RT-Nested PCR检测贝类中甲肝病毒的研究

[目的]建立灵敏的贝类中甲肝病毒检测方法[方法]由于贝类中HAV污染水平低并存在PCR抑制剂,普通RT-PCR方法检测贝类中甲肝病毒的灵敏度低。本文建立了使用RT-NestedPCR进行贝类中甲肝病毒检测的方法。[结果]此法的检测灵敏度达0.5个TCID50/1.5g样品,与普通RT-PCR相比,灵敏度提高了100倍。

AC-PCR法检测连云港海域贝类HAV

为了解连云港海域贝类甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）污染状况，证实其在本地区甲肝传播中的媒介地位，我们应用抗体捕捉聚合酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）检测市售贝类的ＨＡＶ，结果报告如下：材料和方法１贝类样品于１９９６年春、秋二季采集新浦区、连云区和赣榆县等地水产品市场...

HAV RT-PCR检测方法的建立及其在猪群中的流行调查

目的:了解屠宰生猪中甲型肝炎的流行情况,探讨猪作为HAV另一宿主和携带者的可能性,以期为人类甲肝的防治提供一定的理论依据。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对大理地区屠宰生猪血清中HAV Ig G检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对屠宰生猪的全血和胆汁标本进行HAV RNA检测,以甲型肝炎患者的血液和胆汁为阳性对照标本。结果:1屠宰猪血清样本中检测出HAV的抗体阳性率为73.3%(374/510);2建立了甲型肝炎病毒的RT-PCR检测方法;3用RT-PCR在阳性对照标本中检出HAV RNA;4用RT-PCR在屠宰猪的全血和胆汁样本中未检出HAV RNA。结论:成功建立起RTPCR检测待测样本中的HAV RNA的方法;屠宰猪血清样本中检测出HAV的抗体阳性率较高;猪是否可以感染人的HAV还有待于进一步研究。

AC／PCR在评价压力蒸气对蚶体内HAV灭活效果的应用

ＡＣ／ＰＣＲ在评价压力蒸气对蚶体内ＨＡＶ灭活效果的应用上海市卫生防疫站２０００３１刘国星，周名权抗原捕获聚合酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）检测毛蚶中甲肝病毒（ＨＡＶ），具有操作简单、敏感度高、特异性好的特点。一、试剂、材料ＰＣＲ引物５＇－ＴＣＣＣＡＧＡＧＣ...

用抗体捕获PCR试验检测下水道淤泥中HAV

用抗体捕获ＰＣＲ试验检测下水道淤泥中ＨＡＶ许多肠道病毒通过细胞培养感染即可根据其细胞毒性而确诊。由于ＨＡＶ通常不出现细胞毒性现象，且复制缓慢，同相免疫试验敏感性又差，不适于检测环境标本中ＨＡＶ，其它实验方法受污泥中有机、无机物影响。因此，作者将抗体捕...

甲型肝炎病毒PCR检测结果与其感染性关系的研究

据检测，以３００μＷ／ｃｍ２紫外线照射１０分钟，或用１％过氧化氢处理３０分钟，对甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）感染性的灭活率为９９．９９％，但用ＰＣＲ法未检出５＇端非编码区的扩增片段；经紫外线照时２０分钟，ＨＡＶ感染性虽全部消失，但仍可检出Ｐ１区扩增片段。结果表明，ＨＡＶ感染性的有无与ＰＣＲ扩增产物检出与否无平行关系．

RT-PCR一步法检测甲型肝炎活病毒方法的建立

建立灵敏、特异、快速检测甲型肝炎活病毒(HAV)的方法。提取HAV总RNA,选用HAV高保守区为目标区,设计合成一对引物,通过RT-PCR反应扩增其核酸,用琼脂糖凝胶电泳法检测其扩增产物,紫外灯下观察,约200bp处为目标片段,根据观察结果,计算HAV滴度。RT-PCR一步法快速、灵敏、重复性好、特异性强,可用于甲型肝炎活病毒检测。

运用SYBR GreenⅠ荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒

针对甲肝病毒的vp3/vp1壳蛋白区域设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101TCID50,标准曲线为Ct=-3.052lg(TCID50)+34.57,线形范围101～105TCID50,相关系数0.9961。该方法对甲肝病毒检测特异,与轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒无交叉反应。针对甲肝病毒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.85%～1.71%(n=5)、批间试验CV为0.76%～1.98%(n=3)。运用此方法随机检测45份草莓样品,检测出3份阳性样品。该检测方法灵敏、特异、重复性好,可应用于水果和蔬菜中甲肝病毒的快速检测。

一步单管反转录PCR检测水中甲型肝炎病毒

以往甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的检测主要依赖细胞培养法，但此法所需时间长、敏感性低、特异性不强。虽然反转录ＰＣＲ等技术已被用于粪便或食品中ＨＡＶ的检测，但常规反转录ＰＣＲ操作繁琐、污染环节多，极易造成污染，致使实验结果不稳定或出现假阳性结果。为克服ＰＣＲ检测ＨＡＶ的缺点和不足，我们在实验基础上建立了一步单管反转录ＰＣＲ技术检测水中的ＨＡＶ，采用热裂解法提取样品中ＨＡＶ病毒的总ＲＮＡ，反转录与ＰＣＲ反应一步进行，整个反应在一个反应管中进行，操作方法较简单，中间可能污染的环节较少，因此，最大限度的减少了由环境造成的可能污染。我们设计合成的引物（Ｈ１—Ｈ２）在ＨＡＶ病毒核酸的ＶＰ１区，只特异地扩增ＨＡＶ核酸片断，具有较强的特异性。改进后的反转录ＰＣＲ的敏感性与常规反转录ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＨＡＶ。

一步单管反转录PCR快速检测水中甲型肝炎病毒

本研究采用一种新的方法提取核酸，提取的病毒ＲＮＡ纯度高，增加了结果的稳定性；而且操作简单，整个过程只需要１０ｍｉｎ。反转录（ＲＴ）与聚合酶链式反应（ＰＣＲ）在一个反应管中一步操作即可完成，减少了污染机会，提高了反应敏感性和特异性。关键词：聚合酶链式反...

应用逆转录PCR检测海产贝壳类中的甲型肝炎病毒

污染水体中生长的贝壳类是传播甲型肝炎的重要媒介之一,本文介绍了用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测贝壳类中甲型肝炎病毒（HAV）的方法.贝壳类中HAV的浓集回收采用洗脱-沉淀法并加以改进,30g贝肉中的病毒浓集回收在1.5～2.0ml上清液中.RT-PCR检出限为回收样品经二次扩增后10-2稀释度.从7种39份采自大连近海海域的贝壳类样品中, 用该法检测出阳性样品4种10份,阳性率为26%.说明各种贝壳类有不同程度的污染.

RT-PCR法检测甲肝疫苗滴度

建立快速灵敏特异的甲肝减毒活疫苗滴度的ＲＴ－ＰＣＲ检测法。方法：以编码甲肝病毒（ＨＡＶ）ＶＰ３羧基端的基因区为目标区，运用ＲＴ－ＰＣＲ法对甲肝疫苗病毒进行检测，并与ＴＣＩＤ５０检测法进行比较。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法灵敏度和特异性均与ＴＣＩＤ５０法相似，...

多重PCR检测水中肠道总病毒及甲型肝炎病毒

Enteroviruses and hepatitis A virus (HAV ) in water was detected by multiplex PCR. The general primers for en- teroviruses was designed from the 5’ noncoding region, and the length of amplified product 440 bp sequences. while the HAV primers was from the VP1 region. amplified 227 bp sequences.Detecting of enteroviruses and HAV by multiplex PCR could give a high speci-ficity and sensitivity, The multiplex PCR has more advantages than common PCR for virus detection. Such as. the rapid turnaround time and cost effetiveness.

地高辛标记RT-PCR检测甲肝减毒活疫苗的研究

以编码甲肝病毒ＶＰ３ 羧基端的基因区为目标区，运用地高辛标记ＲＴＰＣＲ 法对甲肝疫苗进行检测，并与ＴＣＩＤ５０ 检测法进行比较。建立甲肝减毒活疫苗滴度的地高辛标记ＲＴＰＣＲ 检测法。结果显示：地高辛ＲＴＰＣＲ 法灵敏度略高于ＴＣＩＤ５０ 法，特异性与ＴＣＩＤ５０ 相似，且快速简便，易于推广应用。结果表明：地高辛标记ＲＴＰＣＲ 法是一种简便、快速、灵敏的甲肝病毒检测方法，可用作疫苗的常规检测。

输血传播甲型肝炎病毒(HAV)的分子和血清学追踪

背景 甲型肝炎病毒经输血途径传播至今尚无分子生物学证据。病例报道：一名33岁无症状的女性自愿者献了一次全血。13天后她被诊断为急性HAV感染。在回顾性研究中，应用定量逆转录PCR法(RT-PCR)在被隔离存放的、该献血者的新鲜冰冻血浆中检出高的病毒载量。而抗HAV IgM和IgG未被检出，丙氨酸转氨酶也未增高。她捐献的红细胞刚好在第14天输给了病人。这位63岁的男性受血者HAV血清呈阳性反应，无HAV临床症状，也没有发现抗HAV IgM。

泥螺中肠道病毒实验污染及消除的研究

为早日利用我国丰富的小水产资源及满足人民的需要,本文对泥螺在实验污染肠道病毒(HAV及polio病毒)的条件下,经邵万生等三家食品加工厂的常规腌制加工及以不同方式加用不同浓度的BC—98杀菌消毒剂后,泥螺中肠道病毒的灭活情况做了研究,实验用肠道病毒细胞培养、空斑形成试验对病毒做定性定量测定,并用PCR(多聚酶链反应)核酸电泳及分子杂交等技术对甲肝病毒核酸进行特异、快速的检测鉴定研究。结果显示加工后的成品未检测到甲肝病毒核酸,细胞培养阴性,证明了按三家特定食品加工厂的常规腌制后,能消除泥螺中的肠道病毒。

快速检测甲肝减毒活疫苗滴度方法的建立

目的 通过利用对甲肝病毒(HAV)RT -PCR产物的半定量分析建立快速检测甲肝减毒活疫苗滴度的方法,并比较该方法与细胞培养(CCID50 )检测法的相关性。方法 运用RT -PCR的方法,以保守的HAVVP3-VP1部分基因区为目标区对甲肝疫苗病毒进行核酸扩增,利用PharmaciaImageMaster○RVDS凝胶成像分析系统进行产物的半定量分析得出结果,并与常规细胞培养法所测感染性滴度(CCID50 )进行比较。结果 本检测方法比细胞培养法缩短了2 0余天,与细胞培养法的灵敏度相似,与细胞培养法结果的差异无统计学意义。结论 所建立的方法具有操作简便、快速的优点,有望替代细胞培养法作为用于检测甲肝减毒活疫苗滴度的常规方法。

库血肝炎病毒复检与输血相关性肝炎的研究

目的：为了解库血肝炎病毒感染情况及其与输血后肝炎的关系。方法：应用PCR及ELISA的方法，对213份经筛检合格的全血，进行肝炎病毒标志物复检。结果：抗-HAV-IgM、抗-HCV、抗-HEV-IgM、抗HGV阳性率分别为：0%（0／213）、0.9%（2／213）、1.9%（4／213）、2.8%（6／213），HBVM HBSAg(+)1.9%（4／213）、HBeAg(+)1.4%（3／213）、抗HBC和(或)抗HBe(+)51.6%（110／213），抽取44份抗HBC和(或)抗-HBe(+)血检测抗-HBC-IgM均为阴性。PCR方法检测HAV、HBV、HCV阳性率均为0%（0／213），HEV-RNA(+)为0.5%（1／213）、HGV-RNA(+)为1.4%（3／213）。结论：筛检合格的全血仍有可能存在肝炎病毒感染，并与输血后肝炎密切相关，应增加筛检指标。

应用免疫捕获—逆转录—聚合酶链反应检测海域贝类中的甲肝病毒

为了检测贝类标本中的甲型肝炎病毒，我们建立了敏感特异的免疫捕获—逆转录—聚合酶链反应技术（ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ）。应用该技术检测不同地区采集的贝类标本中的ＨＡＶ－ＲＮＡ后发现：４６份贝类标本有２９份为阳性，检出率达６３０４％（２９／４６），其中毛蚶为６３１６％（１２／１９），文蛤为９０００％（９／１０），蚶子为５４５５％（６／１１），说明各种贝类有不同程度的污染；南部、中部地区贝类标本中的ＨＡＶ－ＲＮＡ检出率较高，北部地区１０份标本仅检出１份阳性，这与当地甲肝发病率较低一致。

荧光定量PCR法研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白联合用药体外抗HIV-1的作用

目的建立荧光定量PCR技术测定HIV-1病毒载量的方法 ,并用于研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)联合用药前后的病毒载量变化。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立荧光定量PCR测定HIV-1病毒载量的体系。分别设置rvMIP、AZT、T-20、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20 5个不同用药组,运用荧光定量PCR法检测用药后各组病毒载量的变化。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101拷贝,其标准曲线的相关系数为0.997 4,斜率为-2.524,截距为29.716;除了浓度6 ng.mL-1的rvMIP组、AZT组、T-20组外,各用药组病毒载量值与阳性对照均有差别,且随药物浓度增加,病毒载量逐渐减小。各相同浓度用药组病毒载量相比,rvMIP+T-20组(rvMIP+AZT组(rvMIP组(T-20组(AZT组。结论所建立的荧光定量PCR检测体系可靠;rvMIP与T-20或AZT联用可以增强rvMIP对HIV-1病毒的抑制作用。