基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘的分子机制

目的基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘(NA)的分子机制。方法(1)利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作用靶点。利用OMIM、Gene Cards、Dis Ge NET及Drug Bank数据库检索、筛选NA疾病相关靶点。通过微生信平台对射麻止喘液活性成分作用靶点与NA疾病相关靶点取交集,得到射麻止喘液治疗NA的潜在作用靶点(共有靶点)。采用Cytoscape 3.8软件构建“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络。通过STRING数据库建立潜在作用靶点蛋白互作(PPI)网络,使用内置Mcode插件分析获得核心靶点。使用Metascape平台对潜在作用靶点进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。(2)将BALB/C小鼠适应性喂养1周后,随机分为空白组、NA模型组、射麻止喘液低剂量组(2.5 g·kg^(-1))、射麻止喘液高剂量组(10 g·kg^(-1))、地塞米松对照组(1 mg·kg^(-1));通过腹腔注射致敏剂[鸡卵清白蛋白(OVA)+弗氏完全佐剂(CFA)]并通过雾化吸入激发的方法复制NA小鼠模型,第0、7、14天分别腹腔注射OVA+CFA(20μg OVA+75μg CFA,0.3 m L)致敏,第21~30天采用5%OVA混悬液雾化激发(每次8 m L,每次雾化时间40 min,每天1次);雾化激发前1 h各组灌胃给药,地塞米松对照组腹腔注射给药,每天1次。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-8含量;RT-q PCR法检测肺组织中NLRP3、CXCR2 m RNA表达水平;免疫组化法检测肺组织中p-m TOR蛋白表达水平。结果(1)共筛选得到射麻止喘液活性成分作用靶点826个,NA疾病相关靶点154个,取交集后得到射麻止喘液治疗NA的51个潜在作用靶点(共有靶点)。通过“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等关键活性成分。通过对潜在作用靶点的PPI网络分析得到29个核心靶点,包括AKT1、IL6、TNF、EGFR、NLRP3、RELA、MIF、CXCR2、VEGFA等。GO功能富集分析得到882个生物学过程条目、33个细胞组分条目、61个分子功能条目;KEGG通路富集分析得到142条信号通路,主要涉及TNF信号通路、甲型流感信号通路、Toll样受体通路、MAPK信号通路、m TOR信号通路等。(2)动物实验结果:与空白组比较,NA模型组小鼠的气道黏膜损伤明显,结构紊乱,有大量炎性细胞浸润,黏膜充血、水肿,肺泡壁明显增厚,肺泡腔缩小;肺泡灌洗液中的炎症因子IL-8水平明显升高(P<0.05);小鼠肺组织NLRP3、CXCR2 m RNA表达显著上调(P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显升高。与NA模型组比较,射麻止喘液低、高剂量组小鼠肺组织支气管上皮细胞结构排列可见少许紊乱,气管及血管周围有少量的炎性细胞浸润,支气管黏膜充血水肿明显减轻;小鼠肺组织CXCR2 m RNA表达显著下调(P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显降低。射麻止喘液高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的IL-8水平明显降低(P<0.05);射麻止喘液低剂量组小鼠肺组织NLRP3m RNA表达明显下调(P<0.05)。结论射麻止喘液对NA的治疗作用可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等关键活性成分,作用于NLRP3、CXCR2等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样信号通路、m TOR等关键信号通路来实现的。

射麻止喘液对哮喘模型大鼠环核苷酸变化的影响

【目的】进一步探讨治疗哮喘的临床有效方剂射麻止喘液 (射干、麻黄、椒目等 )的作用机理。【方法】建立大鼠哮喘模型 ,设立大鼠正常组、模型组、西药组、中药组 ,用放射免疫法对各组肺组织的环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷 (cGMP)含量的变化进行比较研究。【结果】治疗后西药组和中药组的cAMP、cAMP cGMP均较模型组提高 ,cGMP降低 (P <0 .0 5 ) ,但中药组与西药组间的cAMP cGMP无显著性差异。【结论】提示射麻止喘液可能通过调节cAMP cGMP的失衡 ,从而抑制炎症细胞浸润 ,取得平喘的良效。

支气管热成形术联合射麻止喘液对重症哮喘患者的疗效及生化指标的影响

目的研究支气管热成形术(bronchial thermoplasty,BT)联合射麻止喘液对重症哮喘患者的疗效及生化指标的影响。方法选取2017年12月-2020年1月中国科学院大学深圳医院收治的重症哮喘患者60例,按照信封法随机等分为联合组及常规组,各30例。常规组实施沙美特罗替卡松粉吸入剂(ICS-LABA)治疗,联合组实施BT联合射麻止喘液治疗。比较两组临床疗效、治疗前后肺功能、血清及肺泡灌洗液(BALF)中IL 17、TGF-β水平的变化情况。结果联合组总有效率(96.67%)明显高于常规组(76.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.192,P<0.05)。治疗后,两组FVC、FEV1、FEV1/FVC水平对比,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,联合组血清及BALF中的IL-17、TGF-β水平均显著低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BT联合射麻止喘液可改善重症哮喘患者血清及BALF中的IL-17、TGF-β水平,疗效显著。

射麻止喘液通过调控NF-κB/VEGFA信号通路抑制气道上皮细胞EMT改善哮喘气道重塑的机制研究

目的:探讨射麻止喘液对哮喘小鼠气道上皮细胞间充质转化(EMT)和气道重塑的影响及其潜在机制。方法:将30只SPF级雌性小鼠随机分为空白组,模型组,射麻止喘液低剂量、高剂量组,地塞米松组。屋尘螨滴鼻致敏建立哮喘小鼠模型。计算小鼠肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数,HE、PAS、Masson染色法观察小鼠肺组织病理形态,ELISA法检测血清炎症因子和总IgE含量,RT-PCR检测气道重塑相关指标mRNA表达水平,免疫组化和荧光检测肺组织气道上皮细胞EMT标志物的表达情况,网络药理学预测射麻止喘液改善哮喘气道重塑的机制,Western Blot检测p-p65、p-IκBα、TNF-α、VEGFA关键蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,3个给药组小鼠肺泡灌洗液中白细胞总数显著减少(P<0.01,P<0.05),血清IL-4、IL-5、总IgE含量显著降低(P<0.01,P<0.05),肺组织炎症细胞浸润、黏液分泌以及胶原沉积等病理情况显著改善(P<0.01),气道重塑相关指标Muc5ac、Fn1、α-SMA mRNA表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05),肺组织中E-Cadherin、ZO-1蛋白表达水平升高,而N-Cadherin、α-SMA、p-p65、p-IκBα、TNF-α、VEGFA蛋白显著降低。结论:射麻止喘液可以通过抑制NF-κB/VEGFA信号通路改善气道上皮细胞EMT,进而改善哮喘气道重塑。

基于网络药理学探索射麻止喘液治疗哮喘的作用机制

目的:运用网络药理学探讨射麻止喘液治疗哮喘的潜在机制。方法:利用中药分子机制的生物信息学分析工具、中药系统药理数据库和分析平台查找射麻止喘液的成分及其靶点,从比较毒理基因组学数据库(CTD)获取与哮喘相关的基因;将射麻止喘液-基因和哮喘-基因的数据集导入Draw Venn Diagram进行交集分析,得出射麻止喘液-哮喘-基因数据集;使用String 11. 0进行射麻止喘液-哮喘-基因数据集的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,运用Cytoscape 3. 6. 1进行可视化,用其插件MCODE分析重要模块;采用DAVID 6. 8分析射麻止喘液-哮喘-基因的通路富集和生物学过程。结果:获得射麻止喘液399个化合物与2 099个潜在的靶点;同时检索出98个与哮喘相关靶点;应用交集和PPI分析筛选出45个共同基因和关键基因16个,包括转化生长因子-β1,血红素氧合酶-1,白细胞介素-4等;富集分析显示射麻止喘液和哮喘的共同生物学过程与炎症反应、气道的收缩与重塑、细胞增殖与凋亡等相关,共同生物学通路包括肿瘤坏死因子信号通路、免疫球蛋白E(IgE)的高亲和力受体信号通路、核转录因子-κB信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域样受体信号通路等。结论:射麻止喘液是通过多靶点、多通路治疗哮喘,可为其深入研究和临床应用提供参考。