Wnt/β-catenin通路在肾衰康灌肠液抑制HK-2细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的观察肾衰康灌肠液(大黄、丹参、红花、黄芪)含药血清对缺氧/复氧损伤人肾小管上皮细胞的保护作用,并探讨其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法将新西兰大白兔随机分为对照组、肾衰康高剂量组、PBS组,分别予相应药物灌肠3 d后取血清。以对照组、PBS组、肾衰康高剂量组、肾衰康中剂量组、肾衰康低剂量组兔血清分别处理缺氧/复氧HK-2细胞。以ROS荧光探针检测H/R损伤发生。CFSE/PI法、流式细胞分析联合Annexin V-FITC/PI法分析细胞的损伤/凋亡情况。荧光定量PCR技术考察药物对Wnt4、β-catenin mRNA表达的影响。结果与造模前相比,造模后细胞内ROS表达的荧光强度明显增高。CFSE/PI双染显示,与对照组和PBS组相比,肾衰康高、中、低剂量组细胞死亡率明显降低,且以肾衰康高剂量组死亡率最低。Annexin V-FITC/PI联合流式细胞术检测显示,与对照组[12 h,(45.6±2.2)%]和PBS组[12 h,(41.6±0.7)%]相比,肾衰康低、中、高剂量组均有明显的凋亡/死亡抑制[12 h,低剂量组(14.8±0.3)%,中剂量组(10.3±0.6)%,高剂量组(12.9±0.9)%]。荧光定量PCR结果显示,肾衰康灌肠液含药血清对Wnt4 mRNA表达有显著上调作用,对β-caterin mRNA表达有显著双向调节作用(P<0.05)。结论肾衰康灌肠液含药血清对缺氧/复氧损伤HK-2细胞的凋亡/死亡有明显的抑制效果,其作用可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。