羊胆汁中甘氨胆酸提取工艺研究

[目的]开展从羊胆汁中提取、分离和纯化甘氨胆酸的工艺研究。[方法]采用除蛋白、除色素、回收乙醇、盐析、萃取等生物化学方法,从羊胆汁中分离提取甘氨胆酸。采用了吸附色谱法和薄层层析色谱法分离纯化和鉴定了甘氨胆酸。[结果]结果表明,该研究方法所提取的GCA纯度达97.3%。[结论]首次建立了从羊胆汁中提取甘氨胆酸的技术路线,为临床用药的进一步开发奠定了基础。

天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的提取研究

[目的]建立从牛羊胆汁中分离提纯天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的工艺。[方法]采用盐析、萃取、脱水等生物化学方法和柱层析正交试验筛选天然甘氨胆酸和牛磺胆酸的最佳提取工艺。[结果]在流动相为氯仿和正丁醇，洗脱比例为3：2，装样量为3000ml胆汁粗提物，洗脱速度为6～10ml／s时提取量最大。所得产品经薄层层析法、红外光谱扫描法证实为甘氨胆酸和牛磺胆酸。经薄层扫描法测定含量，甘氨胆酸和牛磺胆酸平均纯度分别达98．4％和98．6％；提取方法平均回收率分别为63．7％和67．8％。该提取方法稳定可行，具有原材料丰富、价廉，产品纯度高、活性强等优点，适宜对天然甘氨胆酸和牛磺胆酸进行分离提制。[结论]建立了适宜对天然甘氨胆酸和牛磺胆酸进行分离提制的提取工艺。为甘氨胆酸和牛磺胆酸的工业化生产奠定了基础。

基于RGB多通道图像数据的牛胆与羊胆薄层色谱特征分析

目的旨在对牛胆和羊胆药材进行薄层色谱(thin-layer chromatography,TLC)特征性鉴别研究。方法使用异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(6:5:5:3:1)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,105℃加热至斑点清晰,366 nm下检识并拍照储存。对样品的TLC彩色图像RGB多通道数据进行提取,并应用层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)以及正交偏最小二乘判别分析(orthogonal projections to latent structures-discrimination analysis,OPLS-DA)对数据进行分析。结果各通道数据以B通道数据最具有差异特征性,而甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸以及第4个斑点为最具特征性的色谱斑点。结论相较于传统TLC鉴别方法,所建立的分析方法简便、灵敏准确,可以为其他TLC鉴别研究提供参考。

基于UPLC-Q Exactive-Orbitrap MS/MS技术的羊胆中胆汁酸成分分析

目的采用UPLC-MS/MS技术对羊胆中胆汁酸成分进行快速鉴定。方法采用Thermo HYPERSIL GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以含0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 ml/min,柱温为40℃;采用电喷雾离子源,在负离子模式下对样品进行全扫描及二级质谱扫描。结果共鉴定出15种胆汁酸成分,四种游离型胆汁酸均为首次在羊胆中检出。结论本研究所建方法具有高效、灵敏的特点,能够快速实现对羊胆中胆汁酸成分的鉴定,可为深入阐明其药效物质提供理论依据。

羊胆汁化学成分及药理作用研究进展

羊胆汁是传统动物胆汁类药材,主要含胆汁酸、胆色素、胆甾醇、卵磷脂、黏蛋白及碳酸氢钠等化学成分,具有抗炎抑菌、清热解毒、清肝明目、镇咳祛痰、降低血压、促进消化等药理作用。但目前对其化学成分、药理作用、作用机制、用药安全性等缺乏全面系统的研究。为此,查阅了大量国内外相关文献,同时结合历代本草、医药典籍的相关记载,对羊胆汁的化学成分及药理作用进行了综述,以期为羊胆汁在临床上的合理开发利用提供参考依据。

小儿肺热平胶囊中牛胆粉的质量评价及投料混伪判别

目的:建立小儿肺热平胶囊中牛胆粉质量评价方法。方法:采用HPLC-ELSD测定小儿肺平胶囊中结合胆酸的含量,采用Besil 5 C_(18)-H色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈为流动相A,以0.2%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱;柱温为35℃;流速为1.0 mL·min^(-1),漂移管温度110℃,气体流速3 L·min^(-1);对牛磺胆酸/甘氨胆酸的比值进行测定,并通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA),筛选影响批次间一致性的成分。结果:2家生产企业的结合胆酸的含量差别较大;PCA结合OPLS-DA筛选出了引起不同生产企业差别较大的最大影响因素为牛磺胆酸/甘氨胆酸的比值,A企业的比值大于2.0,B企业的比值小于2.0。结论:本研究建立的方法能快速有效地评价小儿肺热平胶囊中牛胆粉的质量及是否存在羊胆粉混伪投料。

基于UHPLC-ELSD指纹图谱及多成分含量测定比较不同产地羊胆汁质量及抗氧化活性

目的 建立UHPLC-ELSD指纹图谱与多成分含量测定方法,比较不同产地羊胆汁的差异,并进行抗氧化活性研究,为羊胆汁的深入开发利用提供依据。方法 采用UHPLC-ELSD建立21批不同产地羊胆汁指纹图谱并进行相似度分析;测定6个成分含量、DPPH及ABTS自由基清除能力、铁离子还原能力,并进行熵权TOPSIS及灰色关联度分析。结果21批羊胆汁指纹图谱共确定11个共有峰,通过与对照品比对指认出牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)、甘氨胆酸(glycocholic acid,GCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TDCA)、甘氨脱氧胆酸(glycodeoxycholic acid,GDCA)、胆酸(cholic acid,CA) 6个成分,除4批样品外,指纹图谱相似度均>0.90, 21批羊胆汁冻干粉中6个成分的总含量范围为55.34%~86.08%,含量最高的TCA含量范围为34.74%~60.86%,显示6个成分含量在不同产地样品中存在较大差异;不同产地羊胆汁均具有抗氧化活性,同样也存在一定差异。以6个成分含量为变量的熵权TOPSIS分析结果显示,得分排名位于前十的为S2、S18、S16、S9、S8、S21、S1、S10、S20、S15,表明其质量较好,且来自北方地区绵羊的羊胆汁质量略优;对6个成分含量与3个抗氧化指标的灰色关联度分析结果显示,6个成分与各抗氧化指标均具有关联性,且TCA、TDCA、TCDCA关联度最高,可能是羊胆汁发挥抗氧化作用的重要成分。结论 采用熵权TOPSIS及灰色关联度分析方法能有效分析不同产地羊胆汁的质量差异及抗氧化活性成分,为其质量评价提供科学依据。

常用胆汁类动物药中特征离子的探索研究及应用

采用液质联用的方法对常用的胆汁类动物药的特征离子进行研究，以期解决该类药材及含有该类药材的复方制剂专属性检验的问题。通过UPLC．Q-TOF对样品进行测定，然后使用MarkerLynxTMv．4．1质谱数据处理软件以及胆汁酸类成分的选择离子色谱图对数据进行对比分析，结果方法对于猪胆粉、熊胆粉、体外培育牛黄和人工牛黄的专属性鉴别效果较好，在护肝片和人工牛黄甲硝唑胶囊的专属性鉴别中效果也较好。该方法适用于猪胆粉、熊胆粉、体外培育牛黄和人工牛黄以及一些含上述药材的复方制剂的专属性鉴别。

羊胆中胆汁酸类成分的考察、测定与探讨

目的:对羊胆中的胆汁酸类成分进行考察,并对其中的主要胆汁酸进行测定,最后对研究结果进行深入讨论。方法:首先对收集到的来源确切的羊胆样品进行冷冻干燥处理,以确保干燥粉末与新鲜胆汁成分的一致性。然后使用TLC法,分别采用异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10:5:5:3:0.8)和异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(6:5:5:3:1)为展开剂,使用10%硫酸乙醇溶液显色,明确羊胆中的胆汁酸成分,根据斑点的深浅对胆汁酸含量进行初步的判断;再使用Agilent SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),10 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测,对羊胆中2个含量最高的胆汁酸类成分牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸进行了含量测定研究。结果:本研究明确了羊胆中含有胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和牛磺石胆酸,其中以牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸含量为最高。测得10批羊胆样品的牛磺胆酸和牛磺去氧胆酸的平均含量分别为47.5%和8.8%,这2个成分的总含量平均为56.3%,牛磺胆酸含量与牛磺去氧胆酸含量的平均比值为5.4。结论:本研究所建立的TLC方法不仅可用于羊胆的研究,同样适合用作其他胆汁类药材的鉴别或胆汁酸类成分的确定研究,而定量的HPLC-ELSD法也可以简便、快速、准确且经济地用作羊胆的含量测定工作。

牛、羊胆的质量标准现状及相关问题的探讨

对牛胆和羊胆的相关质量标准进行梳理和分析,并对标准中存在的相关问题进行探讨。发现牛胆和羊胆的相关药材物理形态较混乱,其质量标准所采用的技术方法普遍较为落后,此外主要还存在部分药材标准还存在缺少必要检验项目的问题,这些问题在羊胆相关药材标准中尤其明显。这些问题对牛胆和羊胆的相关药材质量评价和控制十分不利。建议从药材实际合理的使用情况出发,明确其物理形态及制备方法,完善质量标准应有的检验项目,并依托目前主流分析技术对质量标准的技术方法进行改进和提高。

预处理方法对羊胆汁中胆酸含量的影响

目的:考察羊胆汁预处理方法对胆酸含量的影响。方法:采用直接干燥法、皂化法、真空冷冻干燥法、离心法制备胆酸,通过紫外分光光度法测定胆酸含量,考察不同预处理方法对胆酸含量的影响。结果:不同预处理方法对羊胆汁中胆酸含量影响较大,皂化后粗品、皂化后精品、冷冻干燥品、离心干燥品1、离心干燥品2、胆囊直接干燥品的胆酸质量分数分别为63.41%,79.55%,39.67%,30.62%,41.71%,36.26%。结论:综合干燥品总得率及胆酸含量考虑,直接离心后加95%乙醇除去蛋白成分的方法和真空冷冻干燥法较好。

猪牛羊胆汁HPLC指纹图谱研究

为有效控制猪、牛和羊胆汁质量,采用高效液相色谱法（HPLC）,以AcclaimTMRSLC 120 C18色谱柱（3.0 mm×100mm,2.2μm,120）;在柱温35℃下,以乙腈-1%高氯酸为流动相体系,0.5 m L·min-1流速梯度洗脱,200 nm波长检测,以中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A版）生成指纹图谱。以对照品归属各共有指纹峰,并采用蒸发光散射检测器（ELSD）和液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）验证。结果显示,猪、牛、羊胆汁色谱图分别有14,9,8个共有指纹峰,各相似度均大于0.92。以甘氨猪脱氧胆酸（GHDCA）、牛磺胆酸（TCA）分别作为猪胆汁和牛、羊胆汁HPLC指纹图谱的参照物,方法学考察结果符合指纹图谱建立要求,各共有指纹峰相对保留时间RSD小于1.5%,相对峰面积RSD均小于5.0%。归属猪胆汁共有指纹峰有牛磺猪脱氧胆酸（THDCA）、牛磺鹅脱氧胆酸（TCDCA）、甘氨猪脱氧胆酸（GHDCA）和甘氨鹅脱氧胆酸（GCDCA）,牛、羊胆汁共有指纹峰有牛磺胆酸（TCA）、牛磺鹅脱氧胆酸（TCDCA）、甘氨胆酸（GCA）、甘氨鹅脱氧胆酸（GCDCA）和甘氨脱氧胆酸（GDCA）。研究结果表明,猪牛羊胆汁主要成分为结合型胆汁酸,猪胆汁与牛羊胆汁中的胆汁酸类成分存在显著性差异;三者的HPLC指纹图谱,特征性强、重复性好,可用于鉴别猪牛羊胆汁,控制胆汁质量。以快速液相色谱柱建立指纹图谱,可在HPLC系统分析,简便快速,具有可操作性。

不同胆汁及其制成的胆南星对LPS诱导的急性肺损伤大鼠保护作用考察

目的:比较不同胆汁(猪、牛、羊胆汁)及其制成的胆南星对急性肺损伤大鼠的保护作用,以期为胆南星的胆汁选择和饮片分级提供参考。方法:Wistar雄性大鼠96只,随机分为空白组、模型组、猪胆汁组、牛胆汁组、羊胆汁组、猪胆南星组、牛胆南星组、羊胆南星组,各给药组大鼠每天按2. 52 g·kg^-1灌胃给予相应药液,空白组和模型组大鼠每天灌胃给予同体积生理盐水,共8 d。第8天,模型组和各给药组大鼠灌胃1 h后,腹腔注射脂多糖(LPS,2 mg·kg^-1)制备大鼠肺损伤模型,注射LPS后3,6,24 h各取4只大鼠,取血和肺组织。测定肺系数、肺含水量及肺组织湿重/干重比值(W/D);利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),血栓素B2(TXB2)含量,以及肺组织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量;观察大鼠肺组织病理形态,计算大鼠肺组织损伤评分。结果:与同时间点模型组比较,猪胆汁、牛胆汁、羊胆汁及其制成的胆南星给药组大鼠肺系数、肺含水量及W/D均降低,且大部分具有显著性差异(P <0. 05,P <0. 01);能够降低模型大鼠血清TNF-α,IL-6,TXB2的含量,降低肺组织中MDA和MMP-9含量,以及提高肺组织中GSH-Px和SOD活性,且大部分具有显著性差异(P <0. 05,P <0. 01)。牛胆汁组和羊胆汁组在大多数评价指标方面优于猪胆汁组,胆南星(牛胆汁制)和胆南星(羊胆汁制)在大多数评价指标方面优于胆南星组(猪胆汁制),且部分具有显著性差异(P <0. 05,P <0. 01)。结论:不同胆汁(猪、牛、羊)及其制成的胆南星均对LPS诱发的急性肺损伤大鼠具有保护作用,且牛胆汁和羊胆汁治疗效果优于猪胆汁,胆南星(牛胆汁制)和胆南星(羊胆汁制)治疗效果优于胆南星(猪胆汁制)。

羊ACOX2基因功能的研究进展

ACOX2基因(Acyl-CoA oxidase 2)是脂酰辅酶A氧化酶2的编码基因,属于酰基辅酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACOX)家族。该基因家族有ACOX1、ACOX2、ACOX3 3种亚型,均参与脂肪酸代谢过程。ACOX2基因在脂肪酸代谢途径中有高表达,是脂肪酸代谢过程中重要的调控基因。该基因在过氧化物酶体中含量最多,生物过程表现为在过氧化物酶体中将长支链脂肪酸氧化成短链脂肪酸,且通过氧化胆汁酸的辅酶A酯中间体,催化胆固醇转化为胆汁酸,从而影响脂肪酸含量。ACOX2基因在心脏、肝脏和肾脏中表达量最丰富。目前,科学家已研究出小鼠和人类的外显子编码区,在羊的外显子研究中只有预测结果。