志贺氏菌标准物质的制备方法

采用冷冻干燥法制备标准物质。通过正交试验法选择冻干保护率最高的保护剂配方方案。以鸡肉粉作为标准物质基质,按比例与保护剂配方混合,添加拟定菌数的新鲜菌液后进行冷冻干燥。实验制备的标准物质样品其特性值(含菌数)为530 CFU/瓶,不确定度为24 CFU/瓶。冷冻干燥样品在-20℃及4℃条件下保存12个月,特性值稳定;25℃条件下保存9个月,特性值稳定;60℃条件下保存,稳定性差。

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立

通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。

对三代头孢菌素不敏感宋内志贺菌的流行趋势和克隆传播

目的为了观察对三代头孢菌素不敏感宋内志贺菌的流行和克隆传播趋势，为进一步防控提供指导。方法分析2002年到2007年宋内志贺菌及对三代头孢菌素不敏感菌的流行趋势，用脉冲场凝胶电泳（PFGE）确定对三代头孢菌素不敏感宋内志贺菌的亲缘关系，找出流行株。结果6年间宋内志贺菌在志贺菌中的比例及对三代头孢不敏感菌的比例逐年上升，2007年分别达55．29％和40．43％。PFGE测定45株三代头孢菌素不敏感宋内志贺菌，结果显示91．1％为流行株，在北京地区至少有A1～A66个克隆株流行，在不同年份不完全相同。结论宋内志贺菌及对三代头孢菌素不敏感株在北京地区流行趋势增加，存在克隆株的传播，应加强监控。

宋内志贺菌中ESBLs的检测

目的了解宋内志贺菌中ESBLs的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株宋内志贺菌对β内酰胺类等抗菌药物的耐药性,改良三维试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定,并进行转移接合试验;采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组β内酰胺酶基因通用引物以及TEM、CTX-M-13组全编码基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行指纹分析脉冲场电泳(PFGE)检测。结果3株宋内志贺菌对青霉素类、第一、二代头孢菌素以及庆大霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑显著耐药,对第三代头孢菌素中头孢曲松、头孢噻肟中度敏感,对亚胺培南、头孢美唑、氟喹诺酮类、头孢噻肟-克拉维酸、头孢他啶-克拉维酸显示敏感。这些菌株均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,并同时产生TEM-1型广谱β内酰胺酶;CTX-M-14编码基因可以接合方式发生水平转移;3株菌株的PFGE谱型相同。结论3株宋内志贺菌产生CTX-M-14型ESBLs,引起对多种β内酰胺类抗生素耐药,并存在克隆传播,应加强监测。

1831株宋内志贺菌耐药性调查及其产ESBLs的研究

目的了解分离自腹泻患者的1831株宋内志贺菌的流行趋势及耐药情况,探讨宋内志贺菌多重耐药机制。方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养及K-B法检测14种抗生素的耐药率。多重耐药菌用纸片确认试验检测产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs),改良三维试验检测ESBLs和AmpCβ内酰胺酶(AmpC β-lactamase,AmpC酶)。结果1831株宋内志贺菌感染腹泻患者中,男女比例为1.25∶1。高发季节为7～9月。1～20岁发病人数占总发病人数的71.0%。宋内志贺菌对复方磺胺甲噁唑、氨苄西林和头孢曲松的耐药率较高,分别达87.7%、23.0%和9.5%,且增高趋势明显;对氟喹诺酮类,头孢吡肟、头孢美唑、氯霉素、磷霉素和庆大霉素的耐药率较低,明显低于头孢曲松、头孢噻肟(P<0.05)。43株多重耐药菌均为ESBLs阳性株,未发现产AmpC酶株。结论在北京地区,宋内志贺菌感染腹泻患者发病年龄以青少年为主。其在志贺菌属感染的比例中有增高的趋势,对头孢曲松、头孢噻肟、复方磺胺甲噁唑、氨苄西林的耐药率较高且有上升趋势。宋内志贺菌耐头孢菌素者以产ESBLs为主。

宋内志贺菌的耐药状况及耐药机制

志贺菌是引起胃肠道感染主要病原菌之一。老人、儿童和免疫受损的患者中多发。发达国家流行的主要是宋内志贺菌,而发展中国家虽然长期以来流行的为福氏志贺菌,但近年来宋内志贺菌呈明显增加的趋势,并成为优势菌群。本文就近些年全球宋内志贺菌的分布流行、耐药情况、耐药机制以及检测方法的进行综述。

福氏和宋内志贺菌的药物敏感度测定

目的了解本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对临床常用抗菌药物的耐药性.方法琼脂稀释法测定2004年5-10月我院肠道门诊分离的31株福氏志贺菌和37株宋内志贺菌对多种抗菌药物的敏感性.结果福氏志贺菌和宋内志贺菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、氨苄西林和氨苄西林-舒巴坦耐药显著,耐药率分别为100%～97.3%、90.3%～94.6%、90.3%～64.9%和67.7%～51.4%;2种细菌对氯霉素和庆大霉素的耐药性差异有显著性;2种细菌对氟喹诺酮类、第三代头孢菌素非常敏感,耐药率为6.5%～0%.结论本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对氟喹诺酮类和第三代头孢菌素非常敏感,对复方磺胺甲噁唑、氨苄西林、四环素等其他多种抗菌药物耐药显著,应加强耐药性监测和防治.

爆发性宋内氏痢疾杆菌型食物中毒的流行病学与临床特征分析

目的探讨爆发性宋内氏痢疾杆菌致食物中毒大便培养阳性患儿的临床与流行病学特征。方法对245例住院患儿依照《全国细菌性痢疾监测方案》进行病原学、流行病学、临床表现、细菌学检查、毒力基因鉴定结果、药敏试验分析。结果从食堂凉拌肉标本以及患儿大便标本中均培养出宋内氏痢疾杆菌，经鉴定均含有ipa毒力基因，药敏结果显示对第三代头孢菌素敏感。此次暴发性起病急进展快，有93．1％的患儿在初次暴露后2—3天内发病，无死亡病例。结论宋内氏痢疾杆菌是本次爆发流行的病原菌，传染源是变质的凉拌菜，传播途径是直接进食凉拌菜，没有第二代患者的产生，但是有患者的大便培养由阴性转为阳性。

一起暴发宋内志贺菌食物中毒的流行病学及临床特征分析

目的探讨某小学暴发的宋内志贺菌食物中毒大便培养阳性患儿的临床特征。方法志贺菌监测、分离、鉴定依照《全国细菌性痢疾监测方案》,药敏试验采用K-B扩散法。共获得245份大便培养阳性病例完整的病例资料,其中男126例,女119例。结果发热、呕吐、腹痛、寒颤、里急后重是多数患儿的首发症状,男生的腹泻次数与女生比较差异有统计学意义(P<0.05)。血白细胞、中性细胞比例,中性细胞绝对值,低血钾,大便常规白细胞构成比、红细胞构成比、脓细胞阳性率、隐血阳性率,性别差异均无统计学意义(P>0.05)。女生大便常规中吞噬细胞阳性率高于男生(P<0.05)。结论宋内志贺菌感染多呈不典型发作,部分临床特征有性别差异。

北京市宋内氏志贺菌脉冲场凝胶电泳图谱研究

目的研究北京市2005～2006年分离的30株宋内氏志贺氏菌进行脉冲常凝胶电泳图谱特征。方法参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲常凝胶电泳,并对带型进行命名。采用BioNumerics图像分析软件做聚类分析。结果30株宋内氏志贺氏菌被分成17个带型,主要带型J16N11BJ0001到J16N11BJ0009的聚类相似性为92%,含概菌株占实验菌株总数的67%。结论建立北京市宋内氏志贺氏菌脉冲常凝胶电泳分析方法和初步带型数据库,获得了宋内氏志贺氏菌的主要克隆系。

北京与杭州地区宋内志贺菌的耐药性及其耐药机制对比研究

目的了解北京地区与杭州地区宋内志贺菌的耐药状况和基因型的特征。方法用常规方法培养、分离细菌,经生化反应和血清凝集试验鉴定到种。用Kirby-Bauer纸片法进行药物敏感性试验。超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)检测采用双纸片确认试验。采用PCR方法进行基因扩增。结果从北京地区分离获得203株宋内志贺菌,对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、头孢曲松的耐药率分别为56.70%、94.00%、19.10%。从杭州地区分离获得97株宋内志贺菌,耐药率较高的抗生素也是氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、头孢曲松,但耐药率分别为99.00%、91.10%和71.30%。北京地区有43株产ESBLs,占21.18%,其耐药基因为CTX-M1群、CTX-M9群及TEM基因,分别占37.21%、25.58%和41.86%;杭州地区有73株产ESBLs,占75.26%,其耐药基因为CTX-M1群、CTX-M9群及TEM、OXA基因,分别占17.81%、58.90%和45.21%、9.59%。结论北京和杭州地区宋内志贺菌对氨苄西林、头孢菌素等抗生素耐药性有显著差异,并检测到产ESBLs,主要耐药基因包括CTX-M1群、CTX-M9群及TEM、OXA基因。

北京市海淀区1999～2005年细菌性痢疾流行特征

目的了解海淀区7年来细菌性痢疾发病规律、流行特征，为2008年北京奥运会传染病保障工作提供基础本底资料，为细菌性痢疾防治策略提供科学依据。方法根据海淀区1999～2005年细菌性痢疾传染病疫情报告作描述性分析，对2004年60株志贺菌进行血清学分型。结果1999～2005年细菌性痢疾发病率波动在134．05／10万～353．98／10万之间，年均发病率在234．02／10万，总体呈下降趋势；发病以5～9月份为主，发病最高峰在每年的8月份；0～4岁组婴幼儿发病率最高达93．8．15／10万；不同职业发病数前三位是学生、干部职员、散居儿童。志贺菌60株分型，福氏志贺菌37株占61．67％，宋内氏志贺菌23株占38．33％，福氏37株以福氏4为主（15株，占40．52％）。结论海淀区近7年来细菌性痢疾发病率呈下降趋势，但发病率远远高于全国平均水平，始终占据法定传染病发病首位。夏秋季为细菌性痢疾发病高峰期；0～4岁组、学生、干部职员为重点防治对象。以福氏志贺菌、宋内氏志贺菌两型为流行株。

宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗的制备及其免疫学特性的研究

宋内氏痢疾杆菌 (S .Sonnei)的一个重要保护性抗原是菌体抗原 (O抗原 )即细菌细胞壁中的脂多糖 (LPS)成分 ,已证实血清中足够水平的抗LPSIgG抗体即能对该菌提供免疫保护作用。本文选用Westphal热酚法提纯宋内氏痢疾菌LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O 特异性多糖 (O SP) ,然后采用化学方法即通过连接剂己二酸二肼 (ADH)将其共价结合到破伤风类毒素 (TT)上 ,共制备得到了三批宋内氏痢疾杆菌O SP TT结合疫苗。经生化和免疫学方法检测证实我们提纯的LPS、OSP及其合成的O SP AH衍生物、O SP TT结合物均具有宋内氏痢疾杆菌O抗原特异性 ,同时其核酸和杂蛋白质含量低 (≤ 2 % ) ,表明纯度较高。同时经小鼠免疫原性试验证实三批结合物免疫小鼠后产生的抗LPSIgG抗体滴度均比单一O SP免疫后产生的要高出 10倍以上 ,且结合物再次注射后存在加强应答。补体介导的体外杀菌力试验表明结合物免疫小鼠后诱导产生的血清抗LPSIgG抗体对宋内氏痢疾杆菌具特异性杀菌活性。本文结果表明宋内氏痢疾杆菌O SP TT结合疫苗可望作为一种有效的侯选痢疾疫苗做进一步的大规模人体观察。

2011年夏季某院分离志贺菌特点及某地区志贺菌血清型流行趋势分析

目的了解该院2011年分离的志贺菌及相关病例特点,结合其他区县志贺菌分离情况,总结北京市志贺菌血清型转变特点。方法 VitekⅡCompact鉴定志贺菌,血清玻片凝集法鉴定血清型,药敏试验采用K-B法。结果共分离获得志贺菌15株,其中宋内Ⅰ型14株,福氏F2a型1株;15株菌对复方新诺明、哌拉西林、氨苄西林均耐药,14株宋内Ⅰ型菌对环丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦均敏感。结论宋内Ⅰ型志贺菌为主要分离菌,对环丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦保持高度敏感;宋内志贺菌已成为北京市流行志贺菌的主要血清型。

脉冲场凝胶电泳分型技术应用于宋内志贺菌溯源分析

目的:分析四川省成都市2006年崇州、大邑两地相继暴发的宋内志贺菌食源性感染疫情中病人分离菌株之间,及其环境分离菌株之间的分子分型特征和遗传相关性,推断传染来源。方法:收集两地疫情暴发期间分离的宋内志贺菌株,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型,所得结果用BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果:共测试56株菌,用XbaⅠ酶切后PFGE可分为14个带型。其中崇州菌株38株,有26株带型完全相同(包括1株环境株);有37株菌分布于5种带型,其相似性在97%以上。大邑菌株18株,有10株带型完全相同;其余8株有7种带型,相似性较差。两地之间菌株分子分型差异明显,其相似性小于92%。结论:确证崇州、大邑两地确有宋内志贺菌食源性感染疫情的暴发,但两地之间无交叉传染关系;提示崇州的宋内志贺菌疫情是由食物凉拌菜引起;提示大邑本地有较高的宋内志贺菌流行水平和复杂的传染源。

不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗小鼠免疫原性对比试验

试验中以小鼠为动物模型 ,对不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗进行免疫效果观察。 3种福氏 2a痢疾结合疫苗和 3种宋内氏痢疾结合疫苗分别皮下免疫NIH小鼠 ,同时设置O SP(O 特异性多糖 )对照组 ,免疫 3针 ,在不同免疫针次间采血 ,用ELlSA测定抗体滴度。单独使用福氏 2aO SP和宋内氏O SP免疫后 ,小鼠血清中几乎没有抗LPSIgG抗体产生 ,而用结合疫苗免疫后 ,小鼠血清中产生了抗LPSIgG抗体 ,且第二次、第三次免疫后 ,小鼠血清中抗LPSIgG抗体水平有显著升高 ,表明结合疫苗具有加强免疫应答效应。三种不同的痢疾结合疫苗相比较 ,F 2a O SP rEPA结合疫苗较F 2a O SP TT结合疫苗和F 2a 0 SP DT结合疫苗的小鼠抗LPSIgG抗体水平高 ,S O SP rEPA结合疫苗较S O SP TT结合疫苗和S O SP CRM 9,结合疫苗的小鼠抗LPSIgG抗体水平高。以rEPA作为载体的痢疾结合疫苗比DT 。

江苏省2010年宋内志贺菌耐药相关整合子分析及分子分型研究

目的分析江苏省2010年宋内志贺菌的整合子分布及分子分型特征。方法对江苏省2010年分离的33株宋内志贺菌采用K-B纸片法检测抗菌药物敏感性,联合PCR和限制性片段多态性(RFLP)进行整合子分类和可变区检测,利用测序技术判断整合子可变区耐药基因,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性分析。结果宋内志贺菌多重耐药率为63.64%,对复方新诺明、四环素、萘啶酸和氨苄西林耐药率较高,分别为84.85%、75.76%、66.67%和63.64%。33株宋内志贺菌中51.52%的菌株检出I类整合子,其中4株可变区阳性,携带dfrA17-aadA5基因盒;81.82%的菌株检出II类整合子,携带dfrA1-sat1-aadA1基因盒;两类整合子同时存在时耐药性更为显著。PFGE图谱分为13个不同带型,同一带型菌株大多分散于江苏各地。结论整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与其多重耐药机制。多重耐药性在不同地区、不同克隆的菌株间扩散传播。

抗宋内氏志贺氏菌脂多糖单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文用宋内氏志贺氏菌加热致死菌体免疫BALB/c小鼠,纯化脂多糖筛选,获得2株抗宋内氏菌LPS的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。2株McAb的Ig类型为IgG2、IgG2a。交叉试验表明,2株McAb与痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、侵袭性大肠杆菌、亲水气单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌以及类志贺毗邻单胞菌O5、O15、O26、O39血清型无交叉反应。

菌体抗原“缺失”的宋内志贺菌研究

目的:研究O抗原"缺失"的宋内志贺菌其它生物学性状的变化情况。方法:检测试验菌株的生化特性和对抗生素的敏感性,以及用多种批号的诊断血清进行凝集试验。结果:具有典型的宋内志贺菌的生化特性;与对照菌相比,能够耐包括复方新诺明在内的多种抗生素;与有效期内的多批宋内志贺菌诊断血清不能产生凝集反应,而对照菌凝集良好。结论:该株宋内志贺菌的O抗原表达显著减少,同时药敏谱也产生明显的改变。

长阳县一起水源性细菌性痢疾爆发疫情的调查分析

目的通过对一起水源性细菌性痢疾爆发疫情的流行病学调查分析,探讨疫情发生的原因。方法采用现场流行病学调查方法,对患者逐一进行调查,采集患者、水源水和末梢水进行肠道致病菌培养。结果共发病69例,2006年9月6日出现首发病例,9月12日流行结束,整个流行期为7天,罹患率为6!98%,患者以发热、头痛、恶心、呕吐、腹痛、腹泻为主,外环境病原检索与患者病原检索一致,均为宋内志贺氏菌。病例分析提示,发病学生均饮用过生水。结论证实本起疫情是由饮用水受到污染而引起的细菌性痢疾爆发。