCR扩增和直接测序法检测Notch2基因17个InDels突变的多态性,并分析其与陕北白绒山羊绒毛和生长性状的相关性。【结果】陕北白绒山羊Notch2基因分别在第15内含子区的12 bp InDel(rs665021370)和第25内含子区的21 bp InDel(rs653705114)存在多态性,且2个InDels位点均存在插入/插入型(II)、杂合型(ID)和缺失/缺失型(DD)3种基因型,这2个位点均属于低度多态(P<0.25),且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析结果表明,Notch2基因rs665021370位点突变与陕北白绒山羊体高或体长呈显著或极显著相关(P<0.05;P<0.01);rs653705114位点突变与陕北白绒山羊毛长、胸宽和体高呈显著或极显著相关(P<0.05;P<0.01)。2个InDels位点不属于强连锁关系。【结论】Notch2基因rs665021370和rs653705114位点突变对陕北白绒山羊绒毛或生长性状有显著影响,可作为陕北白绒山羊优良性状选育的分子标记。

羊绒生长期、休止期陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达

【目的】研究角蛋白相关蛋白9.2基因(KAP9.2)和Hoxc13基因在羊绒生长不同阶段皮肤组织中的表达量对产绒量的影响,为羊绒生长的调控机理研究奠定基础。【方法】以陕北白绒山羊为研究对象,以奶山羊作为对照,利用qRT-PCR方法,检测羊绒生长期和休止期高产、低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达量。【结果】对于KAP9.2基因,在羊绒生长期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著低于低产绒量陕北白绒山羊(P<0.01),而在羊绒休止期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量却显著高于低产绒量陕北白绒山羊和奶山羊(P<0.05);对于Hoxc13基因,在羊绒休止期高产和低产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著高于奶山羊(P<0.01)。高产和低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因在生长期、休止期平均相对表达量的变化趋势相似,均表现为生长期极显著低于休止期(P<0.01)。【结论】KAP9.2对绒毛生长有抑制作用;Hoxc13对KAP9.2基因的表达可能具有调控作用。

陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆

【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融合率为71.54%(181/253),体外培养后的卵裂率为68.33%(123/180),囊胚发育率为25.20%(31/123);在此基础上,构建了537枚克隆胚,将其中卵裂的359枚分别移植到32只代孕母羊体内,移植60d后,有2只受体母羊确认妊娠,最终1只受体母羊妊娠第4月流产出2只死羔;另1只受体母羊维持到期并顺产体细胞克隆羊1只。经遗传学鉴定,2只流产羊羔与1只存活个体均为体细胞核移植后代。【结论】获得陕北白绒山羊克隆个体,建立了相对完善的陕北白绒山羊克隆技术体系。

空怀期陕北白绒山羊母羊蛋白质需要量研究

【目的】研究空怀期陕北白绒山羊的蛋白质需要量,为建立和完善陕北白绒山羊饲养标准提供基础数据。【方法】将体质量相近、健康状况良好的24只第2胎次空怀期陕北白绒山羊母羊随机分成4组,各组试验羊分别饲喂消化能水平均为NRC(1981)肉用和奶用山羊推荐维持需要量的1.2倍、粗蛋白质水平分别为NRC(1981)肉用和奶用山羊推荐维持需要量的80%,90%,100%和110%饲粮,进行为期66d的饲养试验(其中预试期7d);同时在试验中期(第25天),每组选择3只羊按照全收粪、尿法进行为期7d的消化代谢试验。【结果】(1)空怀期陕北白绒山羊母羊对4种日粮粗蛋白质的表观消化率差异不显著(P>0.05),平均为(65.54±0.43)%;(2)供试羊平均日增质量随日粮粗蛋白质和可消化粗蛋白质摄入量的增加呈近似于直线的变化(P<0.05),其相关系数分别为0.989 6和0.982 5。【结论】建立了空怀期陕北白绒山羊母羊粗蛋白质(CP)和可消化粗蛋白质营养需要量(DCP)与代谢体质量(W0.75)和平均日增质量(ADG)间的回归方程,确定了空怀期陕北白绒山羊母羊饲粮中粗蛋白质和可消化粗蛋白质水平(以风干样为基础)分别以8.29%～10.43%和5.43%～6.83%较为适宜。

陕北白绒山羊DGAT1基因外显子14多态性及其与部分生长和胴体性状的关系

【目的】探讨陕北白绒山羊DGAT1基因的SNPs及其与部分生长、胴体性状的相关性,为陕北白绒山羊分子标记辅助选择提供理论依据。【方法】测定234只陕北白绒山羊的部分生长、胴体指标,利用PCR-SSCP技术分析其DGAT1基因外显子14的多态性及与生长和胴体性状的关系。【结果】该座位存在一个突变位点(G→A),此SNPs导致甘氨酸(G)突变为谷氨酸(E);该群体的该位点有1对等位基因A和B以及3种基因型AA、AB和BB,A基因为优势等位基因,AA型为优势基因型,群体处于Hardy-Weinberg非平衡状态;AA型与BB型之间、AB型与BB型之间均在断奶重、周岁重、胸围和管围4个性状上差异极显著(P<0.01),但AA型与AB型之间在此4个性状上差异不显著(P>0.05);3种基因型间在其他性状上差异均不显著(P>0.05);在初生重、周岁重和胸围上均表现为BB型>AA型>AB型,在断奶重、体高和管围上均表现为BB型>AB型>AA型。【结论】该基因的此突变位点与绒山羊育种指标具有一定的相关性,通过提高BB型的频率可望改善绒山羊的生长发育及胴体性状;DGAT1基因可作为陕北白绒山羊生长及胴体性状的候选基因,也可作为绒山羊肉用性能的分子标记。

饲粮不同消化能水平对25~35 kg陕北白绒山羊公羔生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响

本试验旨在研究饲粮不同消化能水平对25~35 kg陕北白绒山羊公羔生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响。选取体况良好、体重为(26.27±1.49)kg的6月龄陕北白绒山羊公羔32只,采用单因子随机区组设计分为4组,每组8只羊。各组试验羊饲喂粗蛋白质水平为11.06%,消化能水平分别为9.28(Ⅰ组)、9.77(Ⅱ组)、10.27(Ⅲ组)和10.77 MJ/kg(Ⅳ组)的饲粮,饲养试验预试期15 d,正试期60 d,当试验羊平均体重达到35 kg时,每组选择3只羊进行为期13 d的消化代谢试验,其中预试期7 d,正试期6 d。结果表明:1)Ⅱ组试验羊平均干物质日采食量和平均日增重最高,料重比最低,但各组之间差异不显著(P>0.05)。2)试验羊增重收益和经济效益以Ⅱ组最高,Ⅰ组次之,Ⅳ组最低,各组之间差异不显著(P>0.05)。3)Ⅱ组摄入总能、消化能和能量表观消化率均最高,摄入总能极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01),消化能显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),能量表观消化率显著高于Ⅳ组(P<0.05);Ⅰ组粪能最高,Ⅱ组次之,Ⅲ组最低,Ⅰ组极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01)。4)干物质、有机物、粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和粗纤维表观消化率均以Ⅱ组最高,且呈现出随着消化能水平的提高表现出先升高后降低的趋势;其中,干物质表观消化率极显著高于Ⅰ组(P<0.01),显著高于Ⅳ组(P<0.05),有机物表观消化率显著高于Ⅳ组(P<0.05),中性洗涤纤维表观消化率极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),酸性洗涤纤维表观消化率极显著高于其他3组(P<0.01),粗纤维表观消化率极显著高于Ⅳ组(P<0.01),显著高于Ⅰ组(P<0.05),粗蛋白质表观消化率极显著高于Ⅳ组(P<0.01)。粗脂肪表观消化率Ⅱ组最低,极显著低于Ⅳ组(P<0.01),且表现出随着消化能水平的提高而逐渐升高的趋势。5)饲粮不同消化能水平对试验羊血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和总蛋白含量均无显著影响(P>0.05)。试验羊血清游离脂肪酸、β-羟基丁酸和甘油三酯含量均随着饲粮消化能水平的提高而逐渐降低;其中,血清游离脂肪酸含量Ⅰ组显著高于Ⅳ组(P<0.05);Ⅰ组和Ⅱ组血清β-羟基丁酸和甘油三酯含量显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05)。试验羊血清葡萄糖、白蛋白和低密度脂蛋白含量随着饲粮消化能水平提高呈现出先升高后降低的趋势,Ⅱ组葡萄糖和白蛋白含量显著高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅱ组低密度脂蛋白含量显著高于Ⅲ组(P<0.05),极显著高于Ⅳ组(P<0.01)。试验羊血清尿素氮含量Ⅰ组最高,极显著高于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.01)。由以上结果并考虑饲养成本及养殖效益,25~35 kg陕北白绒山羊公羔最佳饲粮消化能水平为9.77 MJ/kg。

陕北白绒山羊断奶羔羊钙磷需要量的研究

旨在研究日粮中不同钙磷水平对陕北白绒山羊断奶羔羊生产性能、养分消化代谢的影响,为制订陕北白绒山羊钙磷需要量标准提供参考依据。试验选取36只((16.48±2.37)kg)日龄、体况相近的陕北白绒山羊断奶羔羊,采用2×2试验设计,随机分为4组,每组设3个重复,每个重复3只羊,分别饲喂不同钙磷水平的日粮,Ⅰ组(0.60%钙、0.45%磷)、Ⅱ组(0.60%钙、0.65%磷)、Ⅲ组(0.80%钙、0.45%磷)和Ⅳ组(0.80%钙、0.65%磷)。试验共65d。在试验第30天,从每个重复中随机挑选1只羊,共12只,分别放入单独的代谢笼中进行消化代谢试验。结果表明:1)日粮不同钙磷水平对陕北白绒山羊断奶羔羊的干物质采食量没有显著的影响(P>0.05),高钙、高磷水平日粮能够显著的提高日增重(P<0.05)。2)日粮不同钙水平显著影响陕北白绒山羊断奶羔羊的总能消化率和代谢率(P<0.05)。3)日粮不同钙磷水平分别显著影响陕北白绒山羊断奶羔羊的进食钙、磷量,排泄钙、磷量,沉积钙、磷量(P<0.05)。排泄钙、磷与进食钙、磷之间的线性关系分别为Y=0.662X+0.929(R^2=0.993),Y=0.776X+0.506(R^2=0.996),根据进食钙、磷与排泄钙、磷之间的相关关系可以外推出陕北白绒山羊断奶羔羊的内源损失钙、磷分别为0.929、0.506g·d^(-1)。沉积钙、磷与日增重之间的线性关系分别为Y=47.737 X-21.622(R^2=0.649),Y=53.770 X+18.973(R2=0.448)。结果显示,陕北白绒山羊断奶羔羊沉积钙、磷与日增重之间存在着线性关系。在本试验条件下,钙的最适添加水平为0.80%,磷的最适添加水平为0.45%。

哺乳期陕北白绒山羊羔羊体重生长发育规律研究

为揭示陕北白绒山羊哺乳期羔羊体重生长发育规律,为羔羊培育方案制定提供基础研究资料,以24只1日龄羔羊为研究对象,在每天准确测量其体重的基础上,分别绘制出哺乳期羔羊的累积生长量、绝对生长速度和相对生长速度曲线。结果表明:(1)1～75日龄羔羊体重随日龄增加呈近似于直线的曲线变化,且羔羊累积生长量与母羊累积产奶量呈极强正相关;(2)羔羊出生后1～10日龄日增重随日龄增加而快速增加,11日龄后日增重随日龄增加开始逐渐下降,其中11～20日龄期间羔羊日增重下降速度较快,21～75日龄期间羔羊日增重下降速度趋于平缓。

陕北白绒山羊断奶公羔的消化能需求量研究

【目的】研究饲粮消化能水平对陕北白绒山羊断奶公羔生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响,确定饲粮适宜的能量水平。【方法】选取40只体质量(13.80±1.60)kg的3月龄陕北白绒山羊断奶公羔,随机分为4组,分别饲喂粗蛋白质含量均为118 g/kg、消化能分别为9.16(Ⅰ组)、9.66(Ⅱ组)、10.16(Ⅲ组)和10.66 MJ/kg(Ⅳ组)的4种饲粮,进行为期60 d的饲养试验,测算试验羊全期干物质采食量(DMI60)、平均日增重(ADG_(60))、料重比(F/G_(60))及每隔15 d的平均干物质采食量(DMI15)、平均日增重(ADG_(15)),并测定血清生化指标。饲养试验结束后,每组选择3只羊进行消化代谢试验,预试期7 d,正试期4 d。【结果】①饲粮消化能水平对DMI60有极显著影响(P<0.01),对ADG_(60)有显著影响(P<0.05),但对F/G_(60)影响不显著(P>0.05);各组试验羊DMI60和ADG_(60)从高到低依次均为Ⅱ组>Ⅳ组>Ⅰ组>Ⅲ组,且Ⅱ组显著高于其他各组(P<0.05)。②各组试验羊的DMI15均随着饲养时间的增加而逐渐增大,且各组1~15,16~30,31~45和46~60 d的DMI15差异均达显著或极显著水平;各组试验羊ADG_(15)均随着饲养时间的增加呈现出先增高后降低的变化趋势,其中31~45 d的ADG_(15)最高。③Ⅱ组试验羊血清尿素氮含量最低,葡萄糖、白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量最高;随着饲粮消化能水平的提高,试验羊血清游离脂肪酸、β-羟基丁酸和甘油三酯含量逐渐降低,总胆固醇含量逐渐升高。④Ⅱ组试验羊摄入总能和消化能显著高于Ⅰ组(P<0.05),粪能极显著高于Ⅳ组(P<0.01),Ⅱ、Ⅳ组试验羊总能表观消化率极显著高于Ⅰ组(P<0.01)。⑤随着饲粮消化能水平的提高,干物质、有机物、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率呈现出先升高后降低的变化趋势,且均以Ⅱ组最高;粗脂肪表观消化率逐渐降低。【结论】陕北白绒山羊公羔断奶后45 d的饲粮最佳消化能水平为9.66 MJ/kg。

陕北白绒山羊HSL基因外显子1的SNPs及其与部分生产性状的相关分析

【目的】探讨陕北白绒山羊激素敏感脂酶(Hormone sensitive lipase,HSL)基因外显子1的SNP遗传多态性及其与产绒、胴体和生长性状的相关关系,为陕北白绒山羊分子标记辅助选择提供理论依据。【方法】测定168只陕北白绒山羊部分生长、胴体指标。利用PCR-SSCP技术分析HSL基因外显子1的SNP遗传多态性。【结果】陕北白绒山羊HSL基因外显子1有AB和AA 2种基因型,在群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态;AB与AA基因型个体的绒长差异极显著(P<0.01),体高和背膘厚差异显著(P<0.05),其他性状均无显著差异;AB基因型个体初生重、断奶重、绒长、周岁重、体高、体长、管围、背膘厚大于AA基因型,但AA基因型个体毛长、产绒量、胸围、眼肌面积大于AB基因型。【结论】陕北白绒山羊HSL基因外显子1具有多态性,该基因可能是陕北白绒山羊产绒及胴体性状的主效基因,或者与控制这些性状的主效基因相连锁。

0～56日龄陕北白绒山羊解剖特点及胃肠道参数变化规律探究

试验旨在研究0~56日龄羔羊胃肠道全重、相对净重、容积、长度等参数的变化规律。试验选用24只陕北白绒山羊,按照完全随机试验设计分为8组,每组3只,分别在0、3、7、14、21、28、42、56日龄屠宰、取样,测定各阶段羔羊体况发育情况及胃肠道全重、相对净重、容积及长度等参数。结果显示,除了皱胃外,各胃室相对净重均快速增长,7日龄后增速较高,在56日龄时,瘤胃相对净重从0日龄的29.34%提升到52.53%,网胃从11.83%到14.77%,瓣胃从6.54%上升到9.34%,而皱胃相对净重从52.29%下降到23.36%;小肠各部位净重均保持增长,十二指肠相对净重在0~56日龄整个阶段均保持在3.5%左右,而空肠均保持在90%左右,回肠相对净重在14日龄之前保持在1%左右,在14日龄之后保持在5%左右;大肠的各部位全重迅速增大,盲肠从0日龄的5.29g增长到56日龄的43.31g,结肠从11.67g增长到200.45g,直肠从3.03g增长到53.02g,前期增长缓慢,从28日龄开始,大肠各部位全重迅速增重。综上所述,28日龄是羔羊全面发育的一个界点,28日龄后,其消化道参数快速增长,特别是具有纤维物质消化能力的瘤胃、回肠、盲肠、结肠等部位,结合各方面因素可以预测,28日龄断奶具有可行性。

陕北白绒山羊不同采绒部位的表型参数及相关分析

试验选取陕西某羊场36只2岁陕北白绒山羊母羊,分5个体表部位采集绒样并对羊绒的伸直长度和细度进行测定,并进行方差分析,正态性检验和相关分析,结果显示肩部、体侧部、背部伸直长度极显著高于股部和腹部(P<0.01),5个部位在细度上无显著差异(P>0.05),伸直长度和细度满足正态分布。在伸直长度指标上,体侧部与股部之间存在极显著正相关(P<0.01),肩部与背部之间存在显著正相关(P<0.05)。在细度指标上,不同采绒部位之间的相关性均达到极显著正相关(P<0.01)。在肩部、背部和腹部,伸直长度与细度之间存在弱的正相关(0<r<0.3),在体侧部和股部,伸直长度与细度之间存在弱的负相关(-0.3<r<0)。结果说明,对体侧部及股部的选育是获得更高的绒毛长度和更低的绒毛细度的一个可能方法。

陕北白绒山羊Lhx2基因cDNA序列的克隆与原核表达

根据GenBank中已发表的Lhx2基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织克隆Lhx2基因编码区cDNA,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-Lhx2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。最终获得陕北白绒山羊Lhx2基因,长1 221bp;酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-Lhx2构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。

日粮蛋白质水平对陕北白绒山羊空怀期母羊生产性能和产绒性能的影响

为了探索舍饲条件下陕北白绒山羊对蛋白质的营养需要。采用单因子试验方法,将36只体重相近、健康的1周岁陕北白绒山羊空怀期母羊,随机分为4组,进行为期1个月的饲养试验,研究日粮不同蛋白水平(7.79%,8.45%,9.79%,10.40%)对陕北白绒山羊生产性能和产绒性能的影响。结果表明,日粮不同蛋白水平对陕北白绒山羊生产性能和羊绒细度无显著影响(P>0.05)。随着日粮蛋白质水平的升高,羊绒与羊毛的生长速度均表现为先增高后降低,当蛋白质水平为10.40%时,绒毛的生长速度显著降低(P<0.05)。因此,可以认为,陕北白绒山羊空怀期母羊饲粮的适宜蛋白水平为8.45%～9.79%。

陕北白绒山羊生长发育规律的研究

旨在揭示陕北白绒山羊的生长发育规律,为其选育和科学的饲养管理提供参考依据。选取日龄相近的39只陕北白绒山羊(公羊16只,母羊23只)分别测量其体重和体尺指标。结果表明:(1)陕北白绒山羊体重和体尺各项指标均随月龄增加呈上升趋势;(2)陕北白绒山羊绝对增重和相对增重在出生后至1月龄最大,在3月龄降至最低值,随后分别在5月龄、8月龄出现2个绝对增重高峰期,而相对增重呈现出平稳变化趋势;(3)陕北白绒山羊公羊体高绝对生长值在8月龄最高,母羊体高绝对生长值在9月龄最高,而公、母羊体高相对生长值也分别在8、9月龄最高,公、母羊体长绝对生长值均在9月龄最高,体长相对生长值均在4月龄最高,胸围绝对生长值和相对生长值均在5月龄最高,管围绝对生长值和相对生长值均在12月龄最高。综上,陕北白绒山羊在出生后1月龄内、4~5月龄和7~8月龄增重速度较快。体尺指标在4~5月龄和7~9月龄增速较快。在此期间应注意营养提供,从而充分满足其生长发育的营养需要。

细绒型和粗绒型陕北白绒山羊瘤胃细菌结构及组成

本研究旨在利用16S rRNA高通量测序技术分析细绒型和粗绒型陕北白绒山羊母羊瘤胃细菌结构与组成,为细绒型陕北白绒山羊的饲养提供理论基础。选择相同饲喂条件下6只细绒型和7只粗绒型陕北白绒山羊2岁母羊,采集瘤胃液并提取总DNA,经过PCR扩增后对16S rDNA的V3~V4区进行高通量测序分析。结果表明:1)2组间Faith’s PD指数、Chao1指数、Shannon指数和Observed_OTU指数差异均不显著(P>0.05),且均有细绒组低于粗绒组的趋势。2)门水平上,2组绒山羊瘤胃优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes),次级优势菌门依次为TM7、放线菌门(Actinobacteria)、蓝藻细菌门(Cyanobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、互氧菌门(Synergistetes)、螺旋体门(Spirochaetes)、软壁菌门(Tenericutes)和疣微菌门(Verrucomicrobia);属水平上,2组绒山羊瘤胃的优势菌属均为瘤胃球菌属(Ruminococcus)、普雷沃氏菌属(Prevotella)、拟杆菌目未明确分类属(Unspecified_Bacteroidales)和疣微菌科未明确分类属(Unspecified_Ruminococcaceae)。3)门水平上相对丰度前10位的优势菌门中,除了细绒组Proteobacteria的相对丰度显著低于粗绒组(P<0.05)和TM7的相对丰度显著高于粗绒组(P<0.05)外,其余菌门的相对丰度2组之间均差异不显著(P>0.05);次级优势菌门中,细绒组迷踪菌门(Elusimicrobia)、黏胶球形菌门(Lentisphaerae)和Verrucomicrobia的相对丰度均显著低于粗绒组(P<0.05),而细绒组WPS_2的相对丰度显著高于粗绒组(P<0.05)。4)相对丰度大于10%的优势菌属中,除了细绒组Prevotella的相对丰度极显著高于粗绒组(P<0.01)以外,其他优势菌属的相对丰度2组之间均差异不显著(P>0.05);相对丰度低于10%的次要优势菌属中,细绒组解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)、颤螺旋菌属(Oscillospira)、Dehalobacterium、Blautia、梭菌属(Clostridium)和欧文氏菌属(Erwinia)的相对丰度均显著低于粗绒组(P<0.05)。5)物种相关性网络分析结果显示,2组绒山羊瘤胃菌群之间的相关性和紧密性呈现出细绒组强于粗绒组。综上所述,细绒型绒山羊瘤胃菌群数量和菌属相对丰度低于粗绒型绒山羊,且存在一些特征菌属,细绒型绒山羊瘤胃菌群间互作关系和结构紧密性高于粗绒型绒山羊,提示绒山羊瘤胃菌群互作和结构稳定性可能对产绒性能产生影响。

CRISPR/Cas9介导的MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊粪便菌群分析

为了从绒山羊粪便微生物群落变化的角度对MSTN/FGF5基因编辑陕北白羊绒山的自身健康和环境安全性进行研究,利用6种不同培养基分别对MSTN/FGF5基因编辑和野生型陕北白绒山羊粪便中的微生物进行培养、计数,并做菌群结构的显著性检验分析。结果表明:FGF5/MSTN基因编辑和野生型陕北白绒山羊F0代和F1代公羊和母羊新鲜粪样经LB琼脂、伊红美蓝琼脂、TPY琼脂、胆硫乳琼脂、肠球菌琼脂和甘露醇盐琼脂培养后微生物计数分别为,F0代:公羊6.35±0.68,5.89±0.25;5.32±0.10,5.27±0.34;6.64±0.57,6.71±0.35;5.03±0.53,5.32±0.14;4.12±0.13,4.15±0.21;5.34±0.18,5.25±0.25;母羊6.62±0.45,6.64±0.31;4.80±0.51,4.75±0.45;7.20±0.30,7.15±0.55;4.30±0.52,4.42±0.62;5.83±0.51,5.73±0.86;6.24±0.28,6.24±0.21。F1代:公羊6.92±0.12,7.08±0.04;4.02±0.64,3.99±0.51;6.32±0.15,6.25±0.30;5.21±0.28,5.17±0.20;3.66±0.50,3.88±0.67;4.06±0.50,3.97±0.46;母羊7.12±0.24,6.96±0.19;4.15±0.19,4.25±0.24;6.45±0.30,6.56±0.45;4.97±0.42,4.87±0.38;4.04±0.96,3.96±0.57;4.10±0.28,3.85±0.37。F0和F1代MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊粪便中菌群结构之间不存在显著性差异(P>0.05)。本研究为FGF5/MSTN基因编辑陕北白绒山羊的安全性评价研究提供了试验数据和研究基础。