山仙颗粒对Hepa1-6肝癌细胞迁移与侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察山仙颗粒含药血清对Hepa1-6肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并基于上皮-间充质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路探讨其可能的分子机制。方法采用SD大鼠制备山仙颗粒低、中、高剂量含药血清和空白血清。体外培养Hepa1-6肝癌细胞,设空白血清组、KYA1797K组及山仙颗粒低、中、高剂量含药血清组。取各组干预12 h、24 h、36 h后的Hepa1-6肝癌细胞,通过划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达情况。结果与空白血清组比较,山仙颗粒中、高含药血清组及KYA1797K组干预12 h后的细胞迁移距离和山仙颗粒各组及KYA1797K组干预24 h、36 h后的细胞迁移距离均明显缩短(P均<0.05);山仙颗粒各组及KYA1797K组干预12 h、24 h、36 h后的穿膜细胞数量均明显减少(P均<0.05),细胞中E-cadherin蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、p-GSK3β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。山仙颗粒低、中、高剂量含药血清组各时间点的细胞迁移距离呈剂量依赖性缩短,穿膜细胞数量呈剂量依赖性减少,细胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量呈剂量依赖性升高或降低,组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论山仙颗粒可以剂量依赖性地抑制Hepa1-6肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与调控Wnt/β-catenin通路,上调E-cadherin和下调N-cadherin、Vimentin的表达,从而抑制细胞EMT进程有关。

山仙颗粒抑制肿瘤作用机制的研究概况

该研究对山仙颗粒抑制肝癌、肺癌、肉瘤、黑色素瘤等肿瘤的作用机制进行了综述,以期为山仙颗粒治疗恶性肿瘤提供依据。山仙颗粒是陕西中医药大学肿瘤学团队在中医辨证论治理论的基础上结合数十年的临床经验以及现代药理研究成果而研制的抗恶性肿瘤的纯中药制剂,主要由山楂、仙鹤草、西洋参、莪术、龟甲、鳖甲、延胡索、猪苓等组成,具有益气养阴、扶正培本及活血化瘀、消肿抗癌的功效,该制剂的药物组成体现了扶正不敛邪、祛邪不伤正的组方原则。山仙颗粒能有效抑制肝癌、肺癌、肉瘤、黑色素瘤等肿瘤的体内外生长与转移,减轻肿瘤患者临床症状,改善预后。其疗效机制与增强机体免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞发生凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与转移、抑制肿瘤血管形成等有关。

山仙颗粒对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及外周血中IFN-γ、TNF-β、IL-10的影响

目的:观察山仙颗粒对Lewis肺癌细胞增殖的影响及对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及免疫微环境的影响,以探究山仙颗粒抑瘤及提高机体抗肿瘤免疫力的分子机制,为其临床应用提供深层次的理论依据。方法:腋下皮肤移植Lewis肺癌细胞建立小鼠荷瘤模型,分为空白组、模型组、化疗组和山仙颗粒组;通过对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织称重并计算抑瘤率,采用免疫组织化学法检测脾脏组织中淋巴细胞CD、CD8表达情况,采用CCK-8法检测淋巴细胞对Lewis肺癌细胞增殖的影响,采用ELISA法检测外周血中IFN-γ、TNF-β与IL-10的变化。结果:(1)山仙颗粒组对Lewis肺癌的抑瘤率为45.99%,显著高于化疗组(P<0.05);(2)小鼠淋巴细胞可抑制Lewis肺癌细胞的增殖,并与淋巴细胞浓度和作用时间呈正相关;且脾脏组织中CD4^+T细胞、CD4^+/CD8^+比值及淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的抑制率,模型组和化疗组显著低于空白组(P<0.05),山仙颗粒组显著高于模型组和化疗组(P<0.05),而山仙颗粒组与空白组比较无显著差异(P>0.05);(3)模型组和化疗组小鼠外周血中的IFN-γ和TNF-β显著低于空白组(P<0.05)、而IL-10显著高于空白组(P<0.05),山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β显著高于模型组和化疗组(P<0.05),而IL-10显著低于模型组与化疗组(P<0.05);山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β、IL-10与空白组比较无明显差异(P>0.05)。结论:山仙颗粒能明显抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织的生长,并具有提高小鼠脾脏指数、增强T淋巴细胞活性、使外周血中的IFN-γ、TNF-β上调而IL-10下调,提示山仙颗粒的抗肿瘤作用可能通过调节CD4^+T淋巴细胞含量、CD4^+/CD8^+、Th1/Th2比值,恢复肿瘤患者免疫功能稳态,提高机体免疫力、加强免疫监视功能有关。

大鼠山仙颗粒含药血清对S-180肉瘤细胞bcl-2、VEGF表达的影响

目的:通过观察山仙颗粒(SXG)含药血清对S-180肉瘤细胞bcl-2、VEGF蛋白表达的影响,探讨其治疗肿瘤性疾病的作用机制。方法:S-180肉瘤细胞分别与大鼠空白血清及含不同剂量SXG的药物血清在体外共同培养。于24 h、48 h、72 h后制备细胞涂片,分别用免疫荧光化学(FITC)法和免疫细胞化学(SABC)染色,检测不同浓度及不同作用时间的含药血清对S-180肉瘤细胞中bcl-2、VEGF蛋白表达的影响。结果:SXG含药血清可降低S-180肉瘤细胞中VEGF、bcl-2蛋白的表达,且呈浓度和时间依赖性。结论:大鼠SXG含药血清能抑制肿瘤细胞生长,其作用机制可能与其抑制S-180肉瘤细胞内VEGF的表达,下调bcl-2的表达有关。

山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E-cadherin CD44V6及nm23-H1表达影响的实验研究

目的:探讨山仙颗粒对Lewis肺癌转移过程中E-cadherin、CD44V6及nm23-H1表达的影响。方法:将45只C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、荷瘤对照组、山仙颗粒组。给后两组接种瘤细胞,山仙颗粒组用0.5g/mL的山仙颗粒悬液0.4mL(只.天)灌胃,其他两组用生理盐水灌胃。采用免疫组化S-P法测45只小鼠肺组织、瘤组织内E-cadherin、CD44v6和nm23-H1表达情况。结果:荷瘤对照组与山仙颗粒组比较,出瘤时间短,瘤重及肺转移灶数高,差异有显著性(P<0.05);与山仙颗粒组、空白对照组比较,E-cadherin和nm23-H1的阳性表达率低,CD44V6的阳性表达率高,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:E-cadherin、CD44V6和nm23-H1异常表达在Lewis肺癌形成和转移过程中发挥着重要作用,山仙颗粒能提高E-cadherin和nm23-H1的表达,降低CD44V6的表达。山仙颗粒有抗恶性肿瘤形成和转移的作用。

山仙颗粒对小鼠S180肉瘤组织中Bax基因表达的影响

目的:通过山仙颗粒(SXG)对小鼠移植性S180肉瘤组织中凋亡相关基因Bax表达的影响,探讨山仙颗粒抗肿瘤发生和发展的机理。方法:选取昆明小鼠40只,随机取10只作为空白对照组,其余30只小鼠于左后肢皮下接种S180肉瘤细胞,24小时后随机分为三组:荷瘤对照组(B组),金龙胶囊(JLC)组(C组),山仙颗粒组(D组)。观察出瘤时间,检测移植瘤重,分别计算抑瘤率,并应用免疫组织化学方法(二步法)检测瘤组织中Bax基因的表达情况。结果:与荷瘤对照组比较,山仙颗粒组出瘤时间显著延长(P<0.05),小鼠瘤重减轻(P<0.05),Bax水平升高(P<0.05);两用药组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:山仙颗粒能抑制荷瘤小鼠体内S180肉瘤的生长,其机理可能与上调Bax的表达水平、诱导肿瘤细胞凋亡有关。

山仙颗粒对肝癌气虚血瘀证侵袭转移相关因子表达的影响

目的:观察山仙颗粒对肝癌气虚血瘀证模型动物侵袭转移相关因子(MVD、VEGF)表达的影响。方法:将60只雄性ICR小鼠随机分成4组:15只为空白对照组(A组),气虚血瘀造模,另45只为实验组,全部进行肿瘤造模及气虚血瘀造模,每组15只,分别为:肿瘤模型组(B组),山仙颗粒组(C组),羟基喜树碱组(D组)。观察山仙颗粒对各组小鼠VEGF、MVD表达的影响。结果:山仙颗粒组(C组)VEGF、MVD的表达显著低于肿瘤模型组(B组)及对照药物羟基喜树碱组(D组)。结论:山仙颗粒具有抗气虚血瘀证肝癌侵袭、转移的作用。

山仙颗粒对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究

目的观察山仙颗粒对荷瘤小鼠免疫系统的影响。方法纯系BALB/c小鼠30只,用U14瘤细胞荷瘤建立动物模型,随机平均分为3组:山仙颗粒治疗组、环磷酰胺治疗组、生理盐水对照组。观察山仙颗粒对荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率、TNF-α等免疫指标的影响。结果山仙颗粒能够显著提高治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率和血清中TNF-α,IL-2的含量。结论山仙颗粒能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性。

山仙颗粒对S-180荷瘤小鼠T细胞活性及Caspase-3的影响

目的:探讨山仙颗粒(SXG)对S-180荷瘤小鼠T细胞活性及Caspase-3的影响。方法:将60只昆明种小鼠随机选取12只作为空白对照组,其余48只建立S-180荷瘤小鼠模型后随机分为模型组及SXG低(0.025 g/mL)、中(0.05 g/mL)、高(0.1 g/mL)剂量组各12只,空白对照组、模型组每日早晚灌胃生理盐水0.4 mL,其余各组每日早晚灌胃相应剂量药物,连续30天。末次给药24小时后,采用颈椎脱臼法处死小鼠,游离脾脏,剥离肿瘤组织;应用MTT比色法及免疫组织化学法检测荷瘤小鼠脾脏T细胞毒效应及S-180实体瘤组织中Caspase-3的表达。结果:SXG低、中、高剂量组小鼠脾脏T细胞对于S-180荷瘤小鼠细胞的抑制率高于模型组(P<0.01),且与SXG浓度呈正相关;各组效应细胞与靶细胞的比例不同,对S-180荷瘤小鼠细胞的抑制作用也不同(P<0.01),且与T细胞浓度呈正相关。SXG低、中、高剂量组S-180荷瘤小鼠肿瘤组织中Caspase-3表达率高于模型组(P<0.01),且与SXG浓度呈正相关。结论:SXG具有抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与其增强T细胞活性进而抑制肿瘤细胞增殖及促进Capase-3介导的肿瘤细胞凋亡有关。

山仙颗粒对Lewis肺癌C_(57)BL/6小鼠IFN-γ、TXB_2和6-酮-PGF1α影响的实验研究

目的通过山仙颗粒对荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠脾细胞IFN-γ活性及血浆中TXB2、6-Keto-PGF1α水平的影响,探讨其抗侵袭与转移的机理。方法将40只C57BL/6小鼠随机取出10只作为空白对照组(A组),把Lewis肺癌细胞接种于其余小鼠右腋皮下,将它们随机分成荷瘤对照组(B组)、金龙胶囊组(C组)、山仙颗粒组(D组)。接种24 h后,C、D组分别以金龙胶囊(50 mg/mL)、山仙颗粒(0.5 g/mL)悬液灌胃,A、B组用生理盐水灌胃,观察出瘤时间。造模第21天后处死小鼠,测移植瘤重、体质量、肺转移灶数及血浆中TXB2、6-Keto-PGF1α的水平。结果D组小鼠出瘤时间明显延长(P<0.01),瘤重及肺转移灶数均比B组低(P<0.01),而体重比B组高(P<0.01);D组小鼠脾细胞IFN-γ活性较B组高(P<0.05),且山仙颗粒能使血浆中TXB2降低,使TXB2/6-Keto-PGF1α的比值向不利于血栓形成方向变化。结论山仙颗粒有抑制肿瘤生长及抗转移的作用,其机理与增强宿主脾细胞IFN-γ活性及调节血浆中TXB2/6-Keto-PGF1α的比值趋于平衡有关。

山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染C57BL/6小鼠NK细胞和IL-1活性影响实验研究

目的探究山仙颗粒(SXG)对Lewis肺癌瘤株转染的C57BL/6小鼠NK细胞和IL-1活性的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机取出10只作为空白对照组(A组),把LEWIS肺癌细胞接种于剩余30只小鼠右腋皮下,再将它们随机分为荷瘤对照组(B组)、金龙胶囊组(C组)、山仙颗粒组(D组)等3组。接种24h后,A、B组用生理盐水灌胃。C、D组分别以金龙胶囊和山仙颗粒混悬液灌胃,造摸21天处死小鼠,检测移植瘤重、肺转移灶数、出瘤时间、NK细胞及IL-1活性。结果与对照组比较,SXG组小鼠出瘤时间显著延长(P<0·01),瘤重减轻、肺转移灶数减少、NK细胞及IL-1活性升高(P<0.01)。结论SXG能显著抑制LEWIS肺癌的生长与转移,其机制可能与提高IL-1及NK活性有关。

山仙颗粒联合化疗治疗消化道癌临床疗效观察

目的观察山仙颗粒联合化疗治疗消化道癌的减毒增效作用。方法将92例中晚期消化道癌患者随机分为两组:山仙颗粒加化疗组(A组、50例),单纯化疗组(B组、42例)。两组均完成四个周期化疗。观察各组患者近期疗效、血象、细胞免疫功能及血液流变学指标变化。结果除A组淋巴细胞外,两组治疗前后血象指标变化有显著差异(P<0.01),B组下降更明显;CD3、CD4、CD4/CD8及NK细胞活性A组治疗前后差异无显著性(P>0.05),B组差异有显著性(P<0.05);治疗后全血比粘度(ηb)、血浆比粘度(ηp)、纤维蛋白原(Fg)A组降低,B组升高,血浆组织型纤溶酶原活化剂活性(t-PA:A)A组升高,B组降低,两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论山仙颗粒可以通过保护骨髓、提高机体免疫力、降低血液高凝状态,在化疗中起到减毒增效作用。

山仙颗粒对H22肝癌移植瘤微环境中淋巴细胞活性的调控作用

目的观察山仙颗粒对H22肝癌移植瘤的抑制作用及肿瘤组织中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)含量的影响,探讨山仙颗粒对H22肝癌移植瘤微环境中淋巴细胞活性的调控作用。方法取50只雄性昆明小鼠,随机选择40只小鼠建立H22肝癌移植瘤模型,其余10只小鼠作为空白组。造模24 h后将小鼠随机分为模型组及山仙颗粒低、中、高剂量组各10只,山仙颗粒低、中、高剂量组分别给予山仙颗粒0.025 g/mL、0.05 g/mL、0.1 g/mL灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均早晚各1次,连续30 d。颈椎脱臼法处死小鼠,剥离瘤组织,计算抑瘤率;ELISA法检测H22移植瘤组织中IFN-γ、IL-6、TGF-β含量。结果山仙颗粒低、中、高剂量组H22肝癌移植瘤的抑瘤率随用药剂量增加而增高,各组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。与空白组比较,模型组移植瘤组织中IFN-γ含量明显降低(P<0.05),IL-6、TGF-β含量均明显增高(P均<0.05);与模型组比较,山仙颗粒各组移植瘤组织中IFN-γ含量明显增高(P均<0.05),IL-6、TGF-β含量均明显降低(P均<0.05);山仙颗粒高剂量组移植瘤组织中IFN-γ、IL-6、TGF-β含量变化更明显,其次为山仙颗粒中剂量组,各组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论山仙颗粒具有抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用,其机制可能与调控肿瘤微环境中淋巴细胞活性,影响IFN-γ、IL-6、TGF-β的表达,从而提高机体抗肿瘤免疫功能相关。