过表达SHC3激活AKT/Nrf2/GSH通路保护帕金森病氧化应激损伤

目的 研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法 运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检测各组细胞中SHC3mRNA表达;Western印迹检测各组细胞中SHC3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组相比,成功构建PC12细胞损伤模型,且MPP+损伤的PC12细胞可显著下调SHC3表达,上调ROS、MDA、LDH含量,下调GSH含量,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,显著下调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。与模型+NC组相比,成功构建过表达SHC3的PC12细胞损伤模型,且过表达SHC3可降低ROS、MDA、LDH含量,升高GSH含量,显著升高细胞活性,显著抑制细胞凋亡,显著上调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,下调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。结论 过表达SHC3可保护PD的氧化应激损伤,其机制可能与激活AKT/Nrf2/GSH通路有关。

Shc3高表达抑制人肝癌细胞系凋亡并参与肝癌耐药

目的探讨Shc3对人肝细胞癌HCC细胞凋亡及耐药机制。方法选取稳定下调Shc3的人肝细胞癌系HCCLM3和HepG2细胞及其对照组scramble细胞,稳定上调Huh7和HepG2细胞及其对照组pCDH细胞。Western blot检测Shc3、MEK、p-MEK、ERK和p-ERK蛋白表达;real-time PCR检测Shc3 mRNA表达;凋亡实验检测细胞凋亡;CCK-8法检测细胞增殖。结果成功验证Shc3降表达及过表达细胞系;与scramble组比较,Shc3降表达组细胞MEK/ERK通路激活程度明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例增加(P<0.05);与pCDH组比较,Shc3表达上调增加细胞对索拉菲尼耐受性(P<0.05),并且MEK/ERK通路激活程度明显增强(P<0.05)。结论Shc3可通过干扰HCC细胞凋亡,激活MEK/ERK通路,增加HCC细胞对索拉菲尼的耐药性,本研究结果为靶向Shc3治疗肝细胞癌提供了理论依据和实验室基础。

Shc3在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的:通过对喉鳞状细胞癌组织中Shc3表达情况的检测,探讨其与喉鳞状细胞癌患者临床病理特征及预后的关系。方法:Oncomine数据库挖掘相关Shc3的数据。采用免疫组织化学方法(SP法)检测160例喉鳞状细胞癌组织和50例声带鳞状细胞乳头状瘤组织中Shc3的表达水平。分析Shc3表达与喉鳞状细胞癌患者的临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析Shc3表达与喉鳞状细胞癌患者预后的关系。结果:Oncomine数据库的癌症异常值分析(cancer outlier profile analysis, COPA)显示Shc3与特定的头颈部鳞状细胞癌相关。免疫组织化学结果显示Shc3在喉鳞状细胞癌组织中的表达水平高于声带鳞状细胞乳头状瘤组织(P<0.05)。喉鳞状细胞癌组织中Shc3蛋白的表达水平与浸润深度、淋巴结转移及临床分期显著相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05)。生存分析表明,Shc3表达与喉鳞状细胞癌患者的预后密切相关(P<0.05)。结论:Shc3在喉鳞状细胞癌组织中高表达,可能参与了喉鳞状细胞癌的发生与发展,对喉鳞状细胞癌的预后具有重要意义。