SHH信号途径相关蛋白在结肠肿瘤组织中过度表达与STAT3活化的关系

目的:探讨SHH途径相关蛋白在结肠良恶性肿瘤中的表达情况及与STAT3活化之间的关系.方法:免疫组织化学检测20例正常结肠组织、42例结肠腺瘤以及77例结肠腺癌组织中SHH、GLI1、PTCH1、HHIP和磷酸化STAT3(P-STAT3)的表达,并评价他们之间及其与临床病理因素的关系.结果:相比正常结肠组织,SHH、GLI1、PTCH1和HHIP在结肠腺瘤及腺癌中均过度表达(95.2%,75.3%vs0.0%,P<0.05;66.7%,84.4%vs0.0%,P<0.05;23.8%,58.4%vs0.0%P<0.05;42.9%,36.4%vs25.0%),且在腺癌组织中SHH和GLI1的表达与肿瘤的病理分级有关(P<0.05).SHH及GLI1之间的表达有显著相关性(r=0.498,P<0.01),而腺癌组织中STAT3的活化(P-STAT3的表达)与SHH及GLI1的表达关系密切(r=0.525,P<0.01;r=0.637P<0.01).结论:SHH信号途径与结肠肿瘤的发生及进展有一定的关系,该途径的关键信号蛋白在结肠腺癌中的过度表达可能与STAT3信号途径的活化有协同作用.

RCS大鼠自然病程中视网膜边缘生发区细胞增殖及Shh／Ptc信号途径改变的观察

目的观察遗传性视网膜色素变性RCS大鼠病程发展中视网膜边缘生发区Shh/Ptc信号途径改变及其与该区细胞增殖能力变化的关系。方法RCS大鼠按出生后病程变化分为15、30、60、90 d 4组(免疫组化每组4只,PCR每组3只),以同龄含色素的正常大鼠(Long-Evan’s大鼠)作为正常对照。视网膜组织切片DAPI荧光染色观察外核层(outernuclear layer,ONL)厚度的变化;视网膜细胞增殖标记Ki67免疫荧光染色观察视网膜边缘生发区细胞增殖能力的变化;荧光定量PCR检测视网膜边缘生发区Shh/Ptc信号途径中关键分子Shh、Ptc1、Smo和Gli1 mRNA表达水平。结果①RCS大鼠从第15天开始,随着年龄的增加视网膜ONL逐渐变薄,第90天ONL几乎消失。②正常对照组大鼠视网膜边缘生发区Ki67阳性细胞较少,与同龄正常对照组大鼠相比,出生30、60 d组大鼠Ki67阳性细胞数均显著增多(P<0.05);大鼠各年龄组间比较,60 d组Ki67阳性细胞数明显增多(P<0.01)。③60 d组大鼠视网膜边缘生发区Shh、Ptc1、Smo和Gli1mRNA表达水平明显上调。结论出生后60 d RCS大鼠视网膜边缘生发区Shh/Ptc信号途径的激活,可能刺激了该部位细胞短期的增殖。

Cyclopamine对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其机制

目的探讨Shh信号途径的抑制剂cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化。用四甲基偶氮唑盐(MTT)分析法检测各组SK-N-SH细胞的增殖情况,流式细胞仪检测不同浓度cyclopamine作用后对细胞周期的影响,Westernblot检测药物作用前后细胞周期蛋白D1、P16和P21蛋白表达的变化。结果cyclopamine各处理组SK-N-SH细胞形态学有所不同。MTT法检测结果显示,cyclopamine对SK-N-SH细胞增殖的抑制是浓度依赖性和时间依赖性的(P<0.05)。流式细胞仪检测发现随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分比明显增加(P<0.05),而S期细胞百分比明显降低(P<0.05)。Westernblot检测结果显示,随着药物浓度的增加,SK-N-SH细胞中细胞周期蛋白D1表达逐渐降低,P16和P21表达逐渐增高(P<0.05)。结论cyclopamine抑制SK-N-SH细胞生长,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控细胞周期蛋白表达有关。cyclopamine可能成为未来治疗神经母细胞瘤的药物之一。

Shh—Gli信号激活对人神经母细胞瘤SK—N—AS细胞存活的影响及其机制

目的证实Shh—Gli信号途径在人神经母细胞瘤细胞株SK—N—AS细胞中的存在，探讨激活该途径对神经母细胞瘤的存活的影响及其作用机制。方法用免疫细胞化学和Western blot检测SK-N—AS细胞株中Ptch-1、Gli-1、Gli-2蛋白的表达，用噻唑蓝（MTT）比色法检测Shh对细胞存活率的影响，用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果Ptch-1、Gli-1和Gli-2在SK—N—AS细胞株中强阳性表达，Shh使细胞存活率提高了13．9％，该效应具有时间依赖性和剂量依赖性，流式检测显示Shh作用使细胞凋亡率较对照组比较下降31％，周期检测显示Shh应用后，G0／G1期细胞百分比，从对照组61．81％下降至47．29％，S期从16．55％上升至45．66％，以上差异有统计学意义（P〈0．05）。结论激活Shh—Gli信号可减少SK—N—AS细胞的凋亡，加速其进入增殖周期，促进神经母细胞瘤的存活。