表达多肽抗生素apidaecin的转基因烟草及其抗病性的初步分析

将多肽抗生素apidaecin基因与病程相关蛋白的信号肽序列融合 ,构建了apidaecin的分泌型植物表达载体、apidaecin与另一多肽抗生素Shiva I的双价分泌型植物表达载体 ,以本实验室原来构建的Shiva I分泌型植物表达载体做对照 ,转化了模式植物烟草。对 3种转基因植物进行了分子检测 ,转化再生苗 95 %为PCR阳性 ,Southern杂交结果进一步证明外源基因已经整合到了烟草基因组中 ,RT PCR检测表明外源基因可以在转基因烟草内正常转录。对T0 代转基因烟草进行烟草野火病的抗病性实验 ,从 3种转基因烟草中都得到了抗病植株 ,病情指数分析的初步结果显示 ,双价转基因烟草抗病性最好 ,apidaecin的次之 ,Shiva I的最差。

高效抗细菌植物表达载体的构建

噬菌体T7 DNA用AvaⅡ酶解后,PCR扩增获得T7溶菌酶基因.DNA序列分析表明,T7溶菌酶基因的核苷酸序列与国外发表的序列有99.5%的同源性,推测的氨基酸序列完全一致.又用PCR法改造了克隆于pUC19中的烟草病原相关蛋白1b(PR-1b)的信号肽基因和抗菌肽Shiva-Ⅰ基因,将信号肽基因分别融合于T7溶菌酶基因和Shiva-Ⅰ基因的5’末端,并将两个融合基因分别置于一个植物表达载体中的两个表达框架内,以使转基因植物中T7溶菌酶基因和Shiva-Ⅰ基因同时表达且表达产物可分泌到细胞外.本工作为用植物基因工程方法培育抗细菌转基因作物打下了基础.