山楂通过肠道菌群治疗脂质代谢异常的实验研究

目的探讨山楂制剂调脂与肠道菌群的相关性。方法将100只SPF级载脂蛋白E基因敲除小鼠(C57BL/6J Apoe^(-/-)小鼠)随机分为5组,每组20只。分为空白对照组、动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型组、AS加抗生素对照组及AS加山楂加抗生素组、AS加山楂组。检测指标:检测小鼠血脂水平,包括低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);运用RT-PCR技术定量检测腹腔巨噬细胞清道夫受体A1(scavenger receptor class A type 1,SR-A1)、CD36mRNA的表达水平;运用Western-blot方法检测CD36,SR-A1的蛋白表达。结果比较空白对照组、AS模型组、AS加抗生素对照组及AS加山楂加抗生素组、AS加山楂组的血脂水平、CD36和SR-A1的mRNA水平和蛋白水平变化,结果表明:(1)通过与空白对照组比较,AS加山楂组有显著降脂效果;(2)通过与AS模型组比较,AS加抗生素对照组和AS加山楂加抗生素组及AS加山楂组均有降脂效果;(3)AS加山楂加抗生素组降脂水平高于AS加抗生素对照组;(4)AS加山楂降脂水平高于AS加山楂加抗生素组。结论山楂具有改善高胆碱饮食喂养造成动脉粥样硬化模型小鼠血脂的作用,山楂制剂调脂与肠道菌群相关。

星点设计-响应面法优化山楂有机酸的提取工艺

目的:优化山楂有机酸的提取工艺。方法:在单因素试验基础上,以液料比、提取时间及乙醇体积分数为自变量,以有机酸得率为因变量,采用星点设计-响应面法优化山楂有机酸提取工艺。结果:最优提取工艺条件为山楂按液料比18.5∶1加入75%乙醇,回流提取2次,每次2.0 h;验证试验的有机酸得率平均值为5.22%(RSD=2.70%,n=3),与模型预测值(5.13%)的相对误差为1.75%。结论:优化建立的山楂有机酸提取工艺方法简单,重现性和可预测性较好。

山楂提取物对断奶仔猪生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道微生物的影响研究

为探讨不同添加量山楂提取物(CF)对断奶仔猪生长性能、免疫功能、抗氧化能力和肠道微生物的影响,试验选择体重为(8.85±0.73)kg左右、健康状况良好的28日龄“杜×长×大”断奶仔猪30头,按体重相近的原则随机分为5组,每组6个重复,每个重复1头仔猪。对照组(CON组)饲喂基础日粮,抗生素组(CTC组)是在基础日粮中添加75 mg/kg金霉素,3个试验组分别在基础日粮中添加300、600、1200 mg/kg山楂提取物(CF1组、CF2组、CF3组),试验期28 d。结果表明:(1)与CON组相比,CF2组和CF3组断奶仔猪的末重(FBW)极显著提高(P<0.01),平均日增重(ADG)和采食量(ADFI)显著提高(P<0.05),料重比(F/G)和腹泻率显著降低(P<0.05)。与CTC组相比,CF2组和CF3组断奶仔猪的FBW、ADG和ADFI显著提高(P<0.05)。(2)与CON组相比,CF2组和CF3组血清中IgA含量显著提高(P<0.05),CF2组和CF3组之间的血清IgA差异不显著(P>0.05)。CF2组的血清IgM含量显著高于其余四组(P<0.05)。(3)CF2组和CF3组血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量均显著高于CON组、CTC组和CF1组(P<0.05),CF2组和CF3组之间血清T-SOD含量差异不显著(P>0.05)。CF2组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)显著高于其余四组(P<0.05)。与CON组相比,CF2组血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),其余各组血清MDA含量差异不显著(P>0.05)。(4)CF2组和CF3组结肠乳酸杆菌数量均显著高于CON组、CTC组和CF1组(P<0.05),CTC组、CF2组和CF3组结肠大肠杆菌数量显著低于CON组和CF1组(P<0.05),但CTC组、CF2组和CF3组之间结肠大肠杆菌数量差异不显著(P>0.05)。综上所述,CF2组即日粮添加600 mg/kg山楂提取物可提升断奶仔猪生长性能,降低腹泻率,改善免疫功能,提高抗氧化能力,改善肠道微生物菌群。

丹参山楂提取物预防大鼠高脂血症形成的药理研究

目的观察口服丹参山楂提取物对预防大鼠高脂血症形成的影响。方法取雄性SD大鼠58只,按血清总胆固醇(TC)水平进行分层分组,正常对照组;高脂模型组;丹参山楂提取物小剂量组(40 mg/kg);丹参山楂提取物中剂量组(80 mg/kg);丹参山楂提取物大剂量组(160 mg/kg);血脂康组(100 mg/kg)。各个治疗组连续给药17 d,从第4天开始,除正常对照组外,其余各组大鼠每日以10 mL/kg体积灌服脂肪乳剂。在实验第18天,测定所有大鼠血清TC、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C),计算低密度脂蛋白(LDL-C)值;同时取出肝脏称重,并进行病理学检查。结果大鼠连续14 d灌服脂肪乳剂后,可形成高脂血症和肝脂肪变,在给脂肪乳剂时给予丹参山楂提取物(消瘀降脂胶囊原料药),则可明显减少大鼠血清TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C比值及肝重量系数的增加,防止HDL-C的降低及肝脂肪变的形成。结论给大鼠连续灌服丹参山楂提取物后,可明显抑制高脂血症和肝脂肪变的形成。

郑邦本常用对药举隅

郑邦本老师常用黄芪60 g配伍益母草15～30 g治疗肾病综合征、肾炎综合征、慢性肾炎、糖尿病肾病;灵芝30 g配刺五加15 g对脾肾阳虚,体虚乏力,食欲不振,腰膝酸痛,失眠多梦等证尤为有效,常用于疲劳综合征、神经衰弱的治疗;苏子10 g配地龙10 g降气止咳平喘,常用于支气管哮喘、喘息性支气管炎的治疗;木香10 g配伍槟榔10 g行气宽肠,治疗腹胀、肛门坠胀疗效显著;益母草15～30 g配生山楂30 g活血通经,治疗月经量少、痛经、不孕症等;半枝莲30 g与垂盆草30 g清热利湿退黄,退黄与降酶并举,常用于治疗肝功能异常湿热证;血肉有情之品鹿角胶10 g配伍骨碎补15 g补肾强筋骨,用于骨质疏松、骨折术后愈合不佳、脑萎缩等病;穿山甲5～10 g配鹿角片5～10 g治疗乳腺增生、输卵管不通疗效显著;怀牛膝15 g配刘寄奴30 g治疗血瘀阻络引起的关节疼痛,用于风湿性关节炎、膝骨性关节炎、骨关节损伤疾病。上述对药为郑老师经过长期临床验证,效如桴鼓,具有可重复性,如能在辨证基础上正确运用,常能收到良好效果。

茯茶山楂降脂含片的制备工艺及其降脂作用研究

以茯茶多糖和山楂提取物为主要原料,采用压片法制备茯茶山楂降脂含片.通过预实验、体外降脂实验和正交试验筛选主辅料配比;以片剂外观、口感、硬度和崩解时限作为综合评分指标对配方进行综合评价,筛选出茯茶山楂降脂含片的最佳配方为:主药用量为15%(山楂∶茯茶=4∶1),填充剂用量为70%(可溶性淀粉∶甘露醇=1∶3),粘合剂为5%PEG6000和50%乙醇溶液,PVPP用量为10%,硬脂酸镁用量为0.8%,矫味剂用量为3%(山梨糖醇∶柠檬酸=2∶1).结果表明,产品的崩解时限均大于10 min,感官评价良好,茯茶山楂降脂含片对HepG2细胞的降脂和抗氧化作用良好,为降脂产品的开发与工业化生产提供一定的理论依据和数据支持.

山楂与野山楂的化学成分对比研究

山楂作为临床常用中药,其营养价值丰富,可供食药两用。2015版《中国药典》记载,山楂果实能消食健胃、行气散瘀,其叶能化浊降脂。现我国规定山楂正品来源有两种,分别为山楂和山里红,但仍有部分研究及临床应用将野山楂混入其中。通过对医药文献的查阅、整理,对山楂与野山楂不同部位的化学成分进行归纳总结,发现二者化学成分有所差异,且野山楂化学成分的种类及含量更多。本文通过对二者化学成分的整理,以期在合理区分使用、发现潜在价值、扩大临床应用等方面提供理论参考和指导。

山楂防治心血管疾病作用机制实验研究进展

山楂(crataegus pinnatifida)属蔷薇科植物,以其果实和叶子入药。其主要成分为黄酮类、有机酸类、纤维素、单萜类、木脂素类等化合物。随着现代医学的进步,山楂及其活性物的研究取得一定的成果,且在防治心血管疾病方面显示出了独特的优势,因此,山楂治疗心血管疾病的作用机制成为研究方向之一。山楂及其提取物主要通过抗炎、抗氧化、抗凋亡、降血脂、稳斑块、调节内皮细胞、调控心肌酶、抑制血小板活化与聚集、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统等作用来防治心血管系统疾病。该文就近年来国内外对山楂治疗心血管疾病的实验研究进行综述,以期为山楂的临床研究及开发利用提供循证医学证据。

刺五加与山楂水提物不同比例混合对小鼠抗抑郁作用的实验研究

目的研究刺五加与山楂水提物不同比例混合对小鼠的抗抑郁作用。方法测定不同比例混合的刺五加与山楂水提物对小鼠行为绝望、旷场实验以及脑内单胺氧化酶(MAO)的影响。此外,通过腹腔注射利血平建立小鼠抑郁症模型,测定不同比例混合的刺五加与山楂水提物对利血平效应的影响。结果刺五加与山楂水提物采用2∶1的比例混合可明显对抗小鼠行为绝望,增多小鼠旷场实验水平得分以及垂直次数,显著降低小鼠脑内单胺氧化酶活性。明显拮抗利血平效应引起的小鼠眼睑下垂及体温下降。结论刺五加与山楂水提物采用2∶1的比例混合对抑郁症有明确的治疗作用。

荷叶-山楂提取物制备工艺优选

目的优选荷叶-山楂提取物的制备工艺。方法以提取时间、加水量、提取次数为考察因素,以出膏率、荷叶碱和槲皮素提取率为评价指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验优选提取工艺;并在此基础上,以温度、浓缩时间、烘干时间为考察因素,以荷叶碱和槲皮素含量为评价指标,采用单因素试验优化浓缩和干燥条件。结果最优制备工艺为加8倍量水,提取2次,每次30 min,合并提取液,滤过,滤液在80℃条件下减压浓缩,60℃条件下减压干燥,得干浸膏,粉碎,过80目筛。结论优选的荷叶-山楂提取物制备工艺稳定、合理,可用于工业化生产。

胶束萃取-浊点预富集-高效液相色谱法同时测定山楂中9种酚酸和黄酮类化合物含量

目的建立以非离子表面活性剂、胶束萃取-浊点预富集与超声萃取技术结合的HPLC方法,同时测定山楂中原儿茶酸、咖啡酸、牡荆素、阿魏酸、金丝桃苷、槲皮素、木犀草素、山柰酚和芹菜素的含量。方法以非离子表面活性剂Genapol X-080为萃取剂,加入一定量氯化钠进行浊点预富集,以萃取剂浓度、固液比、电解质浓度、溶液p H值、超声时间、平衡时间、离心时间为考察因素,9种成分的提取总量为考察指标,优化胶束萃取和浊点预富集参数。采用Phenowenex C18色谱柱,甲醇-0.06%冰醋酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长290 nm。结果该条件下9种成分的分离度良好,标准曲线线性范围良好,r>0.9990(n=8)。加样回收率分别为:原儿茶酸(99.7±1.23)%、咖啡酸(97.5±2.49)%、牡荆素(105.1±1.50)%、阿魏酸(105.5±0.76)%、金丝桃苷(100.5±2.41)%、槲皮素(102.3±1.86)%、木犀草素(107.0±1.52)%、山柰酚(97.7±1.72)%、芹菜素(99.9±2.34)%。结论本研究建立的方法可完成山楂中9种成分的分离和测定,缩短样品前处理时间,简便快速,环境友好,可为山楂中黄酮和有机酸的提取提供可靠的分析方法。

山楂提取物基于调控TBX21、GATA-3因子对血脂异常小鼠Th1、Th2细胞亚群的影响

目的探究山楂提取物通过调控T-box转录因子21(TBX21)、GATA结合蛋白3(GATA-3)调节血脂异常小鼠Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)、Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)细胞亚群防治血脂异常机制研究。方法60只C57BL/6J小鼠,随机分为6组,即正常组、高脂饮食组(High Fat Diet,HFD)、HFD+高剂量山楂提取物组、HFD+中剂量山楂提取物组、HFD+低剂量山楂提取物组、HFD+阿托伐他汀组,每组10只。HFD小鼠高脂饲料喂养8周,建立血脂异常模型。高、中、低山楂提取物组小鼠在高脂饲养4周后给予山楂提取物进行灌胃,阿托伐他汀组小鼠在高脂饲养4周给予阿托伐他汀进行灌胃。对照组和HFD组同时间口服灌胃等量生理盐水。4周后通过全自动生物化学分析仪检测血浆中甘油三酯(Triglyceride,TG),总胆固醇(Total Cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)的含量;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time-Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测各组小鼠脾脏组织Tbx21、Gata3mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组小鼠脾脏组织Tbx21、Gata3蛋白表达;流式细胞术检测小鼠脾脏组织Th1、Th2细胞比例。结果相较于正常组,高脂饮食能明显提高血清总胆固醇,甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量,小鼠脾脏Tbx21mRNA及蛋白表达水平显著升高,Gata3mRNA及蛋白表达水平显著降低,小鼠脾脏组织Th1细胞百分比显著上调,Th2细胞百分比显著下调;与HFD组相比,经山楂提取物及阿托伐他汀干预的血脂异常小鼠血清血脂得以改善,总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降,高密度脂蛋白胆固醇水平显著上升,小鼠脾脏Tbx21mRNA及蛋白表达水平显著降低,Ga-ta3mRNA及蛋白表达水平显著提高,小鼠脾脏组织Th1细胞百分比显著下降,Th2细胞百分比显著上升,中药高剂量组与西药组调节相关因子的作用效果明显优于中药中、低剂量组,且对于HDL-C、LDL-C、Th1细胞比例、Tbx21、Gata3mRNA及蛋白等指标的作用效果接近于西药组。结论山楂提取物可以通过调控Tbx21、Gata3因子,进而影响Th1、Th2细胞分化过程,减轻脂质沉积,从而有效地防治血脂异常。

HPLC同时测定山楂提取物中绿原酸和牡荆素鼠李糖苷的含量

目的:采用HPLC建立山楂提取物中绿原酸和牡荆素鼠李糖苷的含量测定方法。方法:SHISEIDO CAPCELLPAK C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)、四氢呋喃-乙酸-水(10∶2∶76,B),梯度洗脱,检测波长330 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温25℃。结果:绿原酸和牡荆素鼠李糖苷分别在1.34～164.8,1.18～148.7 mg.L-1线性关系良好;平均加样回收率分别为100.4%,98.83%,RSD 1.5%,1.3%。结论:该方法简单、准确、重复性好,可用于测定山楂提取物中绿原酸和牡荆素鼠李糖苷的含量,为山楂提取物及其制剂的质量控制有效的方法。

竹节参与丹参和山楂复方改善小鼠非酒精性脂肪肝作用的实验研究

目的研究竹节参、丹参和山楂复方(ZDS)对高糖高脂所诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠的保护作用。方法制备竹节参、丹参和山楂提取物,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除率实验,优化竹节参、丹参和山楂的体外抗氧化活性的复方ZDS。按随机数字表法将小鼠分成4组,每组10只:正常组、模型组和低、高2个剂量实验组。正常组用普通饲料喂养,模型组用高脂饮食,实验组用混有ZDS药物的的高脂饲料喂养,每只分别给予50,100mg·kg^(-1)。1个月后,用生化法检测血清谷丙转氨酶(ALT)水平和丙二醛(MDA)含量;以实时定量-PCR法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(P21)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)基因的表达。结果 3种药物和降脂复方均有体外抗氧化活性,3种药物DPPH清除率均在50%以上,影响配方药物DPPH自由基清除率的因素由大到小依次为山楂>丹参>竹节参,且有联合抗氧化活性。给药后,正常组、模型组和低、高2个剂量实验组的ALT水平(U·L^(-1))分别是31.72±4.53,51.36±5.34,41.59±10.30,44.91±8.64,低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。这4组的MDA浓度(nmol·m L^(-1))分别为7.64±0.85,11.71±1.17,6.51±0.62,4.70±0.34,低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组和低、高2个剂量实验组的肝组织中p21 mRNA表达水平分别7.44±0.93,1.45±0.18,0.76±0.10;低、高2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);这3组的CDK2 mRNA表达水平分别0.31±0.05,0.33±0.05,0.55±0.06,高剂量实验组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论竹节参、丹参和山楂降脂复方通过抗氧化活性,可改善高脂饮食所诱导的小鼠非酒精性脂肪肝。

银杏叶与山楂提取物配伍治疗SHR高血压的实验研究

目的:探讨银杏叶、山楂提取物配伍联用治疗高血压模型动物的作用和机制。方法:自发高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)的基础血压值随机分成7组(模型对照、卡托普利、银杏叶提取物、山楂提取物、银杏叶/山楂提取物1:1、1:2和1:3配伍组),同时选用SD大鼠作为正常对照组,每组10只动物,按设计剂量(卡托普利35 mg/kg,银杏叶提取物150 mg/kg,山楂提取物组130 mg/kg,其他均为300 mg/kg)每日给予受试物,对照组给予蒸馏水,连续30天,以尾脉搏法测定血压。每周测量血压、心率和体重一次,实验末摘眼球采血并处死动物,计算心室指数,血液分离血清后测定血清中一氧化氮、丙二醛的含量以及总超氧化歧化酶的活力。结果:实验末,山楂提取物、银杏叶/山楂提取物1:2和1:3配伍组的动物收缩压明显低于模型对照组(P<0.05或P<0.01),而各组对动物的心率、体重无明显影响。山楂提取物和1:3配伍组的动物心室指数和血清中丙二醛含量明显降低,一氧化氮水平则显著升高,且1:3配伍组血清中总超氧化歧化酶的活力也明显升高;此外,银杏叶提取物组的动物血清中丙二醛含量也明显降低,而总超氧化歧化酶的活力则显著升高。结论:银杏叶和山楂提取物按1:3配伍联用能协同有效降低SHR的血压,保护累及的组织器官,其作用机制为通过调节内皮依赖性舒血管物质减少外周血管阻力,同时通过抗氧化作用来保护高血压诱发的重要组织器官损伤。

降脂宝胶囊中山楂的醇提工艺及质量控制方法研究

目的：研究降脂宝胶囊中山楂的最佳醇提工艺，并制定其质量控制方法。方法：以金丝桃苷含量和醇浸出物量为综合考察指标，采用Lg（3^4）正交设计，以乙醇浓度、乙醇用量和提取时间3个因素，每个因素选取3个水平进行试验。采用高效液相色谱法测定金丝桃苷含量。结果：优选工艺为采用70％乙醇，用量为药材的10倍，提取2次，每次回流时间1h。金丝桃苷在1．024～30．72μg·mL^-1浓度范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。结论：该醇提工艺合理、可行，所得制利质量可控。

一种适用于不同发育期山楂果实总RNA提取的方法

目的:筛选从不同发育期山楂果实中提取RNA的最佳方法。方法:对不同发育期山楂果实总RNA提取方法进行了探索,考察了Trizol法、改良Trizol法、经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取RNA的效果,采用琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白定量仪检测RNA质量。结果:Trizol法、改良Trizol法对成熟期山楂果实RNA提取效果不佳,琼脂糖凝胶电泳检测几乎看不到条带;经典CTAB法对各发育期样本RNA提取质量均不理想;改良CTAB法对不同发育期山楂果实总RNA有良好的提取效果,A_(260 nm)/A_(280 nm)均在2.0左右,28 S和18 S条带完整,满足反转录和聚合酶链式反应(PCR)扩增反应的需求。结论:建立的改良CTAB法是一种有效的山楂果实总RNA提取方法,适用于不同发育期山楂果实RNA的提取,为开展山楂有效成分的生物合成研究奠定了基础。