福氏2a志贺氏菌△aroA突变减毒株的构建

志贺氏菌芳香族氨基酸合成酶基因缺陷能够使菌体明显减毒，并有可能成为新一代痢疾疫苗．用ＰＣＲ技术从野生型福氏２ａ志贺氏菌２４５７Ｔ中克隆出ａｒｏＡ基因，在体外进行精确的缺失突变，并通过体内同源重组，构建成△ａｒｏＡ突变体ＲＳ４２６．实验结果表明，这种突变体仍保持了侵袭能力和保护性Ｏ抗原的表达，但其毒力已明显降低，不能产生豚鼠角结膜炎，小鼠半数致死量明显提高．免疫保护试验显示，ＲＳ４２６可在小鼠中产生对福氏２ａ野生菌１００％的保护作用．

志贺氏菌芳香族氨基酸缺陷减毒株的构建

目的构建一种新型痢疾疫苗，使其较完整地保留保护性抗原，又不致丧失其侵袭力。方法用PCR技术从野生型福氏2a志贺氏菌2457T中克隆出aroA基因，在体外进行精确的缺失突变，并通过体内同源重组，构建成ΔaroA突变体RS426。结果这种突变体仍保持了侵袭能力和保护性O抗原的表达，但其毒力已明显降低，不能产生豚鼠角结膜炎，小鼠半数致死量明显提高。结论免疫保护试验显示，RS426可在小鼠中产生对福氏2a野生菌100％的保护作用。

自杀质粒同源重组方法构建弗氏志贺菌htrA可控表达菌株

目的构建弗氏志贺菌Htr A蛋白的可控表达菌株。方法构建自杀质粒同源重组载体,利用重组方法在基因组htr A前插入阿拉伯糖启动子,同时构建并导入外源表达Ara C蛋白的表达载体,实现对Htr A蛋白的可控表达;在此基础上,通过蛋白印迹实验,检测诱导前后全菌以及周质中Htr A蛋白的表达情况。结果测序结果表明,自杀质粒同源重组载体以及外源表达载体构建成功;蛋白印迹实验结果显示,对比阿拉伯糖诱导菌株,未诱导菌株中基本未检测到Htr A蛋白的表达。结论自杀质粒同源重组方式可在无阿拉伯糖时有效阻遏Htr A蛋白的表达;同时在诱导后,还可恢复Htr A蛋白的正常表达,有利于后续功能研究。