石斛合剂等降糖中药方对衰老糖尿病大鼠胰腺PCNA、NF-κBp65的影响

目的：比较石斛合剂等降糖中药方对衰老糖尿病模型大鼠胰岛细胞增殖凋亡相关因子PCNA、NF-κBp65的影响,以遴选出保护胰岛细胞功能、防治老年糖尿病的方药。方法：采用Wistar雌性大鼠制备衰老DM模型大鼠,随机分为：衰老对照组、衰老DM模型组、衰老DM石斛合剂组、衰老DM生脉散组,并给予药物治疗4周后,检测血清FBG、GSP等浓度;免疫组化法检测胰腺组织中PCNA和NF-κBp65的表达。结果：与衰老DM模型组相比：石斛合剂组大鼠FBG与GSP显著降低（P〈0.05~0.01）,生脉散组亦降低;且治疗组之间差异有统计学意义（P〈0.01）;石斛合剂组胰腺PCNA表达非常显著（P〈0.01）,生脉散组表达亦增加（P〈0.05）,2个治疗组之间比较差异有统计学意义（P〈0.01）;但治疗组该2项指标均未达到衰老对照组水平。各组胰岛内NF-κBp65表达由多到少顺序依次如下：石斛合剂组〉衰老DM模型组〉生脉散组〉衰老对照组。结论：与生脉散相比,石斛合剂能够更明显地改善衰老DM大鼠血糖;二者均能促使DM大鼠胰腺组织PCNA表达,提示其可促使胰腺细胞增殖,改善被破坏的内环境稳态,呈现石斛合剂〉生脉散的趋势。各组胰岛内NF-κBp65表达由多到少顺序依次如下：石斛合剂组〉衰老DM模型组〉生脉散组〉衰老对照组。推测：患DM后,机体产生应激反应,石斛合剂可以促使NF-κB参与应激反应,调动了机体潜力;生脉散则减弱NF-κB参与应激反应。在防治老年糖尿病方面,石斛合剂较生脉散更具优势。

正交设计联用Box-Behnken效应面法优选复方石斛清肺散提取工艺

目的采用正交设计和Box-Behnken响应曲面法优选复方石斛清肺散最佳提取工艺。方法出膏率、橙皮苷含有量为评价指标,通过正交设计初步优选提取工艺,Box-Behnken效应面法进一步优化工艺,从可行性和经济性确定最终提取工艺条件。结果正交设计优选的最佳工艺为12倍量50%乙醇,回流提取3次,每次1.5 h;效应面法优化工艺为14倍量32%乙醇,回流提取3次,每次1.5 h。结论对比验证试验表明,Box-Behnken效应面法优化后提取溶剂用量稍增加,但乙醇体积分数显著降低,经济成本将大幅降低。

铁皮石斛复方颗粒对小鼠免疫功能影响的研究

目的:研究铁皮石斛复方颗粒对小鼠免疫功能的影响,探讨其对小鼠的免疫调节作用。方法:昆明小鼠随机分成正常对照组和3个的铁皮石斛复方颗粒剂试验组,连续灌胃30 d后进行脏器/体质量比值测定、淋巴细胞转化实验、碳廓清实验、血清溶血素实验及腹腔巨噬细胞吞噬绵羊血红细胞的实验。结果:铁皮石斛复方颗粒剂能提高小鼠脾脏指数;刺激淋巴细胞增殖;提高小鼠血清溶血素含量和迟发型变态反应水平;增强小鼠吞噬细胞吞噬绵羊血红细胞及碳廓清的能力。结论:铁皮石斛复方颗粒剂具有一定的免疫增强作用,可增强机体的特异性和非特异性免疫功能。

正交设计优选复方石斛清肺散的煎煮工艺研究

目的利用正交设计优选复方石斛清肺散处方中药材的最佳工艺条件。方法以出膏率和橙皮苷含量为指标,采用HPLC法检测复方石斛清肺散中橙皮苷含量。并以L9(33)正交设计试验,对药材煎煮的水用量、煎煮次数和煎煮时间进行正交优选。结果最佳煎煮工艺为:10倍量水,浸泡35 min煎煮3次,每次煎煮1 h。方法学考察表明,橙皮苷在66.93~334.67 mg/L内线性关系良好;精密度试验、稳定性试验、重复性试验均良好。结论该含量测定方法与优选的煎煮工艺条件,操作简单,稳定,可靠,可为药品实际生产提供参考。

石斛合剂对糖尿病模型大鼠内脂素及血糖的影响

目的观察石斛合剂对糖尿病模型大鼠血清及内脏脂肪、肝脏、肾脏组织内脂素(visfatin)表达的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养及链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型大鼠。将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、石斛合剂组各6只,石斛合剂组予石斛合剂药液灌胃,模型组和正常组予生理盐水灌胃,各组均干预8周后取材。ELISA法检测血清visfatin水平,荧光实时定量PCR、蛋白免疫印记法检测大鼠内脏脂肪、肝脏、肾脏中visfatin mRNA及蛋白水平的表达。结果石斛合剂组血清visfatin水平较模型组明显降低(P<0.01),并与血糖水平改变呈正相关(P<0.01)。石斛合剂组内脏脂肪、肝脏、肾脏组织中visfatin m RNA及蛋白水平表达较模型组明显下降(P<0.01)。结论石斛合剂可通过改善糖尿病模型大鼠脂肪组织及靶器官(肝脏、肾脏)中visfatin的表达来调整血糖水平,其降糖作用具有多层次、多靶器官特点。

复方石斛消渴颗粒特征图谱及2个成分定量方法的建立

目的 建立复方石斛消渴颗粒特征图谱并测定其主要成分葛根素、丹酚酸B的含量。方法 采用HPLC法,资生堂C_(18)反相色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱,二极管阵列检测器检测,检测波长分别为250 nm、286 nm,流速1.0 mL·min^(-1),柱温35℃。结果 特征图谱试验中,通过与对照药材色谱图的对比,10批供试品色谱图中有7个共有峰。以葛根素为参比峰,测定方法的精密度、重复性、稳定性试验中的各共有峰的相对保留时间的RSD均小于1%,相对峰面积的RSD均小于2%;含量测定方法中,葛根素、丹酚酸B分别在21.83~218.28μg·mL^(-1)、20.36~203.56μg·mL^(-1)内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.4%、97.8%,RSD分别为1.23%、1.02%。结论 该方法稳定可靠,可用做复方石斛消渴颗粒的质量控制。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨复方石斛汤对气道炎症模型大鼠的影响

目的:基于Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路探讨复方石斛汤干预气道炎症的作用与机制。方法:84只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、甲强龙组(2 mg·kg^(-1))、复方石斛汤预防组(5.46 g·kg^(-1))及复方石斛汤高(10.92 g·kg^(-1))、中(5.46 g·kg^(-1))、低(2.73 g·kg^(-1))剂量组。除空白组外,其余组大鼠于实验第1、14天气道内滴注200μL脂多糖(1 g·L^(-1)),并于第2—13天及第15—28天置于烟熏箱内烟熏40 min,复方石斛汤预防组从实验第1天起灌胃复方石斛汤,复方石斛汤高、中、低剂量组及甲强龙组于实验第29—42天给予相应药物,空白组和模型组灌胃生理盐水。观察大鼠一般情况;HE染色观察肺组织病变;ELISA检测支气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6水平;Western Blot及免疫组化检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平;RT-PCR检测肺组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠精神、身体状态欠佳,咳嗽气促,肺组织炎性细胞浸润严重,TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,复方石斛汤各组大鼠精神、身体状态尚可,肺组织炎性细胞浸润减少,TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白与mRNA表达水平显著降低(P<0.05);免疫组化显示TLR4、MyD88、NF-κB p65阳性表达降低(P<0.05)。结论:复方石斛汤在减轻呼吸道症状、抑制气道炎症方面起到了治疗及预防作用,常规剂量下,越早用药肺组织病变越轻微,抗炎效果越显著,且其机制可能与下调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达有关。

石斛合剂对糖尿病肾病小鼠TNF-α及IL-6表达的影响

目的：观察石斛合剂对db/db糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-6（IL-6）表达水平的影响。方法：选用11~12周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体质量随机分成模型组、格列吡嗪治疗组、石斛合剂低剂量组和高剂量组,db/m小鼠为正常组。连续灌胃给药8周。检测小鼠体质量及24 h尿蛋白定量;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态改变;通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清及肾组织TNF-α,IL-6的含量;分别应用免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测肾组织中TNF-α,IL-6蛋白的表达。结果：石斛合剂能明显降低db/db小鼠的体质量（P〈0.05,P〈0.01）及24 h尿蛋白定量（P〈0.05,P〈0.01）。HE染色结果显示模型组小鼠肾小球体积增大,系膜基质增多,系膜区增宽,肾小管上皮细胞空泡变性;与模型组相比,各治疗组肾小球基底膜变薄,系膜细胞增生情况减轻,细胞外基质减少,肾小管结构基本恢复正常。免疫组织化学,ELISA和Western bolt结果表明,与正常组比较,模型组小鼠TNF-α,IL-6的表达均显著增加（P〈0.01）;与模型组比较,各治疗组TNF-α,IL-6的表达均明显减少（P〈0.05,P〈0.01）,但仍高于正常组。结论：石斛合剂可能通过下调TNF-α及IL-6的表达减轻肾组织内的炎症反应,改善db/db小鼠的肾脏损害,从而延缓DN的进展。

复方石斛合剂单次给药对db/db小鼠胰岛素信号的影响

目的:探讨复方石斛合剂单次给药对db/db小鼠胰岛素信号的影响,并探讨相关的作用机制。方法:选取30只14~16周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体重随机分成模型组、中药1方组、中药2方组;另10只db/m小鼠为正常组。以复方石斛合剂1方与2方单次给药后,从整体水平观察葡萄糖耐量(OGTT)的变化;单次给药30 min与60 min后,从细胞水平观察肝细胞6-磷酸果糖激酶-1(PFK)与丙酮酸脱氢酶(PDH)活性,胰岛素受体(InsR)与Akt蛋白磷酸化水平的变化。结果:与正常组比较,模型组db/db小鼠OGTT 0,30,60,120 min的血糖水平显著升高,肝细胞PFK与PDH活性显著降低,30 min与60 min InsR与Akt蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,石斛合剂1方和2方单次给药均能明显降低db/db小鼠OGTT 60,120 min的血糖水平(P<0.05,P<0.01),改善葡萄糖耐量;石斛合剂1方和2方单次给药均增加肝细胞PFK与PDH活性,促进InsR Tyr1150/1151与Akt Thr308和Ser473磷酸化水平,呈现药物时间依赖效应(P<0.05,P<0.01)。结论:复方石斛合剂1方,2方分别单次给药都能提高db/db小鼠的葡萄糖耐量,增加肝细胞PFK和PDH酶活性,其机制可能与增加InsR Tyr150/1151与Akt Thr308和Ser473磷酸化,改善胰岛素信号的快速转导有关。