鲨鱼硫酸软骨素二糖组成分析及其4S/6S比值的讨论

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。结果鲨鱼硫酸软骨素主要由6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-6S)、4-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-4S)、2,6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-2,6diS)以及无硫酸化的软骨素二糖(ΔDi-0S)组成,其百分含量分别为28%~65%、10%~44%、9%~25%、0.5%~23%。Shark-CS 4S/6S比值不超过0.8。结论提出Shark-CS 4S/6S比值的正确计算方法,解决了数据相互矛盾的问题。指出USP43中关于shark-CSΔDi-6S峰面积百分比大于ΔDi-4S峰面积百分比的不合理规定,为USP43修订提供参考与依据。

鱼翅中硫酸软骨素的酶解-高效液相色谱法测定

建立了一种测定鱼翅中硫酸软骨素的酶解 -高效液相色谱方法 ;该法利用在一定条件下硫酸软骨素能被硫酸软骨素酶ABC定量酶解成软骨素二糖 。

鲟鱼和鲨鱼硫酸软骨素红外光谱特性的比较研究

文章比较研究了鲟鱼和鲨鱼硫酸软骨素的红外光谱特性。结果表明,鲟鱼硫酸软骨素在1376,1344,1310,1157,883和856cm-1等波数上呈现出特有的振动峰,进一步的分析表明,鲨鱼硫酸软骨素中只有6-硫酸基团,而鲟鱼硫酸软骨素中则同时存在有6-硫酸基团和4-硫酸基团,这一特点表明鲟鱼硫酸软骨素在降低药物的毒性,有效杀伤癌细胞的方面可能具有较高的生物活性;两种硫酸软骨素的红外光谱总体基本相似,都含有乙酰氨基、羧基、硫酸基、糖环等官能团的振动峰,但鲟鱼硫酸软骨素的乙酰氨基的N—H变角振动峰的波数较高,1415cm-1处的羧基振动峰也明显强于鲨鱼硫酸软骨素,进一步化学分析显示,鲟鱼硫酸软骨素中的葡萄糖醛酸含量较高,推测鲟鱼硫酸软骨素很可能是一种较好的医用骨骼修复材料。

鲨鱼软骨粉对大鼠机体过氧化脂质水平的影响

为阐明鲨鱼软骨粉对大鼠血清、肝、脑组织过氧化脂质的影响进行了本研究。试验动物为SD大鼠，分为四组，即对照组（Ⅰ组），低剂量组（Ⅱ组），中剂量组（Ⅲ组），高剂量组（Ⅳ）组。三个实验组饲料中分别加入0．25％、1％、4％鲨鱼软骨粉，每组12只小鼠，雌雄各半。结果表明实验组血清丙二醛（MDA）值低于对照组。肝组织MDA值Ⅳ组最低，与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均有显著性差异。脑组织MDA值Ⅳ组也最低，与Ⅰ、Ⅱ组有显著性差异。

鲨鱼软骨素对肿瘤患者T淋巴细胞亚群的影响

The objective of the study is to find out the effect of shark chondroitin on T lymphocyte subsets in cancer patients. Patients were divided into two groups. One group was treated with chemotherapy alone, and the other group was treated with chemotherapy plus shark chondroitin. Using immunofluorescence technique, T lymphocyte subsets in the peripheral blood were determined in two groups before and after chemotherapy. The results showed that CD4 +/CD8 + ratio increased in the patients received shark chondroitin. In the chemotherapy group, CD3 + had no change, but CD4 + decreased while CD8 + increased significantly. The results suggest that shark chondroitin could enhance immune function in cancer patients, especially during chemotherapy.

咔唑法测定鲨鱼硫酸软骨素含量的方法学研究

目的建立用咔唑法测定鲨鱼硫酸软骨素含量的方法。方法采用咔唑法，以鲨鱼硫酸软骨素为对照品，在浓硫酸介质中经咔唑显色反应后，于515nm波长处分别测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，按标准曲线法计算含量。结果硫酸软骨素量在29～145μg范围内与吸收度呈良好的线性关系，相关系数r=0．9998，加样回收率为100．5％，RSD=1．3％（n=6）。结论此法简单、快速，结果准确，可用作鲨鱼硫酸软骨素含量的测定方法。

离子色谱法测定硫酸软骨素的含量

建立了用离子色谱法测定硫酸软骨素的方法。在６ｍｏｌ／Ｌ盐酸介质中将硫酸软骨素水解生成等摩尔的硫酸根离子，然后用ＡｎｉｏｎＨＣ离子色谱柱进行分离，以硼酸钠／葡萄糖酸钠淋洗液为流动相，流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ，电导检测器检测。硫酸根离子在０．００１～０．０８０ｍｇ／ｍｌ浓度范围内线性关系良好，相关系数为０．９９９４，最低检测浓度为０．０００６ｍｇ／ｍｌ。样品中硫酸根离子的加样回收率为９８．５１％～９９．５２％，硫酸软骨素原料药和注射液及鲨鱼软骨粉胶囊中硫酸软骨素测定的相对标准偏差分别为０．２５％，１．０６％和１．９６％。

大青鲨和镰状真鲨软骨中部分营养成分分析与安全评价

为科学开发利用鲨(Selachimorpha)软骨中的生理活性成分,同时初步掌握鲨软骨的重金属含量情况,本研究采用国标方法分别测定了大青鲨(Prionace glauca)和镰状真鲨(Carcharhinus falciformis)两种鲨软骨的游离氨基酸、脂肪酸、硫酸软骨素和胶原蛋白等营养成分及重金属的含量.结果显示,大青鲨和镰状真鲨软骨中硫酸软骨素含量分别为18.69和4.82 mg/g,胶原蛋白含量分别为4.19和6.77 g/100g.大青鲨和镰状真鲨软骨中16种游离氨基酸的总含量分别为11.09和14.30 g/100g,其中甘氨酸(Gly)含量最高,组氨酸(His)含量最低;必需氨基酸有7种,分别占氨基酸总量的26.15%和27.06%;氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)和必需氨基酸指数(EAAI)结果显示,大青鲨和镰状真鲨软骨的氨基酸评分均比较低,营养品质相近,蛋氨酸+胱氨酸(Met+Cys)是第一限制性氨基酸,苯丙氨酸+酪氨酸(Phe+Tyr)是第二限制性氨基酸.大青鲨和镰状真鲨软骨中共检出16种游离脂肪酸,其中含量较为丰富的是C16:0、C18:0、C18:1n9-c、C24:1n-9以及C22:6n-3(DHA),占脂肪酸总量的73.1%(大青鲨)和76.0%(镰状真鲨),且不饱和脂肪酸含量均高于饱和脂肪酸.两种鲨软骨中铅、镉、甲基汞和无机砷的含量均远低于食品安全国家标准中污染物的限量要求.研究认为,大青鲨和镰状真鲨软骨中均含有丰富的硫酸软骨素和胶原蛋白,大青鲨的硫酸软骨素含量高于镰状真鲨,而单种氨基酸、总脂肪酸和胶原蛋白的含量均低于镰状真鲨;两种鲨软骨中的重金属含量均较低.

鲨鱼硫酸软骨素中蛋白质比色法定量的方法学研究

目的建立用比色法测定鲨鱼硫酸软骨素原料中蛋白质含量的方法。方法采用福林-酚试剂法对蛋白质进行显色反应，以牛血清白蛋白为标准品，在760nm波长处测定蛋白质标准品溶液和供试品溶液的吸收度，按标准曲线法计算供试品中蛋白质的含量。结果标准曲线蛋白质量在21．1～105.5μg范围内与吸收度呈良好的线性关系，相关系数r=0．9990，加样回收率为99．8％，RSD=0，91％（n=6）。结论此法简单、快速，结果准确，可用作鲨鱼硫酸软骨素原料中蛋白质含量的测定方法。

响应面法优化鲨鱼硫酸软骨素的提取条件

采用响应面分析法,研究不同提取条件(温度、时间、碱浓度)对鲨鱼硫酸软骨素(ChS)得率的影响,建立提取条件与得率之间的数学模型,并进一步研究不同的超声波处理时间对硫酸软骨素提取率和纯度的影响,确定适宜的硫酸软骨素提取条件。结果:1)采用响应面分析法建立提取条件与硫酸软骨素得率的数学模型为ChS(%)=14.56-0.34x2-0.34x1x2-0.82x12-1.45x22-0.47x32,其中碱提温度对硫酸软骨素得率影响最为显著,其次为碱液浓度;2)通过响应面交互作用分析与优化,鲨鱼硫酸软骨素适宜的碱提条件为碱液浓度4%、碱提温度35℃、碱提时间3h,ChS得率为14.50%;3)在优化的碱提条件处理之前利用超声波处理20min,硫酸软骨素得率可提高到18.07%,纯度为91.58%。

鲨鱼硫酸软骨素及胶原蛋白复方改善小鼠骨关节炎作用研究

将源自鲨鱼软骨的高纯度硫酸软骨素和胶原蛋白以质量比2∶1配伍,得到鲨鱼硫酸软骨素胶原蛋白复方(SCC),并考察了该复方对骨关节炎(OA)的改善作用。在实验的第0、2、4、6天向小鼠膝关节腔定量注射Ⅱ型胶原蛋白酶,构建骨关节炎小鼠实验模型。同时每天分别以300、150 mg·kg^-1剂量灌胃小鼠给予SCC干预,持续4周。之后,取关节组织,测定肿胀程度,病理切片染色分析软骨损伤情况;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-1β和IL-4表达水平。关节病理切片H&E染色结果显示,SCC 300 mg·kg^-1剂量对软骨细胞的修复优于150 mg·kg^-1剂量;Masson和天狼猩红染色结果显示,SCC 300 mg·kg^-1剂量补充胶原蛋白的能力高于150 mg·kg^-1剂量;番红-O染色结果显示,SCC 300 mg·kg^-1剂量对软骨的修复效果强于150 mg·kg^-1剂量;ELISA检测结果显示,SCC 300 mg·kg^-1剂量能显著降低血清中IL-1β水平,提升IL-4的水平。以上实验结果表明,SCC可恢复关节软骨中流失的胶原蛋白,降低IL-1β和上调IL-4的表达水平,从而显著改善Ⅱ型胶原蛋白酶所导致的小鼠膝关节炎症状,说明这种源自鲨鱼软骨的复方具有开发成膳食补充剂的良好前景。

三种方法测定鲨鱼硫酸软骨素钠含量的比较

利用酶解高效液相色谱法、高效液相色谱法及氯化十六烷基吡啶电位滴定法对鲨鱼硫酸软骨素钠含量进行检测,并对检测结果进行对比分析,结果显示,酶解高效液相色谱法不适用于鲨鱼硫酸软骨素钠含量的测定;而氯化十六烷基吡啶电位滴定法检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量稍高于高效液相色谱法;相比之下,高效液相色谱法较适用于检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量。

鲨鱼硫酸软骨素两种测定方法的比较研究

目的比较2种鲨鱼硫酸软骨素含量的测定方法。方法以硫酸软骨素、氨基己糖为标准品，采用咔唑法、Elson—Morgan法分别测定鲨鱼软骨提取物中硫酸软骨素的含量。结果咔唑法在4．710～47．100μg／ml范围内，线性关系良好（r=0．9999），溶液在3h内稳定性良好，相对标准差RSD=1．21％，重现性试验RSD=1．36％（n=6），精密度试验RSD=0．46％（n=6），平均回收率为99．60％，RSD=1．39％（n=6）。Elson—Morgan法在2．552～25．520μg／ml范围内，线性关系良好（r=0．9996），溶液在3h内稳定性良好，RSD=1．62％，重现性试验RSD=2．61％（n=6），精密度试验RSD=1．07％（n=6），平均回收率为96．55％，RSD=2．43％（n=6）。结论咔唑法测定鲨鱼硫酸软骨素含量较Elson—Morgan法简便、快速、准确，可作为测定鲨鱼硫酸软骨素含量的方法。

鲨鱼软骨素联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的观察鲨鱼软骨素对晚期非小细胞肺癌的抗肿瘤作用。方法收集确诊为Ⅲb期和Ⅳ期非小细胞肺癌的患者56例,随机分为两组,均应用吉西他滨联合顺铂或单药多西他赛化疗,其中治疗组加服鲨鱼软骨素胶囊,观察其疗效、毒副作用及生存期,进行统计学分析。结果治疗组临床受益率(71.4%),对照组39.3%,差异有显著性(Uc=2.56,P<0.05)。治疗组和对照组毒副反应发生率分别为64.2%和71.4%,差异无显著性(χ2=0.33,P>0.05)。治疗组3年生存率为53.6%,对照组为21.4%,差异有显著性(χ2=6.17,P<0.05)。结论鲨鱼软骨素联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌能明显提高有效率,降低毒副反应,提高患者生存率。