基于代谢组学的肾苏Ⅱ干预阿霉素肾病小鼠作用机制研究

[目的]研究肾苏Ⅱ干预阿霉素肾病小鼠的保护作用及对血浆代谢的影响,初步探讨其干预的代谢途径和可能机制。[方法]通过尾静脉注射阿霉素建立小鼠肾病模型,连续给药14 d后,观察各组小鼠肾脏病理形态学变化;应用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF/MS)技术对血浆进行代谢组学研究,筛选并鉴定与肾损伤相关的生物标记物并富集代谢通路,探讨肾苏Ⅱ可能的作用机制。[结果]肾苏Ⅱ可明显改善注射阿霉素导致肾病小鼠肾组织病理变化;代谢组学分析共筛选到14个潜在生物标志物,涉及氨基酸代谢、胆汁酸代谢、脂质代谢、脂肪酸代谢及嘌呤代谢等过程。[结论]肾苏Ⅱ能够有效改善阿霉素肾病小鼠损伤,可能通过影响氨基酸代谢、胆汁酸代谢及嘌呤代谢等相关通路发挥作用。

肾苏Ⅱ号方对局灶节段性肾小球硬化大鼠TGF-β_1及PAI-1表达的影响

目的观察中药复方肾苏Ⅱ号方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾功能、肾小球细胞外基质(ECM)积聚、转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响。方法阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS型阿霉素肾病模型,依体重随机分为模型组、西药组及中药组,每组各12只,另设空白对照组(对照组,12只)。西药组予灌胃贝那普利(0.33mg/100g),中药组予肾苏Ⅱ号方(3.5g/100g)灌胃,对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。实验过程中死亡6只大鼠,其中,对照组1只,模型组2只,西药组1只,中药组2只。检测24h尿蛋白定量(24hU,邻苯三酚红法)、血尿素氮(BUN,尿素酶法)、血肌酐(SCr,肌酐酶法)、血清总蛋白(TP,双缩脲比色终点法)、血清白蛋白(ALB,溴甲酚绿比色测定法);观察肾小球病理形态学改变;半定量分析肾小球纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)全肾平均硬化指数(GSI)、ECM与肾小球面积比(ECM/GA)及TGF-β1、PAI-1表达。结果治疗第12周末,中药组FSGS大鼠生化指标24hU[(38.55±2.49)mg]、BUN[(10.87±1.78)mmol/L]、SCr[(51.70±1.50)μmol/L]、TP[(68.28±2.31)g/L]、ALB[(42.43±1.95)g/L]改善;病理形态学观察肾小球硬化进展显著延缓;半定量分析GSI[(1.68±0.33)级]、ECM/GA[(7.11±2.46)%]、FN[(4.15±1.55)%]、ColⅣ[(1.47±0.48)%]、TGF-β1[(19.70±5.05)%]、PAI-1[(22.57±10.65)%],与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论肾苏Ⅱ号方可能通过抑制TGF-β1、PAI-1表达,阻抑基质过度积聚,进而延缓FSGS大鼠肾小球硬化进展。

肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化大鼠Notch-P53通路及足细胞凋亡的影响

目的观察肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞数量、Notch-P53凋亡通路标志蛋白的影响。方法采用左肾切除加阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体重随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组,每组12只,另设对照组(12只)。贝那普利组予贝那普利[9.25 mg/(kg·d)]、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方[9.71 g/(kg·d)],对照组、模型组予等量生理盐水,均连续灌胃12周。检测大鼠肌酐(serum creatinine,SCr)、血清尿素氮(blood urine nitrogen,BUN)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、载脂蛋白A1(apolipoprotein-A1,Apo-A1)水平。观察肾小球硬化改变、足细胞数量分析、Notch-P53凋亡通路关键位点的Notch1、Hes-1、P53及Bad蛋白表达。结果与模型组比较,贝那普利组和肾苏Ⅱ方组治疗4、8、12周,HDL明显上升(P<0.05);治疗8、12周,SCr明显下降(P<0.05)、Apo-A1明显上升(P<0.05);治疗12周,BUN、肾小球硬化指数、肾小球系膜基质相对面积、Notch1、Hes-1、P53、Bad蛋白明显减少(P<0.05),足细胞数量明显增加(P<0.05)。结论肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-P53通路,阻抑足细胞凋亡进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。

肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化大鼠Notch-PI3K/PKB通路串话及足细胞EMT的影响

目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组。另设空白对照组,每组各12只。贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测大鼠24h尿微量蛋白(24h Upro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)。观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达。结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24h Upro、TP、ALB均明显改善(P<0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P<0.05);Notch1、Hes-1、PTEN m RNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。

复方肾苏Ⅱ的HPLC指纹图谱及化学成分鉴定

目的：建立复方肾苏Ⅱ（肾苏Ⅱ）HPLC指纹图谱并对其化学成分进行分析,为肾苏Ⅱ质量评价与药效物质基础研究提供依据。方法：采用Waters Symmetry C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）进行检测,以乙腈-水（0.1%H3PO4）为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^（-1）,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μL。测定10批肾苏Ⅱ样品,利用中药色谱相似度评价系统建立肾苏ⅡHPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认;应用UPLC-ESI-MS/MS技术对肾苏Ⅱ样品中的化学成分进行鉴别。结果：建立了肾苏Ⅱ成分指纹图谱共有模式,显示15个共有峰,各峰分离度良好,各批次间共有峰相对保留时间RSD均〈1.3%,样品间相似度均〉0.9,指认黄芩苷为特征峰。鉴定出肾苏Ⅱ样品中26个化学成分,分别为阿魏酸,汉黄芩素,毛蕊异黄酮,千层纸素,白杨素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷,5,7-二羟基-2＇-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷,5,7,2＇,5＇-四羟基-8,6＇-二甲氧基黄酮,白杨素-6-C-葡萄糖-8-C-阿拉伯糖苷,韧黄芩素Ⅱ,三羟基-单甲氧基黄酮,三羟基-二甲氧基黄酮,芒柄花素,5,7,8-三羟基黄酮,黄芩素,去甲汉黄芩素,黄芩苷,黄芩苷异构体,5,7,8-三羟基-6-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷,白杨素,千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷,汉黄芩苷,汉黄芪素,二羟基-二甲氧基黄酮,熊竹素,三羟基-三甲氧基黄酮,黄芩黄酮Ⅱ。结论：该指纹图谱具有良好的精密度、重复性、稳定性,各共有峰间分离度高,可用于肾苏Ⅱ的质量评价;该研究为肾苏Ⅱ物质基础的研究提供基础。

肾苏Ⅱ对系膜增生性肾炎模型大鼠肾病变及白细胞介素-6的影响

目的探讨中药复方肾苏Ⅱ对系膜增生性肾炎(MsPGN)模型大鼠肾组织的作用及机制。方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药组,每组10只。其中,除正常组外,其余大鼠采用胸腺细胞抗体注射法诱发MsPGN模型。中药组于造模的同时灌服治疗药物肾苏Ⅱ(3.5g/100g),西药组灌服贝那普利(0.33mg/100g),共干预6周。于治疗开始及治疗第3、6周末,取血观察各组大鼠24h尿蛋白(TP/24h)、尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)变化;治疗第6周末,切取肾脏,光镜观察系膜细胞、基质增殖,检测白细胞介素6(IL-6)表达。结果中药组可显著减少MsPGN大鼠尿蛋白排泄、降低BUN及SCr含量,与西药组比较差异有统计学意义(P<0.05);明显抑制系膜细胞及基质增殖与西药组比较差异无统计学意义(P>0.05);显著下调肾组织IL-6表达,与西药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾苏Ⅱ可改善MsPGN模型大鼠肾功能,减轻病理损害,阻抑系膜细胞与基质增殖及肾组织IL-6高表达,延缓病变进展。