利多卡因通过SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨利多卡因(Lid)调节SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将U87细胞分为U87组、L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组、PM组、H-Lid+PM组。U87组未做任何处理,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组分别用5、10、15 mmol/L Lid处理U87细胞,PM组用1μmol/L的SHH/GLI信号通路激活剂PM处理U87细胞,H-Lid+PM组用15 mmol/L Lid和1μmol/L的PM共同处理U87细胞。CCK8检测U87细胞增殖;流式细胞术检测U87细胞凋亡;Transwell检测U87细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测SHH/GLI蛋白、凋亡蛋白表达;荷瘤小鼠模型验证Lid对U87细胞移植瘤的影响。结果与U87组相比,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组的OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积依次显著下降(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平依次显著升高(P<0.05);而PM组OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积显著升高(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平显著下降(P<0.05);PM消除了H-Lid对U87细胞恶性生物学行为的抑制作用。Lid处理后移植瘤小鼠存活数量增加,而PM处理后移植瘤小鼠存活数量减少,H-Lid+PM组与L-Lid组数量相同。结论Lid可能通过下调SHH/GLI信号通路抑制U87细胞增殖,促进细胞凋亡,进而抑制胶质瘤的进展。

扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。

肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响

目的 观察百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响及作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)和百事乐胶囊组(2.88 g/kg),每组8只。采用慢性不可预见性温和应激加单笼饲养法建立抑郁大鼠模型,于造模同时给药,连续21 d。糖水偏好实验、旷场实验评价大鼠抑郁样行为,ELISA检测大鼠血清和海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)含量,免疫荧光染色观察海马齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、BrdU/双皮质素(DCX)、BrdU/神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数,免疫荧光、Western blot检测大鼠海马组织SHH、Gli1及跨膜转导蛋白Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠糖水偏好度明显降低,水平和垂直运动次数明显减少(P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显下降(P<0.05),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显减少(P<0.01),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度及蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和百事乐胶囊组大鼠糖水偏好度明显升高,水平和垂直活动次数显著增加(P<0.05,P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显上升(P<0.05,P<0.01),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显增加(P<0.01,P<0.05),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论 百事乐胶囊可通过调控SHH/Gli1信号通路促进抑郁模型大鼠海马神经再生,进而发挥抗抑郁作用。

山姜素调节Shh/Gli1信号通路对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究

目的:探究山姜素调节Shh/Gli1信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠的神经保护作用。方法:随机选择15只大鼠作为对照组,其余大鼠构建IS模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、山姜素组(5 mg/kg)、Shh/Gli1信号通路抑制剂环巴胺组(15 mg/kg)、山姜素+环巴胺组(5 mg/kg山姜素+15 mg/kg环巴胺),每组15只,给药1次/d,连续2周,对照组和模型组给予等量生理盐水。Zea-Longa评分法评估神经功能;ELISA检测炎症因子水平;称量脑组织质量,计算脑组织含水量;TTC染色测定脑梗死体积;HE染色观察神经细胞损伤;TUNEL染色检测神经细胞凋亡;qRT-PCR、Western blot检测Shh和Gli1 mRNA和蛋白表达。结果:对照组海马组织无任何异常现象,模型组大鼠海马组织结构异常,细胞排列紊乱,神经细胞出现核固缩现象,模型组较对照组细胞损伤率、Zea-Longa评分、梗死体积、IL-1β、IL-6、TNF-α、脑组织含水量、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,山姜素组细胞排列较为整齐,神经细胞核固缩现象改善,细胞损伤率、Zea-Longa评分、梗死体积、IL-1β、IL-6、TNF-α、脑组织含水量、细胞凋亡率均显著降低(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),环巴胺组以上指标趋势相反,环巴胺逆转了山姜素对IS大鼠的神经保护作用。结论:山姜素可能通过激活Shh/Gli1信号通路对IS大鼠起神经保护作用。

吴茱萸碱调节Shh/Gli1信号通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的探讨吴茱萸碱(Evo)对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响及其作用机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、Evo低剂量组、Evo中剂量组、Evo高剂量组、激活剂(Shh/Gli1信号通路激活剂Purmorphamine)+Evo高剂量组,每组10只。构建大鼠KOA模型,并对各组给予相应药物干预。对各组大鼠进行行为学观察及Lequesne MG评分,苏木素伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察大鼠软骨组织病理变化及Mankin评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测软骨细胞凋亡,免疫组织化学检测Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)、基质金属蛋白酶13(MMP13)蛋白表达,Western blotting检测Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠出现活动障碍、软骨组织损伤严重,Lequesne MG评分、Mankin评分、IL-1β、IL-18、TNF-α水平、软骨细胞凋亡率、MMP13蛋白表达及Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白水平显著升高,CⅡ蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,Evo低、中、高剂量组大鼠活动障碍、软骨组织受损减轻,Lequesne MG评分、Mankin评分、IL-1β、IL-18、TNF-α水平、软骨细胞凋亡率、MMP13蛋白表达及Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白水平显著下降,CⅡ蛋白表达升高(P<0.05);Shh/Gli1信号通路激活剂逆转Evo高剂量对KOA大鼠软骨损伤的改善作用。结论Evo可能通过抑制Shh/Gli1信号通路减轻KOA大鼠炎症反应和软骨细胞凋亡,改善软骨损伤。

隐丹参酮调节Shh/Gli1信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨隐丹参酮(CRY)调节Shh/Gli1信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响。方法:通过开胸及结扎左前降支建立AMI大鼠模型,并以仅开胸不结扎的大鼠为对照组,将AMI大鼠随机分为AMI组、不同剂量(5、15、45 mg/kg)的CRY组、CRY+环巴胺[Cyclopamine(20μg/kg)]组,各组按照相应剂量的药物进行干预,结束后检测左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVESD);ELISA检测心肌梗死指标-肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-pro-BNP)水平;TTC、HE、免疫组织化学、TUNEL染色法分别检测大鼠心肌梗死、组织病理学、血小板内皮细胞粘附分子(CD31)变化及细胞凋亡变化;Western blot检测心肌组织Shh/Gli1相关蛋白表达。结果:与对照组比较,AMI组LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、CD31表达、心肌细胞凋亡明显增加,LVEF、心肌组织中Shh、Gli1蛋白表达则降低(均P<0.05);与AMI组比较,加入不同剂量的CRY则降低了LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡,提高了LVEF、心肌组织中CD31表达、Shh、Gli1蛋白表达,组间比较存在统计学差异(均P<0.05);与45 mg/kg CRY组比较,45 mg/kg CRY联合Cyclopamine则升高了LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡,降低了LVEF、心肌组织中CD31表达及Shh、Gli1蛋白表达(均P<0.05)。结论:CRY通过调节Shh/Gli1信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。

基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸抑制结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的作用机制

目的基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸(OA)对结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的影响。方法选择SPF级6周龄雄性BALB/c裸鼠12只,采用皮下注射HT-29细胞构建结直肠癌移植瘤小鼠模型,随机分为对照组与干预组各6只。干预组按12.5 mg/(kg·d)予腹腔注射OA溶液,对照组按500μL/(kg·d)予腹腔注射生理盐水,给药6 d停止1 d,共干预16 d。干预期间每2 d测量小鼠体质量和肿瘤体积,干预结束后测量肿瘤重量;免疫组化法检测肿瘤组织增殖标志物Ki67、细胞周期相关蛋白[细胞周期素依赖性激酶抑制因子(p21)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)]、细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、磷酸化-B淋巴细胞瘤-2死亡拮抗蛋白(p-Bad)、死亡因子(Fas)、死亡因子配体(FasL)]、炎症相关蛋白[环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)]以及SHH/GLI-1信号通路相关蛋白[音猬因子(SHH)、补丁受体(PTCH)、光滑蛋白(SMO)、胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI-1)]的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况;Bio plex检测2组小鼠血清炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果2组不同时间段体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,干预组干预7、9、11、13、15、17、19 d小鼠肿瘤体积均明显减小(P<0.05),干预后肿瘤重量明显降低(P<0.05)。与对照组比较,干预组肿瘤组织Ki67、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、COX-2、iNOS、SHH、PTCH、SMO、GLI-1和血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达均明显降低(P<0.05),p21、Bax、p-Bad、Fas、FasL表达均明显升高(P<0.05);凋亡细胞比例明显增加(P<0.05)。结论OA可以抑制结直肠癌小鼠移植瘤的生长和炎症反应,可能与调控SHH/GLI-1信号通路相关。

针刺调节Shh/Ptch1信号通路对帕金森认知障碍模型大鼠的神经保护作用研究

目的:探讨针刺治疗是否可通过调节Shh/Ptch1信号通路进而改善帕金森(PD)大鼠认知功能。方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、针刺组、针刺+环巴胺(Shh抑制剂)组、西药组(盐酸多奈哌齐)及针刺+西药组。采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力;ELISA法检测大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10及IL-1β)水平;商品化试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察大鼠海马组织形态变化;蛋白质印迹法检测大鼠海马组织活化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase-3)、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、音猬因子(Shh)及补缀同源物1(Ptch1)蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠神经元有明显损伤,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著升高,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,针刺组、西药组和针刺+西药组大鼠神经元损伤显著减轻,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著降低,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与针刺组相比,针刺+环巴胺组大鼠神经元损伤显著加重,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著升高,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);针刺组和西药组各检测指标差异均无统计学意义(P>0.05);与针刺组和西药组相比,针刺西药组大鼠神经元损伤显著减轻,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著降低,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:针刺治疗可降低PD认知障碍大鼠炎症反应和氧化应激,减轻神经元损伤,进而改善其认知功能,可能是通过激活Shh/Ptch1信号通路实现的。

丹参酮Ⅱ_(A)通过调控Hedgehog/Gli1信号通路对乳腺癌 细胞迁移、侵袭的机制研究

目的探究丹参酮Ⅱ_(A)(TanⅡ_(A))对乳腺癌细胞迁移、侵袭的机制。方法使用不同浓度的TanⅡ_(A)对乳腺癌细胞系MCF-7进行治疗,MTT法检测细胞活力,流式细胞偶数检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力。使用Hedgehog激活剂SAG激活Hedgehog/Gli1通路,使用qRT-PCR及免疫印迹检测SMO、Gli1 mRNA及蛋白表达水平。通过免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1表达水平。结果50μmol·L^(-1) TanⅡ_(A)可以抑制MCF-7细胞活力,MDAMB-231细胞活力由(98.12±3.85)%下降至(69.32±3.68)%,MCF-7细胞活力由(99.32±3.65)%下降至(49.65±3.74)%。添加SAG后MCF-7细胞活力上升至(71.20±5.00)%(P<0.05)。SAG抑制MCF-7细胞凋亡,细胞凋亡率从(20.50±2.00)%下降至(12.00±1.00)%。SAG使得MCF-7细胞迁移数量从(52.00±5.00)上升至(76.00±5.00)(P<0.05),侵袭数量从(41.00±3.00)上升至(75.00±5.00)(P<0.05)。与Control组相比,TanⅡ_(A)组Beclin-1蛋白水平由(0.54±0.05)上升至(1.20±0.10),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平由(0.60±0.06)上升至(1.80±0.12)(P<0.05),而添加SAG后Beclin-1蛋白水平下降至(0.70±0.07)(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平下降至(0.75±0.04)(P<0.05)。结论TanⅡ_(A)降低乳腺癌细胞活力、迁移及侵袭能力,抑制Hedgehog/Gli1信号通路活性,且促进乳腺癌细胞自噬。

Shh信号通路在儿童急性淋巴细胞白血病中的活化及临床意义研究

目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达及意义。方法 采取RT-PCR法检测107例ALL患儿化疗前骨髓细胞Shh、Ptch1、Smo和Gli-1基因的表达情况,结合患儿危险度分级,探讨以上4个基因与疾病危险程度及早期疗效相关性,并以33例骨髓良性改变患儿作为对照组。结果 Shh、Smo和Gli-1基因在ALL初治组中的表达高于水平显著高于对照组(P<0.05),Ptch1在ALL初治组中的表达水平显著低于对照组(P<0.05);Smo和Gli-1基因表达水平与疾病危险程度正相关,且与早期治疗反应负相关;Shh和Ptch1基因表达水平与疾病危险程度及早期治疗反应均无相关性。结论 急性淋巴细胞白血病患儿Shh信号通路存在异常活化,靶向Shh信号通路的治疗有望成为新的方向。

滋阴明目丸通过激活音猬因子信号通路对小鼠视网膜色素变性的改善作用

目的探究滋阴明目丸对小鼠视网膜色素变性(RP)的改善作用及其可能机制。方法将RP转基因小鼠(rd10)随机分为模型组、乐盯组(0.15 g/kg)和滋阴明目丸低、高剂量组(4.50、9.00 g/kg),以C57BL/6小鼠为正常组,每组12只。HE染色检测小鼠视网膜组织病理改变,视网膜电图(ERG)检测视功能,光学相干断层扫描(OCT)观察小鼠眼底表现并检测视网膜厚度,激光散斑血流技术检测小鼠视网膜血液灌注量,数字PCR检测Shh信号通路信号分子Shh、Ptc、Smo、Gli1、N-myc、Cyclin mRNA表达,免疫荧光染色检测Shh、Ptc、Smo、Gli1、N-myc、Cyclin蛋白表达。结果与正常组比较,模型小鼠眼底和视网膜组织均发生病理性改变,ERG a波和b波振幅降低(P<0.01),视网膜厚度减少(P<0.01),视网膜血液灌注量降低(P<0.01),视网膜Shh、Ptc、Smo、Gli1、N-myc、Cyclin mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目丸各剂量组和乐盯组小鼠眼底和视网膜组织病理性改变均得到改善,视网膜厚度增加(P<0.01),视网膜血流量升高(P<0.01),ERG a波和b波振幅增加(P<0.01),视网膜Shh、Ptc、Smo、Gli1、N-myc、Cyclin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01)。结论滋阴明目丸可增加视网膜厚度和血流量,改善眼底病理改变和视功能,呈现出较好的延缓RP的作用,其机制可能与激活Shh信号通路有关。

三草尿毒灵通过调控Shh/Gli信号通路表达减轻肾脏纤维化的实验研究

目的:探究三草尿毒灵抑制肾脏纤维化的作用与机制。方法:选取24只雄性BALB/c小鼠,随机分为假手术组、单侧肾缺血再灌注组、三草尿毒灵组以及环巴胺组,每组6只。制备左侧单侧肾缺血再灌注损伤模型后第3天起,三草尿毒灵组每天给予三草尿毒灵汤剂(9 g/kg)灌胃,环巴胺组每天给予Shh/Gli信号小分子抑制剂环巴胺(5 mg/kg)腹腔注射。术后第10天切除小鼠右侧肾脏,第11天处死小鼠,获取小鼠血清和肾脏进行肾功能检测、免疫组化、Western Blot和qRT-PCR分析。结果:与假手术组相比,单侧肾缺血再灌注组血肌酐和尿素氮水平明显升高(P<0.05);与单侧肾缺血再灌注组比较,三草尿毒灵组、环巴胺组血肌酐和尿素氮水平明显降低(P<0.05);三草尿毒灵组与环巴胺组血肌酐和尿素氮水平比较无显著差异(P>0.05)。单侧肾缺血再灌注组、三草尿毒灵组、环巴胺组肾脏间质纤维化面积均大于假手术组(P<0.05);三草尿毒灵组、环巴胺组肾脏间质纤维化面积均小于单侧肾缺血再灌注组(P<0.05);三草尿毒灵组与环巴胺组肾脏间质纤维化面积比较无显著差异(P>0.05)。单侧肾缺血再灌注小鼠的肾组织中,无论是mRNA水平还是蛋白水平,FN、COL-Ⅲ和α-SMA表达水平均较假手术组小鼠显著升高(P<0.05);三草尿毒灵组和环巴胺组mRNA、蛋白水平,FN、COL-Ⅲ和α-SMA表达水平均低于单侧肾缺血再灌注组(P<0.05);三草尿毒灵组、环巴胺组mRNA、蛋白及FN、COL-Ⅲ、α-SMA表达水平比较无显著差异(P>0.05)。qRT-PCR检测结果显示,单侧肾缺血再灌注组肾组织Gli 1 mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.05);三草尿毒灵组和环巴胺组Gli 1 mRNA水平显著低于单侧肾缺血再灌注组(P<0.05);同样,Western blot检测显示三草尿毒灵组和环巴胺组Gli 1蛋白表达低于单侧肾缺血再灌注组(P<0.05)。三草尿毒灵组和环巴胺组Gli 1蛋白表达水平比较无显著差异(P>0.05)。结论:三草尿毒灵可通过调控Shh/Gli信号通路的表达,减轻肾脏纤维化。

LncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活SHH信号通路促进结直肠癌的发生发展

目的:探究miR-126与lncRNA HOTAIR的靶向关系及其对SHH信号通路的调节作用,并研究结直肠癌发生发展的分子机制。方法:收集2018年2月至2019年2月于河北省沧州市人民医院进行手术治疗的患者的正常结直肠、结直肠息肉、不典型增生组织、癌前病变、结直肠癌组织及其癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化分析HOTAIR、miR-126及SHH表达情况,starBase数据库、荧光素酶实验、RNA免疫共沉淀及RT-qPCR验证miR-126与HOTAIR、SHH的作用关系,MTT实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力。结果:结直肠癌组织中的HOTAIR和SHH、Glil、Smo蛋白表达上调,miR-126表达下调(P<0.05)。HOTAIR靶向抑制miR-126表达,miR-126靶向抑制SHH表达。与sh-NC组相比,sh-HOTAIR组SW480、HCT116细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力下降,miR-126 inhibitor组增加(P<0.05);sh-HOTAIR+miR-126 inhibitor组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著高于sh-HOTAIR组,低于miR-126 inhibitor组(P<0.05);miR-126 inhibitor+sh-SHH组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著低于miR-126 inhibitor组(P<0.05)。结论:HOTAIR靶向抑制miR-126表达,从而促进结直肠癌的发生发展,其机制可能与激活SHH信号通路的表达有关。

Shh信号通路变化对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的影响

目的:探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)及平滑激动剂(smoothened agonist,SAG)干预下小鼠胚胎腭突间充质细胞Shh信号通路改变后,小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬状态的变化。方法:体外培养胚胎14.5 d的C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞,根据干预方式分为4组:对照组、地塞米松组(DEX组)、地塞米松+SAG组(DEX+SAG组)、单独SAG干预组(SAG组)。通过透射电镜观察各组细胞自噬体或自噬溶酶体的数量,Western blot检测各组Shh、Ptch1、Smo、Gli3A/R、Cyclin D1及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ和P62、Beclin-1的表达情况。结果:电镜结果显示,对照组和DEX组中自噬体/自噬溶酶体的数量无明显差异,而SAG干预后可观察到大量自噬体/自噬溶酶体。Western blot结果显示,与对照组相比,P62、Ptch1、Smo、Gli3A/R、CyclinD1在DEX组中明显降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达无明显变化(P>0.05);DEX+SAG组及SAG组中Ptch1、Smo、Gli3A/R、CyclinD1的表达与DEX组相比明显升高(P<0.05),Shh表达无明显差异(P>0.05),Beclin1表达明显升高(P<0.05),P62表达明显降低(P<0.05);与SAG组相比,DEX+SAG组中Smo、Gli3A/R、Ptch1、CyclinD1表达明显降低(P<0.05),Shh表达无明显差异(P>0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1明显升高(P<0.05),P62表达明显降低(P<0.05)。结论:DEX可抑制小鼠胚胎腭突间充质细胞的Shh信号通路,激活Shh信号通路,诱发小鼠胚胎腭突间充质细胞产生自噬且Shh通路抑制后再激活,细胞自噬更加明显。

Shh信号通路对快速老化小鼠肾脏衰老的影响

目的探究Shh信号通路的异常激活对肾脏纤维化的影响。方法用10月龄快速老化(SAMP)8小鼠与同龄抗快速老化(SAMR)1小鼠进行比较,采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色方法观察肾小球、肾小管间质病理形态改变和纤维化程度;免疫荧光法检测Shh、平滑蛋白(Smo)、胶质瘤相关癌基因同源物(Gli1)蛋白的表达。结果与SAMR1小鼠相比,SAMP8小鼠肾脏可见肾小球及小管间质纤维化明显,Shh、Smo、Gli1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论衰老肾脏纤维化的程度可能与Shh信号通路的异常活化密切相关。

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

研究Sonic Hedgehog信号通路(SHH)是否参与转录因子叉头框Q1基因(FOXQ1)引起胃癌细胞凋亡。观察癌旁组织及癌灶周围淋巴结转移瘤对该信号通路的影响并分析其机制。方法 采用qRT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),qRT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。通过对以上指标进行比较分析,探讨了不同胃癌细胞间以及同一胃癌细胞系内两种癌细胞之间是否存在差异。结果 FOXQ1在胃粘膜上皮细胞GES-1中的表达明显低于胃癌细胞(P<0.05),FOXQ1在胃癌SGC-7901细胞中的表达最高,可作为后续实验研究的对象。结论 胃癌细胞内FOXQ1基因高度表达;SHH信号通路与FOXQ1基因有关,其诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡是通过上调Bax及Cleaved Caspase3等蛋白的表达而实现。

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001。结论胃癌发生过程中的Sonichedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。

SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制

目的:探讨激活SHH信号通路对子痫前期(PE)患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:将HTR8/SVneo细胞分为正常对照组、缺氧/复氧(H/R)处理组和purmorphamine+H/R处理组。Western blotting法检测PE胎盘组织和正常妊娠晚期胎盘组织及各组HTR8/SVneo细胞中SHH信号通路相关蛋白SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平,流式细胞术(FCM)检测各组HTR8/SVneo细胞的凋亡率,Transwell小室法检测各组HTR8/SVneo细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:PE胎盘组织HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平均明显低于正常妊娠晚期胎盘组织(P<0.05);H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.05);purmorphamine+H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显高于H/R处理组(P<0.05),细胞凋亡率明显低于H/R处理组(P<0.05)。结论:激活SHH信号通路可减少PE患者胎盘组织中HTR8/SVneo细胞凋亡,并通过上调MMP-2和MMP-9表达提高细胞的侵袭能力。