基于生物信息学预测王不留行改善痛风/高尿酸血症的作用机制

目的借助生物信息学技术探讨王不留行改善痛风和高尿酸血症(HUA)的作用机制。方法在中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)筛选王不留行的活性成分,在GeneCards数据库、靶点数据库(TTD)、人类在线孟德尔遗传数据库(OMIM)中检索与痛风/HUA相关靶点,并与获得的药物成分靶点取交集,利用CytoScape软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络;将“药物-疾病”交集基因上传至DAVID数据库进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,对主要活性成分及对照药(非布司他、苯溴马隆、别嘌醇)与高频靶标进行分子对接。结果共得到4个王不留行潜在活性成分,2329个疾病靶点和154个药物靶点,取交集获得94个“药物-疾病”共同靶点。GO富集分析条目共获取698条(P<0.01),主要涉及细胞凋亡的负调节、细胞外隙、酶结合等;KEGG富集共获取信号通路158条(P<0.01),包括低氧诱导因子-1、肿瘤坏死因子(TNF)、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B通路等。分子对接结果显示王不留行潜在活性成分均与TNF、抑癌基因53(TP53)、白细胞介素-6(IL-6)等核心靶点结合性良好,且优于对照药。结论王不留行的有效成分通过多靶点、多通路改善痛风/HUA,且疗效可能优于临床一线用药。

矢志方减轻高尿酸血症大鼠肾小管损伤的作用机制研究

目的探索矢志方减轻高尿酸血症大鼠肾小管损伤的作用机制。方法32只大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、矢志方组、别嘌醇组,每组8只;以750 mg/kg氧嗪酸钾造模,各组分别于实验的第3、5、7、11周末留取10只大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)水平;免疫组化法、Real-time PCR、Western blot检测Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)和骨桥蛋白(OPN)的表达。结果第11周末,模型组NAG水平显著高于正常组(P<0.05),RBP水平较正常组在第5、7、11周末均有不同程度升高(P<0.05),用药后可降低尿中RBP排泄。矢志方组、别嘌醇组collagenⅢ、OPN mRNA的表达自3周起较模型组升高(P<0.01,P<0.05),两组各时间节点OPN mRNA的表达无差异(P>0.05)。与模型组比较,各时间段各组大鼠肾组织中collagenⅢ表达明显降低(P<0.05);除第3周外,各组大鼠肾组织中OPN表达明显降低(P<0.01)。第3周末,矢志方组、别嘌醇组之间collagenⅢ表达无差异(P>0.05);第3、7周末两组之间OPN表达无差异(P>0.05)。免疫组化可见模型组collagenⅢ和OPN表达于肾小管及间质,肾小球在模型后期有少量表达。结论高尿酸血症大鼠肾小管微量蛋白排泄增多,高尿酸血症存在明显的肾小管和间质损伤,矢志方具有减轻肾小管损伤、抑制肾脏间质炎症、缓解肾纤维化的作用。

矢志方对不同病程高尿酸血症大鼠氧化应激的改善作用

目的:以氧嗪酸钾(OA)建立高尿酸血症大鼠模型,研究矢志方对不同病程高尿酸血症大鼠氧化应激损伤的改善作用。方法:160只SD大鼠分为4组:正常组、模型组、矢志方组、别嘌醇组,每组40只,以750 mg·kg^(-1)·d^(-1)OA氧嗪酸钾灌胃建立高尿酸血症大鼠模型,以矢志方或者别嘌醇作为干预药物,实验第3、5、7、11周末各组取10只大鼠检测ROS、线粒体ROS、MDA、SOD、NO、GSH-Px、CAT水平,PCR、Western Blot及免疫组化法检测过氧化产物3-NT、4-HNE mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,矢志方组可降低不同病程高尿酸血症大鼠ROS及线粒体ROS水平,增加抗氧化系统SOD、NO、GSH-Px、CAT的浓度,降低过氧化系统MDA浓度,抑制3-NT、4-HNE mRNA和蛋白的表达。结论:矢志方可改善不同病程阶段的高尿酸血症大鼠肾脏氧化应激损伤。

矢志方抑制NLRP3减轻高尿酸血症小鼠肾小管上皮细胞焦亡的研究

目的:探讨矢志方抑制高尿酸血症(H U A)小鼠肾小管上皮细胞焦亡和抗炎的作用机制。方法:40只BALB/c小鼠随机分成正常组、模型组、别嘌醇组、矢志方组。除正常组外,其余组采用腹腔注射氧嗪酸钾(P O)诱导H U A,分别给予矢志方、别嘌醇治疗,观察血清尿酸(S U A)、血清肌酐(S C r)、血尿素氮(BUN);HE染色观察病理改变;Western Blot和免疫荧光技术检测焦亡相关蛋白表达;ELISA检测IL-1β、IL-18。培养人肾小管上皮细胞(HK-2),采用尿酸(UA)干预,分别给予矢志方、炎性小体3(NLRP3)抑制剂(MCC950)处理48 h,CCK-8法检测细胞活力;Western Blot检测焦亡相关蛋白表达;ELISA检测细胞上清IL-1β、IL-18含量。结果:与正常组小鼠比较,模型组SCr、BUN、SUA显著升高(P<0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1、Cleaved-caspase-1、GSDMD、pro-IL-1β、IL-1β、IL-18表达升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18水平升高(P<0.01);与模型组比较,矢志方可有效降低HUA小鼠的SUA、SCr、BUN水平(P<0.01)和血清IL-1β和IL-18分泌水平(P<0.01,P<0.05)。与空白组细胞比较,UA诱导细胞NLRP3、cleaved-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD表达升高(P<0.01);矢志方和MCC950可显著抑制UA诱导下细胞NLRP3、Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD的表达(P<0.01,P<0.05),减少IL-1β、IL-18产生(P<0.01,P<0.05)。结论:矢志方靶向抑制NLRP3,抑制HUA小鼠肾小管上皮细胞焦亡,减轻肾脏炎性损伤。