肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

GLIS家族锌指蛋白2(GLIS2)负调控Wnt/β-catenin通路抑制人骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的探究人类基因GLIS家族锌指蛋白2(GLIS2)对Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路调控作用,及对人骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化的影响。方法培养人BMMSC,随机分为空白组、成骨诱导组、腺病毒GLIS2基因过表达(ad-GLIS2)组、ad-GLIS2阴性对照、GLIS2基因敲低(si-GLIS2)组、si-GLIS2阴性对照(si-NC)组。反转录PCR检测GLIS2 mRNA表达判定转染情况,对硝基苯磷酸苯二钠(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色法检测钙化结节形成判定其成骨特性;T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)报告试剂盒检测细胞内Wnt/β-catenin通路激活情况;Western blot法检测GLIS2、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、成骨细胞特异性转录因子(osterix)表达。谷胱甘肽巯基转移酶沉降(GST-pulldown)实验验证GLIS2与β-catenin二者相互作用关系。结果与空白组相比,成骨诱导组BMMSC的ALP活性及钙化结节形成增强,Wnt/β-catenin通路活性及成骨分化相关蛋白表达升高,成骨形成能力增强,GLIS2表达降低。上调GLIS2表达后,抑制BMMSC成骨分化能力,抑制Wnt/β-catenin通路活性及成骨分化相关蛋白表达,反之下调GLIS2表达后,可促进BMMSC成骨分化能力,提高Wnt/β-catenin通路活性及成骨分化相关蛋白表达。β-catenin与GLIS2之间有相互作用关系。结论GLIS2可能通过负调控Wnt/β-catenin通路活化,抑制BMMSC成骨分化能力。

槐耳多糖调节Shh-Gli1信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响

目的研究槐耳多糖通过调节索尼克刺猬-Gli家族锌指蛋白1(Shh-Gli1)信号通路对肺癌细胞A549增殖、凋亡和血管生成的影响。方法将肺癌细胞A549分为对照组(正常培养)及低、中、高剂量实验组(2、5、10μg·mL^(-1)槐耳多糖)。给药24h后,以噻唑蓝法检测细胞增殖水平,以流式细胞术检测细胞凋亡水平,以比色法检测细胞中胱天蛋白酶3(caspase-3)酶活性,以蛋白质印迹实验检测细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、Shh及Gli1蛋白的表达水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组的细胞存活率分别为100.00%、(73.13±3.86)%、(47.97±6.12)%和(30.73±6.67)%,细胞凋亡率分别为(0.72±0.04)%、(19.21±1.27)%、(29.48±0.92)%和(46.29±2.81)%,细胞中caspase-3酶活性分别为1.00、1.33±0.08、1.71±0.09和2.28±0.14,VEGF蛋白相对表达水平分别为1.17±0.04、0.95±0.08、0.39±0.04和0.11±0.03VEGFR2蛋白相对表达水平分别为0.99±0.04、0.80±0.030.29±0.03和0.24±0.03,Gli1蛋白相对表达水平分别为1.22±0.04、1.07±0.04、0.60±0.04和0.41±0.05。对照组的上述指标与低、中、高剂量实验组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论槐耳多糖可通过调节Shh-Gli1信号通路抑制肺癌细胞的增殖及血管生成,并促进其凋亡。

Hedgehog信号通路效应蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路中效应蛋白在人前列腺癌、癌旁正常前列腺组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测51例前列腺癌和癌旁正常前列腺组织中Shh、Ptch1和Gli1的表达。结果Shh、Ptch1和Gli1在前列腺癌组织中均为高表达,Shh与Ptch1的表达呈正相关。结论在前列腺癌Hh信号通路中Shh、Ptch1和Gli1呈现高度表达状态,Gli1更能准确地反映前列腺癌细胞的增殖水平和分化程度。

Shh和Gli1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探讨hedgehog信号通路Shh蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化S-P法分别检测83例子宫颈鳞状细胞癌(SCC)、39例子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和23例正常宫颈组织(NC)中Shh和Gli1蛋白的表达。结果 Shh和Gli1蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌组织的表达呈逐渐上升趋势,3组比较有统计学差异(P<0.01)。Shh和Gli1蛋白表达率与病理分化程度和临床分期有密切关系,且有淋巴结转移的宫颈癌组织的表达率显著高于无淋巴结转移组(P均<0.01)。Shh和Gli1蛋白在宫颈癌中的表达呈正相关(P<0.01)。结论在宫颈癌中Shh蛋白高度表达上调下游转录因子Gli1蛋白,Hh信号通路的激活可能在宫颈癌的发生过程中其重要作用。

冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制

目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大载荷和最大位移;双能X线骨密度扫描仪检测股骨骨密度;HE-阿尔新蓝染色检测骨痂组织病理变化;Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Shh、Gli1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,骨折线清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组和戊酸雌二醇组骨小梁排列较密集,骨折线模糊不清,血清中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+环巴胺组骨小梁结构疏松,骨折线较清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活声波刺猬(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路促进骨质疏松大鼠骨折愈合。

组织芯片检测Hh信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

探讨Hh（Hedgehog）信号通路相关蛋白Shh、Ptch和Gli在正常前列腺组织和前列腺癌组织中的表达情况和其与临床病例转归特征的相关性。用免疫组化对48例前列腺组织Shh、Ptch和Gli1进行染色,用Image Pro Plus（IPP）图像分析软件定量测试蛋白表达阳性并分析其与临床病理转归特征的关系。发现与正常前列腺组织相比,Shh、Ptch和Gli1在前列腺癌组织中均为高表达,且3种信号因子的表达程度与前列腺癌的临床病理特征具有一定的相关性。说明Hh信号通路在前列腺癌发生发展中起到一定作用。通路成员Shh、Ptch和Glil将成为前列腺癌诊断及判断预后的一项指标。