参芍口服液对冠状动脉粥样硬化大鼠主动脉IL-8、VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的观察参芍口服液(丹参、黄芪、赤芍、当归、川芎、桃仁、红花、水蛭、地龙、半夏)对冠状动脉粥样硬化模型大鼠主动脉IL-8、VCAM-1和ICAM-1表达的影响,完善参芍口服液治疗冠状动脉粥样硬化的作用机制。方法采用高脂饮食+维生素D3制作冠状动脉粥样硬化模型大鼠,50只SD大鼠(鼠龄3个月)随机分为空白对照组、模型组、参芍口服液高剂量、参芍口服液低剂量和辛伐他汀组。正常组常规饲养,模型组和治疗组大鼠给予高脂饮食+维生素D3腹腔注射。喂饲4周后,灌胃给药8周,处死。ELISA法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)。取主动脉行免疫组化及免疫印迹,观察白细胞介素8(IL-8)、血管间细胞黏附分子(VCAM-1)和白细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,治疗组血清TC、TG、LDL下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,治疗组冠状动脉粥样硬化组织IL-8、VCAM-1及ICAM-1的表达下降,且参芍口服液高剂量优于参芍口服液低剂量。结论参芍口服液可通过改善血脂指标,降低IL-8、VCAM-1和ICAM-1的表达,缓解组织炎症,治疗冠状动脉粥样硬化性疾病。

参芍口服液对实验性脑出血大鼠脑内CD14/TLR4介导的继发性炎症损伤的干预效果研究

目的:研究参芍口服液对实验性脑出血大鼠脑内CD14/TLR4介导的继发性炎症损伤的干预效果。方法:实验大鼠随机分为假手术组(Sham组),脑出血模型组(ICH组),参芍口服液干预组(SS组)。每组又分为6h,12h,24h,72h和7d 5个小组。ICH组和SS组用自体股动脉血法复制脑出血模型。SS组苏醒后给予参芍口服液(8mL/d)灌胃。观察脑组织病理形态学变化及未受损神经元计数;干湿重法测定脑含水量变化;免疫组化和免疫印迹法检测CD14、TLR4和IL-8阳性细胞数和蛋白表达水平。结果:ICH组脑出血后6h开始出现水肿,12~72h脑组织含水量逐渐增加,72h达到高峰,之后脑水肿逐渐减弱,7d基本恢复正常;SS组较模型组脑含水量显著降低(P<0.05)。Sham组大鼠CD14在脑组织细胞微量表达;ICH组术后6h血肿周围CD14蛋白开始表达,可见少量阳性细胞随时间延续,表达量逐渐增加,72h蛋白表达达最高峰,以后逐渐降低。TLR4、IL-8蛋白表达水平趋势和CD14相一致。TLR4与CD14表达水平变化与脑含水量呈正相关(P<0.05);参芍口服液干预后,CD14表达水平TLR4、IL-8表达量也显著降低。结论:参芍口服液可能通过减少CD14/TLR4信号通路的诱发因素,降低脑出血后血肿周围脑组织继发性炎症损伤,对脑组织起保护作用。

参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激因子GRP 78、PERK及CHOP表达的影响

目的观察参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激标志性因子GRP78、PERK及CHOP表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Sham组)、模型组(DN组)和参芍口服液组(SS组)。DN组和SS组予以高脂饲料加链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病肾病模型。SS组每日1次给予参芍口服液(250 mg/kg)灌胃,Sham组和DN组每日1次给予等剂量的蒸馏水灌胃。12周后检测各组血糖、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)及24 h尿蛋白定量(PRO);HE染色光镜下观察大鼠肾组织病理形态学改变;Western blot检测大鼠肾组织GRP78、PERK及CHOP蛋白表达情况;TUNEL染色检测大鼠肾组织细胞凋亡情况。结果DN组血糖、BUN、Scr及PRO与Sham组相比均增高,SS组血糖、BUN、Scr及PRO与DN组相比均降低(P<0.05)。HE发现Sham组大鼠肾组织形态结构清楚,未见异常;DN组可见肾小球体积增大,可见大量炎症细胞浸润,肾小球系膜基质区增生,肾小管基底膜增厚,部分肾小球、肾小管出现纤维化;SS组肾组织病理形态变化轻于DN组。Western blot发现DN组肾脏组织GRP78、PERK及CHOP蛋白表达高于Sham组,SS组肾组织GRP78、PERK及CHOP蛋白表达均低于DN组(P<0.05)。TUNEL发现DN组较Sham组肾脏组织存在更多细胞凋亡;SS组凋亡细胞少于DN组。结论参芍口服液可减轻糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,延缓肾功能减退,具有肾保护作用,其机制可能与降低内质网应激相关因子GRP78、PERK及CHOP的表达及减少肾组织细胞凋亡有关。

参芍口服液对缺血再灌注心肌大鼠MMP-2、TIMP-2和心肌激酶的影响

目的观察参芍口服液对心肌缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)和心肌激酶的影响。方法选取40只SD大鼠,随机平均分为4组,即假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、参芍口服液组(C组)、瑞舒伐他汀组(D组),每组10只。C组、D组分别于术前3 d给予参芍口服液8ml/d、瑞舒伐他汀10 mg/d灌胃,A组、B组给予生理盐水。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min再灌注120 min的方法复制大鼠心肌缺血再灌注模型(假手术组不结扎)。分析各组大鼠心肌HE染色情况、MMP-2和TIMP-2的表达、心肌激酶变化。结果心肌HE染色:A组心肌结构正常,B组心肌细胞破坏最严重,C组心肌细胞破坏程度较B组和D组明显减轻。免疫组化检测:MMP-2蛋白的表达水平A组<C组<D组<B组,各组间相比有统计学意义(P<0.05);TIMP-2蛋白的表达水平A组>C组>D组>B组,各组间相比有统计学意义(P<0.05)。大鼠心肌酶:CK的水平A组有很少量的表达,其余各组均有大量表达(P<0.05);CK-MB、LDH的水平A组<C组<D组<B组,各组间相比有统计学意义(P<0.05)。结论参芍口服液预处理对大鼠心肌缺血再灌注有保护作用,其作用机制可能与降低MMP-2、升高TIMP-2的表达有关。

参芍口服液对急性心肌梗死大鼠的心肌保护作用分析

目的探究参芍口服液对急性心肌梗死(AMI)大鼠的心肌保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及低、中、高剂量(3.2、6.4、12.8 ml/d)参芍口服液组和阳性对照组[贝那普利10 mg/(kg·d)],除假手术组外,其余大鼠均手术结扎冠状动脉制备AMI模型,假手术组仅开胸未结扎,药物干预4周后,行超声心动图评估各组大鼠左心室功能和结构,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,比较各组大鼠血清肌酸激酶(CK)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑钠肽(BNP)水平,ELISA检测外周血白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,行免疫组织化学染色和Western blot实验检测各组大鼠心肌组织Wnt10b、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,中、高剂量参芍口服液组和阳性对照组大鼠心肌组织病理损伤有不同程度改善,左心室射血分数、左心室短轴缩短率升高,左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径、左心室舒张末期容积和左心室收缩末期容积及血清CK、CK-MB、BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低,心肌组织Wnt10b、β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论参芍口服液可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,改善AMI大鼠心室重构和心功能,减轻炎症反应,促进心肌组织修复与再生,对心肌发挥保护作用。

参芍口服液对2型糖尿病心肌病大鼠心肌Toll样受体4表达的影响

目的通过观察参芍口服液对2型糖尿病大鼠心肌组织Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其保护机制。方法将30只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。模型组和治疗组采用高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素(25mg/kg)腹腔注射的方法制作2型糖尿病心肌病大鼠模型,治疗组给予250mg·kg-1·d-1参芍口服液干预。采用左心室插管对大鼠心功能进行评估,免疫组织化学法和免疫印迹法检测心肌组织的TLR4和NF-κB蛋白表达。结果心功能检测中,模型组较对照组,左室舒张末期压(LVEDP)明显升高,左室收缩压(LVSP)和左室压力上升或下降最大速度(±dP/dtmax)降低(P<0.05)。治疗组较模型组LVEDP降低,LVSP和±dP/dtmax升高(P<0.05);免疫组织化学和免疫印迹显示,模型组较对照组TLR4和NF-κB蛋白表达量明显升高(P<0.05),治疗组较模型组TLR4和NF-κB蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论参芍口服液能有效改善2型糖尿病心肌病大鼠的心功能,其心肌保护作用可能与调控TLR4及其下游炎性因子水平有关。

参芍口服液对2型糖尿病大鼠肝脏超微结构及氧化应激的影响

(1)目的探讨参芍口服液对2型糖尿病大鼠肝脏超微结构及氧化应激的影响。(2)方法通过高脂饲料及小剂量腹腔注射链佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。造模成功后,参芍组及正常+参芍组给予参芍口服液8mL/(kg·d)灌胃,对照组及模型组给予等量生理盐水灌胃,均干预8周。分别于造模前、药物干预前、8周实验末测大鼠空腹血糖及腹主动脉取血测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)变化及肝脏组织测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)的含量。HE染色观察肝脏形态,透射电镜观察肝细胞超微结构的改变。(3)结果参芍口服液能减轻肝脏损伤程度,使肝索排列整齐,脂肪变性减少,保护肝脏超微结构,脂滴减少,线粒体排列规整,线粒体嵴清晰可见;MDA含量减少、SOD、GSH-Px、CAT含量增加。(4)结论参芍口服液能抑制2型糖尿病大鼠肝脏氧化应激反应,改善肝脏超微结构,对肝脏具有保护作用。

参芍口服液抑制NLRP3炎症小体改善创伤性脑损伤小鼠炎性反应实验研究

目的:探讨参芍口服液对创伤性脑损伤后小鼠神经炎性反应的影响及作用机制。方法:54只C57小鼠随机等分为假手术组(Sham组)、创伤性脑损伤组(TBI组)和参芍口服液组(SS组),采用限制性皮层损伤的方法对TBI组和SS组小鼠进行损伤手术,造模6 h后,SS组给予5 ml参芍口服液灌胃干预,Sham组和TBI组用等量0.9%氯化钠溶液灌胃,持续7 d。采用mNSS评分对各组小鼠的神经功能进行评估,TUNEL法检测细胞的凋亡情况,酶联免疫吸附实验测定脑组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-18的含量,用蛋白印迹法检测脑组织内NRLP3、Caspase-1的表达水平。结果:伤后1、3、7 d,对比Sham组,TBI组的mNSS评分明显升高(均P<0.05),皮层损伤区神经元凋亡率明显增加(均P<0.05);SS组的mNSS评分明显低于TBI组(P<0.05),皮层损伤区神经元凋亡率也较TBI组明显减少(P<0.05);相比Sham组,伤后7 d,TBI组的炎症因子(IL-18、TNF-α、IL-1β)的表达均上升(均P<0.05),而SS组的炎症因子的表达量较TBI组明显下降(均P<0.05);蛋白印迹法检测小鼠造模7 d后脑组织中NLRP3、Caspase-1含量,结果显示TBI组的NLRP3、Caspase-1含量明显高于Sham组,SS组的NLRP3、Caspase-1含量明显低于TBI组。结论:参芍口服液对小鼠的创伤性脑损伤有治疗作用,能够改善神经功能,减少神经元死亡比例,通过抑制NLRP3炎症小体的表达实现减轻炎性反应的效果。

多波长RP-HPLC法同时测定参芍口服液中5种成分的含量

目的：建立同时测定参芍口服液中丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Eclipse XDB C18,流动相为0.5%磷酸水溶液-甲醇-乙腈（梯度洗脱）,流速为1.0 ml/min,检测波长为280、230、320nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果：在此色谱条件下,5种成分可完全分离,丹参素、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B的质量浓度分别在24~384、1.25~20、40.5~648、1.5~24、145~2 320μg/ml范围内与各自峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9、0.999 9、0.999 8、0.999 9、0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2.2%;平均加样回收率分别为100.7%、100.0%、99.6%、100.3%、99.3%,RSD分别为1.23%、2.19%、0.87%、1.11%、2.46%（n=9）。结论：该方法专属性强,精密度、准确度好,可用于测定参芍口服液中5种成分的含量。

参芍口服液对2型糖尿病大鼠肝损害的干预作用

目的观察参芍口服液对2型糖尿病大鼠肝损害的干预作用。方法将30只大鼠随机分为对照组(C组)、模型组(M组)和治疗组(T组)。用链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型,12周后处死大鼠取血和肝组织。全自动生化法检测GLU、ALT、AST、TC、TG、LDL、CRP;免疫组化观察IL-6表达的变化。HE染色观察肝组织病理形态学改变;电镜观察各组大鼠肝脏的超微结构改变。结果与对照组比较,模型组GLU、ALT、AST、TC、TG、LDL、CRP显著增高(P<0.05);免疫组化显示:IL-6表达含量明显升高;HE显示:肝细胞弥漫性肿胀,水样变性,窦间隙狭窄;透射电镜可见肝细胞结构不清晰,胞质疏松,线粒体肿大,模糊,嵴断裂,粗面内质网破裂、排列紊乱,脂滴增多。经参芍口服液干预后,大鼠肝功能、血脂,肝组织形态学,肝脏超微结构均明显好转。结论参芍口服液对糖尿病肝损害大鼠有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制炎症反应实现的。