乳中志贺氏菌的荧光定量PCR检测方法的建立

为了快速、有效的检测乳中的志贺氏菌,建立一种特异性强、灵敏度高的荧光定量PCR方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,对提取的志贺氏菌DNA模板进行PCR扩增,对目的基因进行克隆和测序,然后利用荧光定量PCR方法,对志贺氏菌进行检测,确定其扩增条件。建立的方法特异性强,检测的灵敏度可达到10-6 ng/μL。利用建立的方法可检测乳中2.84 cfu/mL的志贺氏菌。该方法为快速、准确检测乳中的志贺氏菌提供了参考。

Real-time PCR技术与传统培养法检测肠道沙门菌和志贺菌的比较

目的:Real-time PCR技术与传统培养法检测肠道致病菌的比较。方法:根据沙门菌、志贺菌的基因保守区设计特异性引物和Taqman探针,建立Real-time PCR技术,检测样本中的沙门菌、志贺菌,与传统培养法检测作对比。结果:Real-time PCR技术显示出特异性强、灵敏度高、操作简便快捷等优点。结论:Real-time PCR技术相比传统培养法更适用于肠道致病菌的检测和筛选。

太原市2006年分离志贺菌菌株的血清分型及耐药性分析

目的调查太原市分离的志贺菌菌株的主要血清型和对常用抗菌药物的耐药性。方法对从腹泻患者分离的志贺菌菌株进行血清分型、生化鉴定和药物敏感试验。结果129份腹泻样本分离出阳性菌株40株,其中福氏志贺菌33株,占分离菌株的82.5%,宋内志贺菌7株,占分离总数的17.5%;福氏志贺菌中,4c型21株,占63.6%。福氏志贺菌对萘啶酸100%耐药,对氨苄西林、四环素耐药性均为97%,对头孢噻肟、庆大霉素的药物敏感性均为97%。宋内志贺菌对萘啶酸、四环素、复方新诺明均100%耐药;对阿莫西林、头孢噻肟、环丙沙星的敏感性均为100%。结论2006年太原市志贺菌优势菌型为福氏志贺菌4c型,志贺菌不同血清型对几种常用抗菌药物出现不同程度的耐药性。

乳酸菌发酵免疫乳特性研究

以福氏志贺氏菌作为抗原免疫预产奶牛,获得高活性的免疫乳。同时采用保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌进行混合发酵免疫乳和普通乳,并对发酵过程中发酵乳进行pH值、酸度、IgG含量及活性测定。结果表明:乳酸菌发酵免疫乳5h时,pH值达到4.69,酸度达到75.72°T,且免疫乳中IgG含量及活性基本保持不变,且并未发现免疫乳中特异性IgG对乳酸菌的发酵能力有不良影响。

宋内志贺菌耐药性监测

目的:分析近6年温州地区三起宋内志贺菌流行菌株的耐药性变迁,提高防治措施的针对性,避免抗生素的滥用。方法:对分离的菌株采用生化试验和血清凝集试验鉴定,并用K-B法对从腹泻病人分离的宋内志贺菌株进行药物敏感试验。结果:41株宋内志贺菌对11种抗生素出现不同程度的耐药性。其中从第一起分离到的18株菌株对庆大霉素100%敏感到第三起分离的10株宋内菌呈现了100%耐药性,而对诺氟沙星、呋喃唑酮、头孢三嗪三种抗生素呈100%敏感。结论:温州地区近年来宋内志贺菌耐药性发生了明显的变化。药物呋喃唑酮、诺氟沙星、头孢三嗪可作为目前临床治疗的常用药物,但应加强对耐药性开展动态监测是十分有意义和必要的。

引发水貂流产的新病原——宋内志贺菌的分离及鉴定

2012年接诊1例水貂流产病例,经过病理解剖和实验室检测,首次确定是由饲料污染宋内志贺菌引起的水貂流产。经过药敏试验分析,发现致病菌株均对氯霉素、喹诺酮类、头孢类药物敏感,经过治疗后水貂流产得到治愈。

外排泵基因与多耐药志贺菌关系的探讨

为了探讨外排泵基因和志贺菌多耐药性之间的关系,对临床耐多药志贺菌H24进行药敏试验,并分析外排泵基因的表达情况。采用琼脂平皿二倍稀释法对多耐药志贺菌进行药敏测定,用实时荧光定量RT-PCR检测H24的外排泵基因emre、cmr、acrb、ydhe的表达水平。药敏结果显示,H24对红霉素、四环素、氯霉素和硫酸链霉素呈高度耐药,对硫酸新霉素、环丙沙星、庆大霉素呈轻度耐药。实时荧光定量RT-PCR结果显示,4个外排泵基因均有表达,emre、cmr外排泵表达量明显高于acrb、ydhe外排泵的表达量。

志贺菌菌型调查及耐药谱R质粒检测

目的:本文报道了1986～2005年度滕州市志贺菌型、耐菌谱、耐药性R质粒转移检测情况。方法:从6862例腹泻病人中检出志贺菌812株。结果:阳性率11.83%,分属于A、B、C、D 4个群28个血清型,其中以B群为主,481株占59.24%,C群次之156株占19.21%,A群103株占12.68%,D群72株占8.87%。812株志贺菌80%以上呈敏感和中度敏感,其耐药率均在21.67%～95.19%。检测200株志贺菌R质粒接合转移率为52.00%,以B、C群转移率高于A、D群。结论:检测表明,福氏志贺菌仍是我市流行的主要菌群,而细菌耐药性绝大多数为R质粒介导。

与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用蛋白的筛选及鉴定

目的:筛选、鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白,以进一步研究ArgT在福氏2a志贺氏菌致病过程中发挥的作用。方法:将ArgT与GST融合表达,通过体外GST沉降实验和MALDI-TOF MS技术,筛选并鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白。结果:筛选并鉴定到与福氏2a志贺氏菌2457T ArgT相互作用的蛋白OmpR。结论:OmpR与ArgT存在体外相互作用。

弗氏志贺菌4c和2a型菌株的脉冲场凝胶电泳分型特征

目的:了解北京部分地区弗氏志贺菌4c型(F4c)和2a型(F2a)菌株的分子分型特征。方法:对2005年和2006年自北京部分地区腹泻监测分离的弗氏志贺菌菌株(4c型10株,2a型20株)进行生化鉴定和血清分型,用PCR检测侵袭性抗原基因ipaH,用改良Kirby-Bauer纸片法检测菌株的耐药谱,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型。结果:10株血清型鉴定为F4c的菌株中,有7株间的PFGE图谱存在相当的差异,Dice系数为0.78～0.92,而F2a菌株与大部分F4c菌株间的距离较远(Dice系数小于0.8);F4c和F2a菌株对14种抗生素的耐药谱略呈差异。结论:采用PFGE能够很好地辨别弗氏志贺菌4c型和2a型菌株;弗氏志贺菌4c型菌株具有易变性,可在流行过程中产生PFGE图谱的差异、血清亚型的转换、耐药谱的变化等。

PMA结合定量PCR方法检测食品中活性志贺菌的研究

为了解决PCR技术不能有效鉴别食品中细菌的死活状态，试验采用叠氮溴化丙锭（PMA）结合定量PCR技术建立食品中志贺菌的活菌检测方法。结果表明：样品中添加浓度为10～20μg／mL的PMA，经过3～5min强光照射处理，使PMA与细胞膜受损细菌中的DNA共价交联，同时水解游离的PMA，在活菌比例大于1％时实现活菌的定量检测，避免假阳性结果。

单增李斯特菌与志贺氏菌多重PCR检测技术的建立

目的:为食品、卫生行业提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的单增李斯特菌(Listeria monocyto-genes)与志贺氏菌(Shigella)多重PCR检测方法。方法:根据单增李斯特菌转录调节子基因prfA、志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH筛选出引物;优化多重PCR的引物浓度、退火温度及Mg2+等条件,分析单一PCR及多重PCR的特异性、灵敏度;结合24h增菌培养,确定多重PCR检测人工污染脱脂灭菌乳的检出限。结果:多重PCR扩增出了预计的PCR产物,即单增李斯特菌(274bp)和志贺氏菌(421bp)。该方法的灵敏度:78pg单增李斯特菌基因组DNA、7.5pg志贺氏菌基因组DNA。多重PCR检测人工污染脱脂灭菌乳,单增李斯特菌与志贺氏菌的灵敏度分别为2cfu/25mL和1.6cfu/25mL。结论:该方法在食品、卫生行业具有很好的应用和开发前景。

福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究

Sf2523蛋白属于硫氧还蛋白过氧化物酶(Prx)家族,在有氧代谢过程中消除活性氧,起到保护生命大分子的重要作用。通过构建原核表达体系,可溶性表达并纯化了Sf2523酶蛋白,并对蛋白进行了过氧化物酶活性检测,证明其依然具有天然活性,酶的核心结构并未发生变化。由分子排阻色谱结果发现,酶蛋白体内和体外聚集状态不同,离体蛋白聚集状态不稳定,趋于二体化。将纯化的单体蛋白即时进行了结晶实验,初筛长出了针状晶体。通过进一步切除标签蛋白进行优化处理,最终得到了均匀的三维单晶。

与志贺菌和大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集反应细菌的分离和鉴定

目的了解食品中能与志贺菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌,为防止误诊提供参考。方法采用染色形态鉴别、血清学及生化等方法进行检测。结果对食品风险监测205件样品中检出2种(3株)肠道杆菌能与志贺菌、大肠埃希菌O157诊断血清交叉凝集。结论肠杆菌科、弧菌科某些种属细菌可携带与志贺菌、大肠埃希菌O157相同或相关抗原,故在鉴定这些杆菌时除依血清学外,还应加用生化试验等检测作出最后判定。

blaCTX-M-55介导的宋内志贺菌耐药机制研究

目的研究bla_(CTX-M-55)介导的宋内志贺菌#1083的耐药机制。方法双纸片协同扩散法验证#1083是否为产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株;PCR方法鉴定其耐药基因;接合转移实验验证携带ESBL基因的质粒是否具有可转移性;VITEK 2仪器检测菌株对多种抗生素的MIC值;基因组测序鉴定介导耐药基因转移的移动元件;引物延伸实验鉴定耐药基因转录起始位点。结果 #1083为bla_(CTX-M-55)介导产ESBL的菌株,携带bla_(CTX-M-55)的耐药质粒可通过接合转移的方式进入受体菌EC600,并使受体菌具有相应的耐药谱;介导bla_(CTX-M-55)转移的转座单元为ISEcp1-bla_(CTX-M-55)-Δorf477,且其上游的插入序列ISEcp1为耐药基因提供强启动子区,促进耐药基因表达,且此表达为恒定表达,不受抗生素的诱导作用影响。结论质粒携带的bla_(CTX-M-55)为#1083的主要耐药基因,插入序列ISEcp1介导此基因的表达与传播。

一起福氏4C型志贺菌引起暴发流行的病原学检测

目的通过收集患者大便标本经实验室病原学检测,查明引起该次流行的主要病原菌。方法将收集的大便标本进行细菌增菌培养、分离培养、血清学鉴定、系统生化鉴定、药敏实验。结果该5份菌株生化结果均为:葡萄糖+,甘露醇+,蔗糖+,麦芽糖+,靛基质+,硫化氢-,乳糖-,5%乳糖-,枸橼酸盐-,赖氨酸-,水杨素-,七叶苷-,棉子糖-,氧化酶-,ONPG-;5份菌株玻片血清凝集试验结果:志贺菌4种多价、福氏多价、福氏群7和福氏型IV都发生了凝集反应,盐水对照阴性。10份大便标本中检出5份福氏4C型志贺菌。结论根据实验室病原学鉴定结果显示,该次暴发流行的病原菌是由褔氏4C型志贺菌所致,该菌株在本州是首次出现。