蒙脱石复配物对龙岩山麻鸭高产系产蛋性能、蛋品质、生殖器官指数、血清抗氧化和肠道通透性指标及蛋壳超微结构的影响

本试验旨在研究蒙脱石复配物对龙岩山麻鸭高产系产蛋性能、蛋品质、生殖器官指数、血清抗氧化和肠道通透性指标及蛋壳超微结构的影响。选用420日龄龙岩山麻鸭高产系475只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复19只。基础饲粮组(BD组)饲喂基础饲粮,霉变饲粮组(MD组)饲喂霉变饲粮,试验组在霉变饲粮中分别添加0.02 g/kg葡萄糖氧化酶(GOD组)、1.50 g/kg蒙脱石(MT组)和1.50 g/kg蒙脱石复配物(MC组)。预试期7 d,正试期35 d。结果表明:1)与BD组相比,MD组日产蛋重、输卵管重量指数和输卵管长度指数显著降低(P<0.05),料蛋比及血清二胺氧化酶(DAO)活性和丙二醛(MDA)、内毒素(ET)、D-乳酸(D-Lac)含量均显著升高(P<0.05)。2)与MD组相比,MC组日产蛋重、蛋壳重、蛋壳强度、蛋壳厚度、输卵管重量指数和输卵管长度指数显著提高(P<0.05),料蛋比显著降低(P<0.05);MT组蛋壳重和输卵管重量指数显著提高(P<0.05);GOD组平均日采食量、蛋壳重和输卵管重量指数显著增加(P<0.05)。3)与MD组相比,MC组和GOD组血清MDA含量显著降低(P<0.05),血清过氧化氢酶活性显著提高(P<0.05);MT组和MC组血清ET含量显著降低,GOD组血清ET含量和DAO活性显著降低(P<0.05)。4)蛋壳超微结构显示,MC组总厚度和有效层厚度显著高于其他各组(P<0.05)。各组之间乳突层厚度、有效层比例、乳突层比例和乳突宽度差异不显著(P>0.05)。综上所述,霉变饲粮中添加1.50 g/kg的由蒙脱石和葡萄糖氧化酶组成的蒙脱石复配物,可通过提高机体抗氧化能力和增强肠道屏障功能,提高龙岩山麻鸭高产系产蛋性能、生殖器官指数、蛋壳强度和蛋壳厚度,对蛋壳超微结构具有改善作用,效果优于蒙脱石或葡萄糖氧化酶单独添加。

产蛋高峰期与后期山麻鸭卵泡发育、抗氧化能力和自噬水平的比较

【目的】探讨不同产蛋阶段山麻鸭的卵泡发育、促性腺激素水平、抗氧化能力及卵泡自噬相关基因的变化规律,为开发延长蛋禽产蛋期新技术奠定研究基础。【方法】采用单因素完全随机试验设计,选取产蛋正常的产蛋高峰期(25周)和产蛋后期(70周)的龙岩山麻鸭各84只,随机各分为6个重复,每个重复14只。饲喂同一玉米-豆粕型基础饲粮,试验期8周。于第8周末,随机从每个重复选取3只体况良好、产蛋正常的蛋鸭采血、屠宰取样,检测各项血液生化指标及卵巢发育相关指标。【结果】与产蛋高峰期山麻鸭相比,①产蛋后期山麻鸭的小黄卵泡数量、小黄卵泡指数及平均小黄卵泡重均显著降低,闭锁卵泡重量显著增加(P<0.05)。②产蛋后期山麻鸭血浆中卵泡刺激素(FSH)水平显著降低(P<0.05);小黄卵泡的谷胱甘肽过氧化物酶和总超氧化物歧化酶活性显著降低、丙二醛水平显著升高,此外,闭锁卵泡的谷胱甘肽过氧化物酶和总超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05)。③产蛋后期山麻鸭卵泡中促卵泡素受体(FSHR)mRNA表达水平降低,叉头转录因子1(FOXO1)被激活并调控自噬相关基因(选择性自噬受体(SQSTM1)和beclin 1(BECN1)下调)(P<0.05)。【结论】山麻鸭进入产蛋后期,由于氧化应激增加,卵泡中FSH含量及敏感性降低,激活FOXO1调控卵泡颗粒细胞自噬,抑制卵泡发育。

龙岩山麻鸭胚胎肝间充质干细胞的分离、培养和鉴定

为探索龙岩山麻鸭体外细胞保存方式,本研究建立了胚胎肝间充质干细胞的体外培养体系,从而达到利用细胞保护优异物种资源的目的。选用18~20日龄健康龙岩山麻鸭鸭胚通过胰蛋白酶消化分离出肝间充质干细胞(LMSCs),进行体外培养,细胞形态观察。通过免疫荧光检测CD29和CD44表面标记物,并进行阳性率分析。龙岩山麻鸭胚胎LMSCs体外增殖能力良好。LMSCs阳性表达了CD29和CD44,阳性表达率分别为95.20%和93.46%。体外分离培养出龙岩山麻鸭胚胎LMSCs,可为水禽干细胞研究提供研究思路,并为龙岩山麻鸭种质资源保护和利用提供参考。

龙岩山麻鸭胚胎成纤维细胞的培养和鉴定

为培养龙岩山麻鸭鸭胚成纤维细胞。本研究选择龙岩山麻鸭10日龄鸭胚组织,采用组织块法和酶消化法进行成纤维细胞培养,利用免疫荧光法对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果表明,培养的鸭胚成纤维细胞12h后呈典型的长梭形,48h后,细胞轮廓清晰,核仁明显,传至第3代的成纤维细胞经DAPI和绿色荧光标记染色后均呈阳性,具有成纤维细胞的特征。本研究成功从龙岩山麻鸭鸭胚组织中分离培养出成纤维细胞,为后期龙岩山麻鸭开展分子生物学和细胞生物学等研究提供良好的基础。

龙岩山麻鸭蛋品质性状的全基因组关联研究

【目的】通过全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)技术筛选和鉴定鸭蛋品质性状的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点及候选基因,为龙岩山麻鸭蛋品质性状分子育种提供参考。【方法】试验测定产蛋后期235只龙岩山麻鸭母鸭蛋品质性状,包括蛋重(egg weight,EW)、蛋形指数(egg shaped index,ESI)、蛋壳厚(eggshell thickness,EST)、蛋壳强度(eggshell strength,ESS)、蛋壳颜色L^(*)、a^(*)、b^(*)值(eggshell colour L^(*),a^(*),b^(*),ESCL、ESCA和ESCB)、蛋白高度(albumin height,AH)、哈氏单位(Haugh unit,HU)、蛋黄颜色(egg yolk colour,EYC)、蛋黄重(egg yolk weight,EYW)和蛋黄比例(egg yolk percentage relative to egg weight,EYP)。使用ASReml-R 4.1软件多性状动物模型对蛋品质性状进行遗传参数估计。使用简化基因组测序技术对鸭血液基因组DNA进行SNP分型,分型后进行蛋品质性状与这些SNPs间的GWAS研究。【结果】龙岩山麻鸭蛋品质性状中,EW、ESI、EST、ESL、ESA和AU具有中高等的遗传力,遗传力在0.21—0.70之间。EW与AU存在较强的正遗传相关(rg=0.91±0.37)。ESI与EYC存在较强的遗传负相关(rg=-0.98±1.03)。EST与ESS具有表型正相关(rp=0.41±0.06),与ESA具有遗传和表型负相关(rg=-0.86±0.25和rp=-0.15±0.07),与ESB具有遗传和表型正相关(rg=0.96±0.37和rp=0.18±0.07)。ESA与ESB具有遗传和表型负相关(rg=-0.64±0.28和rp=-0.31±0.06)。GWAS研究结果表明,7个SNPs位点与ESI、EST和EYC达到5%基因组水平显著关联(P<4.74×10^(-6)),涉及6个候选基因。与ESI关联的SNP(chr20:11135563:G:C)位点位于20号染色体含有75A富含亮氨酸重复序列(leucine rich repeat containing 75A)基因内。与EST关联的2个SNPs(chr13:5766560:A:G和chrZ:968819:C:T)位点分别位于13号LOC106014427下游6.86 kb处和Z染色体转录因子4(transcription factor 4)基因内。与EYC关联的4个SNPs位点,其中1个(chr2:38155965:G:A)位于2号染色体钾电压门控通道亚家族H成员8(potassium voltage-gated channel subfamily H member 8)基因内;3个SNPs位于9号染色体上的位点,2个(chr9:22623156:G:A和chr9:22623155:T:C)位于胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1)内、1个(chr9:22490158:A:T)位于LOC106018641内。同时发现81个SNPs位点与蛋品质性状达到基因组水平潜在关联(P<9.48×10^(-5))。13个与EYC关联的SNPs位点集中在9号染色体0.84 Mb(22.16—23.00 Mb)区域内。【结论】估计了龙岩山麻鸭蛋品质性状的遗传参数,通过蛋品质性状GWAS研究鉴定了影响ESI、EST和EYC性状的7个显著的SNPs位点、6个候选基因和1个候选基因区域,这些结果为龙岩山麻鸭蛋品质性状分子育种提供参考信息。

龙岩山麻鸭产蛋量和蛋重性状的遗传参数估计

本研究旨在对龙岩山麻鸭高产系产蛋量和蛋重进行遗传参数估计。分析龙岩山麻鸭高产系第3世代394个个体17~71周龄每周的产蛋量(EP17~EP71)以及20、26、32、38、41、44、50、56、59、65、68、71周龄的蛋重(EW20~EN71)、平均蛋重(EWA)和总蛋重(EW)的描述性统计,并使用ASReml-R软件多性状动物模型对这些性状进行遗传参数估计。结果显示:龙岩山麻鸭高产系71周龄时平均产蛋量为330.59枚,变异系数在10.77~44.73;平均蛋重和总蛋重分别为68.57 g和22.67 kg;产蛋量为中低等遗传力(0.129~0.228),蛋重的遗传力(0.218~0.544)为中高等遗传力,EW41遗传力(0.544)为最高;产蛋量性状EP41与EP20、EN71均有较高的遗传相关和表型相关,分别为0.808、0.704和0.548、0.706;蛋重性状间具有较高的遗传和表型相关,分别在0.651~0.994与0.251~0.853。

本交笼模式下山麻鸭交配行为与受精率的相关性研究

为研究本交笼模式下养殖种鸭的可能性,测定山麻鸭受精率并观察交配行为。采用规格为1.50 m×0.84 m×0.65 m(长×宽×高)单体笼中饲养15只母鸭和1只公鸭,进行本交笼养状态下山麻鸭受精率与交配行为及其相关性研究。首先对本交笼养山麻鸭受精率进行统计,随后选择受精率低、中、高的部分笼组(分别是A、B、C组)进行行为学观察。结果表明:本交笼养山麻鸭总体平均受精率为63.68%±23.05%,鸭只平均求偶时间和交尾时间分别为12.50±5.65 s和15.88±5.18 s,平均每天交配次数为13.52±8.82次,平均交配成功率为54.30%±23.87%。公鸭个体间的求偶时间与交尾时间存在少量显著差异(P>0.05)。C组交配次数极显著高于B组和A组(P<0.01);C组交配成功率显著高于A组(P<0.05),与B组差异不显著(P>0.05);且山麻鸭受精率与交配次数呈极显著正相关(P<0.01),与交配成功率呈显著正相关(P<0.05)。研究显示:将种鸭饲养于本交笼中,鸭能发生交配行为,但总体受精率偏低,还需对该种饲养方式进行优化处理,以提高种鸭受精率。

抗缪勒氏管激素抑制山麻鸭卵泡发育分子机制的研究

【目的】探究抗缪勒氏管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)抑制山麻鸭卵泡发育的分子调控机制。【方法】选取40只29周龄产蛋山麻鸭,随机分为4组:AMH1、AMH2、AMH3和对照组,AMH1、AMH2和AMH3组给予2、20和200μg/d AMH多肽;对照组给予同等体积的生理盐水,整个试验持续21 d;每天记录产蛋量,在试验末采集卵巢和卵泡进行计数,称重计算卵巢指数,测定血清促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、孕酮(progesterone,P 4)和雌二醇(estradiol,E 2)水平,检测等级卵泡(F6)、小黄卵泡(SYF)和大白卵泡(LWF)中卵泡刺激素受体(FSHR)、促黄体生成素受体(LHR)、类固醇生成急性调节蛋白(StAR)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、雌激素合成酶(CYP19A1)、生长分化因子9(GDF9)、骨形态发生蛋白15(BMP15)基因表达量,以及F6和SYF中StAR、GDF9蛋白表达水平。【结果】与对照组相比,AMH2和AMH3组的产蛋率显著下降(P<0.05),其中AMH3组对产蛋率的抑制作用最为明显;AMH1和AMH2组SYF和LWF数量显著上升(P<0.05),而卵巢指数和LYF数量没有明显变化,血清LH、P 4和E 2水平呈剂量依赖性下降,AMH3组对生殖激素抑制作用较明显,其中AMH3组LH水平显著下降(P<0.05)。与对照组相比,在F6中,AMH2组GDF 9基因和AMH1组BMP 15基因表达水平显著上升(P<0.05);在SYF中,除AMH2组GDF 9基因外,各试验组FSHR基因表达水平显著下降,GDF9和BMP15基因表达水平显著上升(P<0.05),AMH3组GDF9蛋白水平显著上升(P<0.05);在LWF中AMH2和AMH3组的GDF9和BMP15基因表达水平显著上升(P<0.05)。给予外源性AMH对F6和LWF中CYP19A1、3β-HSD和StAR基因表达水平均无显著影响(P>0.05),在SYF中,AMH1、AMH2和AMH3组中CYP19A 1、3β-HSD和StAR基因表达水平均显著低于对照组(除AMH2组的CYP19A1基因外,P<0.05);与对照组相比,给予外源性AMH对F6和SYF中StAR的蛋白水平均无显著影响(P>0.05)。【结论】200μg/d外源性AMH可显著抑制卵泡发育,主要通过抑制LH、P 4和E 2的分泌,上调卵泡中GDF9和BMP15表达水平,下调FSHR和LHR以及影响类固醇激素合成通路关键因子的表达来影响卵泡发育。