肾炎防衰液对硫酸苯酯诱导小鼠肾足细胞损伤及自噬作用机制研究

[目的]观察肾炎防衰液对硫酸苯酯(PS)诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨其对足细胞损伤及自噬的干预作用。[方法]选取SD大鼠,分别灌胃肾炎防衰液及缬沙坦水溶液,制备低、中、高浓度含药血清及西药对照血清。体外培养足细胞,分为空白对照组(Con)组、PS刺激(PS)组、肾炎防衰液低、中、高浓度治疗组(SYFS-L、SYFS-M、SYFS-H)、缬沙坦(XST)组。细胞活力检测(CCK-8)法筛选最合适的PS干预浓度及含药血清给药浓度,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)检测Podocin、CD2AP、BNIP3、p62、LC3Ⅱ/ⅠmRNA和蛋白表达。[结果]CCK-8法检测细胞增殖率确定了190μmol/L浓度的PS处理足细胞24 h作为本实验的造模方法。与Con组比较,PS组CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白及mRNA表达显著下调,p62蛋白及mRNA表达显著上调;与PS组比较,肾炎防衰液给药组可明显上调CD2AP、Podocin、BNIP3、LC3 mRNA和蛋白的表达,降低p62的表达,且优于缬沙坦组。[结论]PS可能通过抑制足细胞线粒体自噬造成足细胞损伤,而肾炎防衰液通过上调LC3、BNIP3,下调p62蛋白表达,增强细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善足细胞损伤。

肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠氧化应激的干预作用

目的:探讨肾炎防衰液对糖尿病肾病大鼠氧化应激的干预作用。方法:采用单侧肾切除+高脂饲养喂养+链脲佐菌素(STZ)"三联"造模方法构建糖尿病肾病大鼠模型,造模成功后予肾炎防衰液、厄贝沙坦干预8周,测定24 h尿蛋白定量及血液生化指标,肾脏行PAS、MASSON染色,检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),肾组织NADPH p22phoxmRNA的表达。结果:肾炎防衰液可以减少MDA产生(P<0.01),升高SOD含量(P<0.05),降低肾脏p22phoxmRNA的表达(P<0.05),减少24 h尿蛋白定量(P<0.01)及肾脏病理损伤。结论:肾炎防衰液可以减轻糖尿病肾病大鼠氧化应激反应,发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。

基于“肾络癥瘕”理论探讨肾炎防衰液治疗肾间质纤维化的药效物质基础与机制

目的:运用网络药理学与分子对接探寻肾炎防衰液治疗肾间质纤维化(RIF)的活性成分和作用机制。方法:通过TCMSP平台和BATMAN-TCM数据库筛选肾炎防衰液的活性成分及作用靶点;利用GeneCards数据库、DisGeNET平台获取RIF相关靶点;将两者的共有靶点与其对应的中药成分通过Cytoscape3.7.2软件构建“成分-靶点”网络,利用Centiscape插件筛选出重要的活性成分;通过Clue GO 2.5.4插件对共有靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,获取肾炎防衰液治疗RIF的潜在作用通路,采用Autodock和PyMol将核心成分和靶点蛋白进行分子对接及可视化处理。结果:肾炎防衰液经筛选后获得200个活性成分,76个参与治疗RIF的潜在靶点,可能通过参与糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、松弛素信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、白介素-17(IL-17)信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、脂肪细胞脂肪分解的调节、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、Toll样受体(TLRs)信号通路等途径参与RIF的治疗,分子对接结果提示肾炎防衰液的核心成分与INS、IL-6、ALB、VEGFA、TNF具有较好的亲和力。结论:肾炎防衰液的多种活性成分具改善RIF的作用,该方可能通过抑制炎症反应、调控自噬、调节糖脂代谢等途径延缓RIF的发展。