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弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白的融合表达和纯化
被引量:
1
1
作者
刘先凯
高美琴
+3 位作者
孙忠科
冯尔玲
朱力
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2009年第1期1-3,共3页
目的:原核表达重组弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为其功能研究奠定基础。方法:用PCR方法从弗氏2a志贺氏菌2457T株染色体中扩增YciD蛋白编码序列,经过纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-yciD,转化大肠杆菌BL2...
目的:原核表达重组弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为其功能研究奠定基础。方法:用PCR方法从弗氏2a志贺氏菌2457T株染色体中扩增YciD蛋白编码序列,经过纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-yciD,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用WesternBlot检测融合蛋白的表达。结果:构建了YciD蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的YciD蛋白;WesternBlot表明,此蛋白可与His标签抗体反应,表明获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础。
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关键词
弗氏
2a
志贺氏菌
2457t
株
YciD蛋白
融合蛋白
表达
纯化
下载PDF
职称材料
福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建
2
作者
赵格
曹晓玉
+4 位作者
朱力
刘先凯
冯尔玲
陈惠鹏
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2008年第4期479-482,共4页
目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非...
目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非降解株,并经SDS-PAGE验证;对野生株、argT缺失突变株和ArgT非降解突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:构建了2457T的argT缺失突变株和ArgT非降解突变株;2种突变株初始生长均较慢,但最终和野生株状态一致;2种突变株利用甘露醇的能力都比野生株强,而利用葡萄糖的能力降低。结论:获得了福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体。
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关键词
福氏
2a
志贺氏菌
2457t
株
ArgT蛋白
缺失突变体
定点突变
下载PDF
职称材料
弗氏2a志贺菌htrA基因突变体的构建
3
作者
马姗姗
朱力
+3 位作者
古月华
刘先凯
冯尔玲
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2011年第6期781-784,共4页
目的:构建弗氏2a志贺菌2457T的htrA基因缺失突变株及HtrA酶失活突变株,以便进一步研究HtrA蛋白的功能。方法:用PCR扩增htrA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对htrA基因进行缺失,用PCR进行验证;通过定点...
目的:构建弗氏2a志贺菌2457T的htrA基因缺失突变株及HtrA酶失活突变株,以便进一步研究HtrA蛋白的功能。方法:用PCR扩增htrA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对htrA基因进行缺失,用PCR进行验证;通过定点突变的方法构建HtrA酶失活突变株,并测序验证。结果与结论:构建了2457T htrA缺失突变株和2457T/htrAFSA酶失活突变株。
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关键词
弗氏
2a
志贺菌
2457t
株
HtrA蛋白
缺失突变体
定点突变
下载PDF
职称材料
题名
弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白的融合表达和纯化
被引量:
1
1
作者
刘先凯
高美琴
孙忠科
冯尔玲
朱力
王恒樑
机构
军事医学科学院生物工程研究所
华中农业大学食品科技学院
出处
《生物技术通讯》
CAS
2009年第1期1-3,共3页
基金
国家自然科学基金(30470101
30700035)
国家重点基础研究发展计划(2005CB522904)
文摘
目的:原核表达重组弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为其功能研究奠定基础。方法:用PCR方法从弗氏2a志贺氏菌2457T株染色体中扩增YciD蛋白编码序列,经过纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-yciD,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用WesternBlot检测融合蛋白的表达。结果:构建了YciD蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的YciD蛋白;WesternBlot表明,此蛋白可与His标签抗体反应,表明获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础。
关键词
弗氏
2a
志贺氏菌
2457t
株
YciD蛋白
融合蛋白
表达
纯化
Keywords
shigella flexneri 2a strain 2457t
YciD protein
protein expression
protein purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建
2
作者
赵格
曹晓玉
朱力
刘先凯
冯尔玲
陈惠鹏
王恒樑
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2008年第4期479-482,共4页
基金
国家自然科学基金(30470101和30670104)
国家重点基础研究发展计划(2005CB522904)
文摘
目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非降解株,并经SDS-PAGE验证;对野生株、argT缺失突变株和ArgT非降解突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:构建了2457T的argT缺失突变株和ArgT非降解突变株;2种突变株初始生长均较慢,但最终和野生株状态一致;2种突变株利用甘露醇的能力都比野生株强,而利用葡萄糖的能力降低。结论:获得了福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体。
关键词
福氏
2a
志贺氏菌
2457t
株
ArgT蛋白
缺失突变体
定点突变
Keywords
shigella flexneri 2a strain 2457t
ArgT
deletion mutant
site-directed mutagenesis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
弗氏2a志贺菌htrA基因突变体的构建
3
作者
马姗姗
朱力
古月华
刘先凯
冯尔玲
王恒樑
机构
军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
出处
《生物技术通讯》
CAS
2011年第6期781-784,共4页
文摘
目的:构建弗氏2a志贺菌2457T的htrA基因缺失突变株及HtrA酶失活突变株,以便进一步研究HtrA蛋白的功能。方法:用PCR扩增htrA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对htrA基因进行缺失,用PCR进行验证;通过定点突变的方法构建HtrA酶失活突变株,并测序验证。结果与结论:构建了2457T htrA缺失突变株和2457T/htrAFSA酶失活突变株。
关键词
弗氏
2a
志贺菌
2457t
株
HtrA蛋白
缺失突变体
定点突变
Keywords
shigella flexneri 2a strain 2457t
HtrA
deletion mutant
site-directed mutagenesis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白的融合表达和纯化
刘先凯
高美琴
孙忠科
冯尔玲
朱力
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2009
1
下载PDF
职称材料
2
福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建
赵格
曹晓玉
朱力
刘先凯
冯尔玲
陈惠鹏
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2008
0
下载PDF
职称材料
3
弗氏2a志贺菌htrA基因突变体的构建
马姗姗
朱力
古月华
刘先凯
冯尔玲
王恒樑
《生物技术通讯》
CAS
2011
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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