不同年限园参和石柱参不同部位的显微定量鉴别

目的采用显微定量法对园参和石柱参的不同年限进行鉴别。方法采用显微定量法,以人参的草酸钙簇晶为显微特征物,根据不同年限不同部位特征物含量及形态上的差异对园参和石柱参的不同年限进行鉴别。结果随着年限的增长全参、芦头、主根、侧根、须根的草酸钙簇晶的含量上升且体积增大,但石柱参的须根草酸钙簇晶含量随着年限的增长而下降,而园参须根中的特征物含量明显升高,可用于两者的鉴别。其中芦头内的草酸钙簇晶含量明显高于其他部位。根据草酸钙簇晶含量和形态上的差异,可以区分园参和石柱参的不同年限。结论显微定量法鉴别园参和石柱参的不同年限方法可行。

HPLC法测定石柱参药材及其片剂中5种人参皂苷的含量

目的建立测定石柱参药材及其片剂中5种人参皂苷含量的方法,为石柱参的质量控制提供科学依据。方法色谱柱为Kromasil C18柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;柱温为25℃;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为203 nm。结果5种人参皂苷的色谱峰与相邻色谱峰分离良好。人参皂苷Rg1质量浓度在19.8-198 mg·L^-1内、人参皂苷Re质量浓度在20.6-206 mg·L^-1内、人参皂苷Rb1质量浓度在33.0-330 mg·L^-1内、人参皂苷Rc质量浓度在18.0-180 mg·L^-1内、人参皂苷Rb2质量浓度在13.0-130 mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系。石柱参药材中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2的平均回收率分别为99.8%、98.3%、99.2%、95.4%、96.8%,RSD分别为3.0%、3.0%、2.6%、2.2%、2.8%（n=6）;石柱参片剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2的平均回收率分别为100.2%、99.0%、99.7%、96.4%、98.4%,RSD分别为2.2%、3.1%、3.6%、2.6%、2.8%（n=6）。结论本实验中所建立的方法可用于石柱参药材及其片剂的质量控制。

石柱参人参皂苷合成酶基因的克隆及表达量测定

以人参为对照组,采用HPLC法测定5a生石柱参样品中6种人参皂苷(Rb1、Rb2、Rc、Re、Rg1、Rg2)的质量分数,采用实时荧光定量PCR技术对不同生长期人参皂苷合成酶基因(SS、CYP82D47、CYP716A42)的表达量进行比较,以探究石柱参人参皂苷质量分数较低的原因;并对石柱参CYP82D47基因进行克隆、测序及生物信息学分析,获得石柱参系统发育树。结果表明:石柱参人参皂苷合成酶基因的表达量在根、茎、叶组织中具有高度相似性,却也具有高度组织差异性,比如SS基因在石柱参根、叶中表达活跃,在茎中表达量有限;CYP82D47基因在石柱参中的表达部位主要是茎、叶组织;而CYP82D47基因在在根、茎、叶组织中表达较活跃,尤其是根、叶中;此外,人参皂苷合成酶基因CYP82D47的表达量相对较低是造成石柱参人参皂苷质量分数较低的原因之一;由系统进化树可见,石柱参与竹节参、西洋参、三七及刺五加的亲缘关系较近,结果与物种进化程度相符合。

不同年限园参和石柱参不同部位人参皂苷的含量测定

目的:在人参皂苷的生产中,根据其不同部位、不同产地、不同年限的差异选择适宜的提取分离样品。方法:采用HPLC法测定不同产地园参和石柱参不同部位人参皂苷化合物的含量。结果:提取人参皂苷Rg1时建议优先选择桓仁7年生园参;提取人参皂苷Re时建议选用低年限的人参样品;提取人参皂苷Rb1时建议选用须根。结论:不同年限、不同产地、不同部位的人参皂苷含量差异较大,研究为增加人参皂苷的提取率、降低生产成本提供参考。

原子吸收分光光度法测定石柱参中重金属含量

目的:建立原子吸收分光光度法,测定石柱参中铅、镉、砷、汞、铜重金属含量,并与林下山参、普通人参及边条人参相比较。方法:以原子吸收分光光度法在波长283.3 nm处检测铅含量,在波长228.8 nm处检测镉含量,在波长193.7 nm处检测砷含量,在波长253.5 nm处检测汞含量,在波长324.8 nm处检测铜含量。结果:3批石柱参中铅、镉、砷、汞、铜含量依次为0.08~0.59、0.07~0.15、0.08~0.11、0.01~0.02、4.51~5.86 mg/kg,林下山参中铅、镉、砷、汞、铜含量依次为0.05、0.06、0.11、0.01、3.25 mg/kg;普通人参中铅、镉、砷、汞、铜含量依次为0、0.08、3.85、0.41、8.53 mg/kg;边条人参中铅、镉、砷、汞、铜含量依次为0、0.10、0.15、0.01、9.51 mg/kg。结论:3批石柱参样品中含量均符合中国商务部于2005年发布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》(WM/T2-2004)所规定的药用植物及制剂的绿色品质标准。

不同参龄的石柱林下山参外观形态及7种主要人参皂苷的含量测定

目的:建立不同参龄石柱林下山参外观形态与人参皂苷含量之间的相关性。方法:采用高效液相色谱法分析人参样品,采用外标法测定人参样品中的各成分含量,采用SPSS软件分析石柱林下山参外观形态与人参皂苷含量的相关性。结果:不同参龄石柱林下山参中大部分成分的含量呈现出先升高,随后保持稳定,最后略有降低的累积趋势。石柱林下山参的总重量、总长度以及芦头重百分比与生长年限呈正相关,而须根重百分比与生长年限呈负相关。人参皂苷的含量与芦长/主根长百分比呈正相关。结论:芦长与人参皂苷含量存在相关性为通过芦长对人参分等的传统分等方法提供科学依据。

石柱参(人参)产地适宜性研究

目的:分析石柱参在中国的适生区域,为人工种植适宜区筛选提供科学依据。方法:以辽宁省宽甸县石柱参分布区最适宜生长环境因子为依据,利用中药材产地适宜性分析地理信息系统(TCMGIS),区划石柱参在全国的适宜产地。结果:相似度为95%～100%的适宜面积15943.93km^2,辽宁占96.44%,吉林占3.56%;相似度为90%～95%的适宜面积20070.83 km^3,主要分布在辽宁,占73.88%,吉林和秦岭中东部地区也有一定份额。结论:研究结果覆盖了石柱参现代分布区,预测了石柱参潜在适宜分布区;验证了TCMGIS系统应用于石柱参适生地分析的科学性和准确性;对于规划人参种植区域,保护优良品种,把人参生产规划在真正的适宜产地区域具有重要的参考意义。

石柱和抚松产人参叶指纹图谱分析

[目的]建立石柱和抚松人参叶药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以探讨两产地人参叶皂苷含量的差异。[方法]采用HPLC法分别测定采于辽宁宽甸石柱、吉林抚松的人参叶HPLC指纹图谱,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对各样品进行分析。[结果]10批人参叶样品的HPLC指纹图谱相似度均大于0.9,标定了22个共有峰,不同产地人参叶共有峰相对含量存在一定的差异。[结论]建立的人参叶HPLC指纹图谱分析方法科学可靠,可为人参叶药材质量研究提供参考。

石柱参显微定量与红外光谱鉴定研究

目的对1~15年不同年限石柱参的根际横切面进行显微观察,并且测定不同年限石柱参簇晶的显微特征指数。对相同年限的西洋参、石柱参、人参进行定性鉴定。方法采用显微指数测定法;傅里叶变换红外光谱,波数范围3500~750 cm-1,扫描次数16,分辨率4 cm-1。结果1~15年不同年限石柱参根际横切面在木栓层细胞、栓内层细胞、韧皮部、树脂道、形成层、木质部均有差别,且不同年限石柱参的簇晶显微特征指数随着年限的增加呈增长趋势,4~5年簇晶显微特征指数上升明显。石柱参、园参、西洋参均有相似位置的人参皂苷吸收峰,不同年限的石柱参之间的红外指数I值不同,相同年限的西洋参、园参、石柱参的特定吸收峰位置的峰形和位移不同。结论建立显微鉴定和傅里叶红外变换方法对不同年限的石柱参以及不同种类的人参进行鉴别,在保证药材形态完整的同时鉴别石柱参的年限和品种。

石柱参SzPLC1基因的生物信息学分析及胁迫应答

利用RT-PCR结合RACE技术,克隆石柱参磷脂酶C(SzPLC1)基因,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行数据分析,同时探讨干旱胁迫对SzPLC1表达的影响。结果显示:该基因全长1725 bp,开放阅读框(ORF)长度为1455 bp,编码484个氨基酸,分子质量为54.8 ku,具有2个跨膜结构域X和Y区;SzPLC1蛋白二级结构包括无规则卷曲(40.91%)、α-螺旋(37.54%)、延伸链(18.39%)和β-转角(4.96%)。系统进化分析表明石柱参SzPLC1蛋白与萝卜(Raphanus sativus,XP_018480211.1)的RsPLC1蛋白表现出较高的同源性(95%)。String蛋白互作网络分析表明,与SzPLC1蛋白互作的蛋白质共有10个,均为磷脂酰肌醇信号通路的重要酶类,说明SzPLC1是磷脂酰肌醇信号通路中关键的酶。qRT-PCR分析表明,在干旱处理下,SzPLC1的表达量明显上调,说明SzPLC1蛋白具有抗干旱胁迫的功能。

石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析

以石柱参近缘种野生山参的人参皂苷合成酶基因SS为模板,利用NCBI中的primer-BLAST设计特异性引物,应用PCR技术从石柱参叶片基因组DNA克隆了SS基因。序列分析显示,克隆的基因片段为1285 bp,能够编码25个氨基酸以上的ORF(Open Reading Frame)有10个,其中最长能够编码295个氨基酸。NCBI序列对比显示,该基因与人参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为97.05%,与西洋参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为96.63%。这些数据表明,从石柱参克隆的基因为其人参皂苷合成酶基因SS。

石柱参外观性状与人参皂苷含量的相关性研究

目的通过测定石柱参中9种主要人参皂苷,探究石柱参外观性状与人参皂苷含量的关系。方法利用高效液相色谱法,采用Chiral(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈-磷酸水溶液(0.1%)为流动相梯度洗脱,测定石柱参中主要人参皂苷的含量。结果在大多数情况下,相同生长年限的线芦及小竹节芦石柱参重量较小,草芦及圆膀圆芦石柱参重量较大;相同生长年限的线芦及小竹节芦石柱参中主要人参皂苷含量之和高于草芦及圆膀圆芦类型的石柱参;同株石柱参不同部位主要皂苷含量之和:须根>芦头>小艼>大艼>主根;相同品类的石柱参,随着生长年限的增加,主要人参皂苷含量之和在最初10年有所增加,12~15年后趋于稳定。结论不同品类石柱参中,线芦和小竹节芦类型的石柱参质量优于圆膀圆芦和草芦;人参皂苷在12~15年左右趋于稳定。人参品质与石柱参的外观性状及生长年限具有一定相关性。

论长白山人参主要品种类型栽种方式及其商品分类

本文论述了长白山人参主要品种类型的栽种方式、总结其规范化种植的工艺流程、对各人参品种类型栽种方式、技术要点、品种退化的主要原因及其解决措施作了详细的研讨。强调指出人参的各种栽种方式必须实施GAP标准化管理才是最好的栽种方式。重点报告了人参主产区,最新最好的栽种方式。并对人参商品分类及野山參分等质量标准中的野山参、移山参的定义提出修改意见,为提高我国人参产品质量在国际市场上的竟争能力,保持人参产业可持续发展提供科学依据。

HPLC测定不同年份人参药材中3种人参皂苷的含量

本文涉利用高效液相色谱对15年、18年和22年不同年份石柱山参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量进行了系统比较。实验结果表明三种人参皂苷人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1在100min内基线分离,线性关系良好。随着年份增加,人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量都有不同程度的提高。

《石柱参鉴定及分等质量》起草说明

本文就2019年辽宁省市场监督管理局发布的辽宁省地方标准(DB21/T 3181-2019)《石柱参鉴定及分等质量》的起草进行说明,标准首次引入“年均增重”,作为人参等级要求项目,为石柱参的质量控制提供了参考。

石柱参中8种人参皂苷的含量测定

目的:测定石柱参中8种人参皂苷Rg1,Re,Rf,Rg2,Rb1,Rc,Rb3,Rd的含量,并建立同时测定8种人参皂苷含量的方法。方法:采用HPLCAgilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-0.05%磷酸水,梯度洗脱,体积流量1 mL.min-1,柱温30℃,检测波长203 nm。结果:8种人参皂苷Rg1,Re,Rf,Rg2,Rb1,Rc,Rb3,Rd质量分数分别为1.32,2.08,0.72,0.24,2.12,1.06,0.35,0.55 mg.g-1。结论:首次对石柱参药材中的人参皂苷进行了含量测定,所建立的方法分离度高,方法学验证符合要求,可作为参类药材同时测定8种人参皂苷含量的方法。

降解组测序技术对人参miRNA靶基因的分析鉴定

目的分析鉴定人参miRNA靶基因。方法采用降解组测序技术对石柱参(Shizhu ginseng)、园参(Yuan ginseng)的miRNA及靶基因进行检测;利用公共数据库KEGG/NR/GO数据库对降解组基因进行功能注释;通过荧光实时定量PCR(q RT-PCR)技术验证石柱参、园参的miRNA及靶基因表达量。结果共得到8个miRNA家族的13个靶基因;利用KEGG/NR/GO数据库分析发现该miRNA的靶基因类型主要是转录因子、应答因子及信号转导通路等。对5个差异表达mi RNAs:aqc-miR-159、bdi-miR162、cpa-miR319、pgi-miR4376、smo-mi R396及其靶基因进行的q RT-PCR验证结果与降解组测序结果一致。结论明确了部分人参miRNA的靶基因,为进一步研究人参miRNA的可能功能奠定基础。