牛源性大肠杆菌O157:H7的分离鉴定及其耐酸性比较研究

为比较大肠杆菌(Escherichia coli)O157:H7产毒菌株耐受盐酸和乳酸的差异性,首先采集309份牛粪及牛肉样,进行菌株分离鉴定,接着采用多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测分离株及其他收集菌株的4种毒力基因(eae、hly、stx1、stx2),进而对携带毒力基因的产毒菌株分别进行盐酸和乳酸应激实验。结果表明:共分离鉴定出8株大肠杆菌O157菌株,样品阳性检出率为2.59%;毒力基因检测表明,8株菌株均不携带stx1和stx2基因,其中6株菌株携带eae及hly基因;所有产毒菌株耐酸性实验结果表明,盐酸或乳酸处理2 h后20株产毒菌株存活菌数均显著下降(P<0.05),但下降程度呈现明显的菌株差异性,同一菌株对盐酸、乳酸呈现明显的耐受差异。

基于酸处理的产志贺毒素大肠埃希菌选择性增菌方法研究

目的开发一套基于酸处理的产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing coli,STEC)选择性增菌方法,提高食品中STEC菌株的检出率。方法选择12株不同血清型STEC菌株及13株常见干扰菌,评价其对不同酸处理条件(pH=2.0、2.5、3.0)的耐受性;考察筛选的酸处理条件对营养胁迫和冷冻胁迫状态STEC菌株生长活性的影响;比较研究酸水解酪蛋白、酵母提取物和丙酮酸钠等成分对胁迫状态STEC菌株的促生长作用,优化酸处理后中和/促生长培养基配方;比较增菌前与增菌后2种酸处理方式对STEC菌株分离效果的影响;最后通过人工污染样品,评价本研究建立的STEC酸处理选择性增菌方法的检测效果。结果本研究建立了一种不依赖于抑菌成分的STEC选择性增菌方法,样品在增菌前经酸处理培养基室温处理2 h,降低背景杂菌干扰,再通过中和/促生长培养基[胰蛋白胨大豆肉汤培养基(tryptone soybean broth,TSB)-1.5%Tris-0.1%丙酮酸钠]进行目标菌的增菌培养;人工污染试验结果表明,本方法与我国现行GB4789.36—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》标准方法相比,能够有效减少背景杂菌的干扰、获得更高的STEC分离效率。结论本研究建立的基于酸处理的STEC选择性增菌方法能够有效提高食品中STEC菌株的检测效率和检测准确性。