新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立与评价

目的研究坏死性小肠结肠炎(NEC)大鼠模型的简易制作方法。方法 3日龄SD大鼠30只,雌雄不限,随机分2组(每组15只),即正常对照组与NEC模型组,采用肠内配方喂养、低氧高氧暴露和冷刺激的综合应激方法造模,成功后取肠管组织,HE染色光镜下观察并行Shiou评分,Elisa法检测炎性因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的水平。结果 NEC模型组实验中死亡1只,对照组无死亡;与正常对照组相比,NEC模型组HE染色光镜下可见炎症反应明显,病理学检测Shiou评分明显增高(P<0.01);Elisa法检测炎性因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肠内配方喂养、低氧高氧暴露和冷刺激的综合应激方法能成功建立NEC大鼠模型,且建模可重复性好,成功率高。

乌司他丁对坏死性小肠结肠炎新生大鼠小肠结肠的保护作用研究

目的探讨乌司他丁对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠小肠结肠的保护作用。方法将60只3日龄SD大鼠随机分为正常对照组、NEC模型组、乌司他丁治疗组、乌司他丁对照组,每组15只。先采用综合应激法建模,即3日龄SD大鼠离开母鼠后,采用肠内配方奶喂养、缺氧(100%CO2灌饲养箱10min)-高氧(97%O2灌饲养箱5min)暴露和冷应激(4℃环境中5min)的方法,2次/d,连续3d,并加腹膜腔注射0.9%氯化钠溶液。造模成功后取肠管组织切片,HE染色光镜下观察并作Shiou评分,免疫荧光法检测自噬因子(Beclin-1)和自噬相关蛋白(LC3A/B)表达水平,Elisa法检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果 NEC模型组和正常对照组相比较炎症反应明显改善,Shiou评分有统计学差异;Beclin-1和LC3A/B荧光强度显著增强;TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。乌司他丁治疗组和NEC模型组相比较炎症反应明显改善,Shiou评分有统计学差异;Beclin-1和LC3A/B水平可见荧光强度表达显著下降;TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论乌司他丁对NEC新生大鼠小肠结肠有保护与治疗作用。

胞嘧啶核苷二磷酸胆碱对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的治疗作用

目的探讨胞嘧啶核苷二磷酸胆碱(CDP-胆碱)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的治疗作用。方法将40只清洁级SD新生大鼠按随机数字表法分4组,每组10只:空白对照组(母鼠喂养且无任何干预措施)、NEC对照组(配方奶喂养,低温+缺氧刺激法建模,腹腔注射0.9%氯化钠注射液)、CDP-胆碱治疗组(配方奶喂养,低温+缺氧刺激法建模,腹腔注射CDP-胆碱1次/d)、CDP-胆碱对照组(母鼠喂养,腹腔注射CDP-胆碱1次/d)。实验第7天处死大鼠并取肠段进行HE染色及Shiou评分,同时采用免疫荧光法检测自噬基因Beclin-1及微管相关蛋白LC3Ⅱ荧光强度,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子水平。结果NEC对照组大鼠肠绒毛普遍水肿,黏膜及黏膜下层可见以中性粒细胞为主的大量炎症细胞,毛细血管有扩张,血管外可见红细胞,部分肠上皮细胞消失;Shiou评分及肠道组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显高于其他3组(均P<0.05);肠道组织Beclin-1、LC3Ⅱ荧光强度明显增强。空白对照组、CDP-胆碱治疗组和CDP-胆碱对照组大鼠肠黏膜上皮连续、完整,细胞与腺体排列规则,未见炎症细胞浸润;Shiou评分及肠道组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平两两比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);肠道组织Beclin-1、LC3Ⅱ荧光强度差异不明显。结论CDP-胆碱对新生大鼠NEC有明显治疗作用。