Spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡影响及其机制初步研究

为探讨从绶草中分离得到的新化合物spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及可能机制,利用MTT法检测spiranthesphenanthrene A对AGS细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明:spiranthesphenanthrene A呈剂量和时间依赖性地抑制AGS细胞活力(P<0.05);与空白对照组相比, spiranthesphenanthrene A可显著诱导AGS细胞凋亡,且呈剂量依赖性(P<0.05)。进一步研究表明, spiranthesphenanthrene A可显著上调凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax和Cytochrome C (Cyt-C)的表达,并下调Bcl-2的表达(P<0.05)。这一研究提示spiranthesphenanthrene A能抑制AGS细胞活力,并通过内源性线粒体途径诱导细胞凋亡。

基于HPLC-QAMS多指标成分、化学计量学联合熵权TOPSIS法的盘龙参综合质量评价

目的:建立不同产地盘龙参中9个成分含量同步检测方法,筛选影响其质量的差异标志物,对其质量差异性进行评价。方法:对7省18个批次盘龙参样品进行超声提取,提取物采用高效液相色谱法检测,根据2020年版《中华人民共和国药典》四部方法测定其浸出物、总灰分及酸不溶性灰分含量;采用化学识别模式和熵权逼近理解排序(EW-TOPSIS)法建立盘龙参质量优劣评价模型,综合评价其质量差异性。结果:盘龙参酚A、盘龙参二聚菲酚、没食子酸、槲皮素、5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮、山柰酚、樱花素、豆甾醇、β-谷甾醇分别在0.52~13.00、0.36~9.00、12.95~323.75、3.09~77.25、4.66~116.50、6.85~171.25、0.29~7.25、0.23~5.75、1.45~36.25μg/mL(r>0.999)范围内线性关系良好,平均加样回收率为96.73%~100.17%(RSD<2.0%);9个成分含量差异较大,浸出物含量≥24.4%,总灰分含量≤2.5%,酸不溶性灰分含量≤1.1%。聚类分析和主成分分析结果均显示18批样品分为3组,相邻产区聚为一组;盘龙参酚A、没食子酸、5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮、山柰酚和β-谷甾醇可能是影响盘龙参产品质量主要潜在标志物;熵权TOPSIS法分析结果显示18批盘龙参质量评价相对贴近度在0.0720~0.6594之间,其中S13最大(0.6594)。结论:建立的多指标成分定量及化学计量学联合EW-TOPSIS法可用于评价盘龙参综合质量。

盘龙参化学成分预实验

目的采用系统预试法对盘龙参可能的化学成分进行预实验,初步探索盘龙参的化学成分。方法采用试管反应法、纸反应法,对盘龙参水、95%乙醇、石油醚提取物进行研究,通过多种指示剂和显色剂的显色反应或沉淀反应,对盘龙参可能含有的化学成分进行初步研究。结果盘龙参可能含有氨基酸、多肽、糖类、鞣质、有机酸、植物甾醇、三萜类、挥发油及油脂类成分、生物碱、黄酮类、酚类、强心苷等成分。结论初步确定盘龙参含有多种有效成分,为进一步研究盘龙参的生物活性成分及开发利用提供了实验基础。

基于均匀设计优化绶草体细胞胚胎发生发育体系及扫描电镜观察

以绶草Spiranthes sinensis茎尖为外植体,应用均匀设计法对各步骤各主要因子和水平的作用进行了试验探讨.结果表明,绶草茎尖胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为:LS+6-BA0.78 mg.L-1+NAA2.0 mg.L-1,诱导率为98.7%;体胚发育及植株再生的适宜培养基为:LS+6-BA1.00 mg.L-1+IAA0.08 mg.L-1.在合适的培养条件下,体胚萌发率达到99%,萌发的体胚成苗率达到100%.扫描电镜的观察证实了绶草体细胞胚胎再生的实质.

濒危植物盘龙参种子的非共生萌发及种苗的快繁研究

以盘龙参种子为材料,筛选离体条件下适宜种子非共生萌发、种苗快繁的培养基。结果表明:盘龙参种子在无植物生长物质的培养基中能够萌发,但不能发育成苗;在含有1.0mg·L-1 KT、0.1mg·L-1 IAA和0.1mg·L-1 GA3的培养基中萌发,并能进一步发育形成种苗;在较高浓度生长素(1.2mg·L-1 NAA)的培养基中不能萌发。种苗在较高浓度细胞分裂素和较低浓度生长素配比的培养基中能够增殖,最高增殖系数可达到2.8,转入壮苗生长培养基中培养80d后可以移栽温室。最适增殖培养基为1/2MS+12.0mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA+10.0mg·L-1腺嘌呤;最适壮苗生根培养基为1/2MS+1.0mg·L-1 KT+0.1mg·L-1 IAA+10.0mg·L-1腺嘌呤。

盘龙参中的两个新二氢菲类(英文)

采用硅胶和凝胶柱色谱,以及制备性薄层色谱等多种分离手段,从盘龙参全草中分离得到了2个新的9,10-二氢菲类化合物,运用NMR和MS等波谱技术分别鉴定为4-羟基-2-甲氧基-8-呋喃[4',5'∶7,8]-9,10-二氢菲(1),4-羟基-2-甲氧基-8-{2',2'-二甲基吡喃[5',6'∶7,8]}-9,10-二氢菲(2)。

基于SRAP分析的盘龙参DNA提取

以盘龙参为材料,采用CTAB法提取基因组DNA,探讨SRAP-PCR反应体系中模板DNA浓度对扩增的影响。结果表明:该CTAB法提取基因组DNA的OD260/OD280为1.81,浓度为4.35μg/μL。该CTAB法提取的基因组DNA纯度好,片段完整,无降解;在20μL反应体系中,模板DNA浓度为3.0 ng/μL时,重复性和稳定性较好,适于SRAP-PCR技术。

绶草萃取物体外抗氧化活性及其总酚含量比较

采用DPPH法、ABTS法测定绶草不同有机溶剂萃取物的体外抗氧化活性,并用福林酚法测定其总酚含量。结果表明:绶草各溶剂萃取物均有明显的体外抗氧化活性,且呈剂量依赖性;各溶剂萃取物的抗氧化活性强弱及总酚含量大小顺序均为:乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>石油醚萃取物。说明绶草不同萃取物体外抗氧化活性与总酚含量呈正相关,其中乙酸乙酯萃取物的清除DPPH·及ABTS^+·的IC_(50)值分别为(45.270±0.005),(75.420±0.015)μg/mL,总酚含量为(13.861±0.002)%。

不同培养条件对绶草菌根真菌生长的影响

以兰科植物绶草菌根真菌为试材,通过分离、纯化、培养其菌根菌的方法,设置温度、光照、碳源、氮源和酸碱度等培养条件进行单因素试验,对菌根真菌在不同培养条件下的生长状况及培养性状进行了研究。结果表明:该绶草菌根菌在5～30℃时均能生长,最适温度为25℃;在各种光照处理下均能生长,但在黑暗条件下绶草菌根菌生长最好;偏酸性环境(pH 4.0～5.0)更有利于该菌根菌生长;对碳源的利用上,对果糖利用最好;对氮源的选择上,在硝酸铵为氮源的培养基上生长最好。

绶草的组织培养与快速繁殖研究

以野生花卉植物绶草的肉质根、幼叶、花序轴为外植体,建立组织培养快繁体系。试验结果显示:绶草组织培养较理想的外植体材料为花序轴,诱导率达到83%;最适诱导培养基为MS+3.0%蔗糖+0.75%琼脂+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;最适增殖培养基为MS+3.0%蔗糖+0.75%琼脂+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+椰汁100g/L;最适生根培养基为1/2MS+2.0%蔗糖+0.5%琼脂+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭0.5g/L。

綬草对四氧嘧啶致高血糖模型小鼠血糖的影响

綬草又名盘龙参,具有滋阴益气、凉血解毒的功效.《湖南药物志》载"止虚热口渴".糖尿病中医辨证属"消渴"病范畴.故以綬草70%乙醇提取物为受试药,以经口灌胃方式作用于四氧嘧啶致糖尿病小鼠,分别于给药7天和14天后剪尾测定血糖,以血糖值作为检测受试药降糖效果的指标.结果表明綬草70%乙醇提取物具有控制糖尿病小鼠血糖升高的作用.

绶草高频再生体系建立的研究

[目的]建立绶草高频再生体系。[方法]以野生绶草的花序轴为外植体,对外植体进行消毒和预培养后,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA筛选最适诱导培养基;以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和IAA筛选最适增殖培养基;以1/2 MS为基本培养基,添加不同浓度NAA筛选最适生根培养基。[结果]最适诱导培养基为MS+6-BA2.0,最适增殖培养基为MS+6-BA1.5+IAA0.4,最适生根培养基为1/2MS+NAA1.5。[结论]该研究对绶草优良品种的改良和次级代谢产物研究有重要意义。

中药盘龙参ITS的序列分子鉴定研究

为研究盘龙参DNA分子鉴定方法,采用改良CTAB法提取盘龙参总DNA,根据rDNA ITS基因片段(AB 740176)设计引物,对样本进行PCR扩增,扩增产物克隆并测序,MEGA 5.2软件分析。结果表明:扩增得到的rDNA ITS片段总长为667 bp,ITS变异位点比率为17.10%,信息化位点比率为6.56%;通过ITS序列构建系统树进行聚类分析表明,ITS序列在绶草属种内是保守的,可作为中药盘龙参分子鉴定标记,而绶草属的系统发生关系尚需进一步研究。

不同产地绶草中总黄酮的含量测定

采用分光光度法,检测波长为510 nm,以芦丁为对照品,测定绶草(Spiranthes sinensis(Pers)Ames)中总黄酮的含量。总黄酮含量在0.004 03～0.020 16 mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.997),平均回收率(n=6)为97.68%,RSD为1.93%。该方法操作简便、快速、准确,可用于绶草中总黄酮含量测定。

盘龙参内生真菌分布特征的研究

从盘龙参[Spiranthes sinensis(Pers)Ames]的根、茎、叶中共分离得到49株内生真菌,经形态观察,鉴定为3目、4科、9属。其中曲霉属、镰刀孢属、丝核菌属为优势种群,分别占已分离菌株数的16.3%、14.3%和14.3%。不同组织部位所分离得到的内生真菌在种群及数量上都存在差异:根中的优势属为镰刀孢属,占到了根中分离菌种数的23.5%;叶中的优势属是链格孢属,占到叶中分离菌种数的26.3%;茎中的优势属为长蠕孢属,占到叶中分离菌种数的23.1%。表明盘龙参内生真菌的分布具有一定的组织专一性。

绶草化学成分和药理作用研究进展

绶草属兰科草本植物,为我国珍稀药材,已列入国家二级保护植物,具有滋阴益气、补肾益阳、清热凉血、止咳润肺、消炎、解毒、强筋骨、祛风除湿的功能,外用则治疗毒蛇咬伤、烫伤、疮痈等功效,经多年研究发现了多种化合物,包括二氢菲类、黄酮类和苯丙素类、甾醇类等化合物。其主要化学成分在抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗血糖和血脂及抗菌等方面疗效显著。由于近年来国内外研究人员对绶草的研究与综述较少,故对国内外近30年来的研究成果进行了分类和评述。为绶草进一步的研究和合理应用提供参考。

濒危药用植物盘龙参根的显微结构及其内生真菌分布研究

采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法,对盘龙参根的显微结构及其内生真菌的分布进行了研究。结果表明：盘龙参的根由表皮、皮层和中柱组成,表皮上有根毛,皮层所占根径的比例达70%以上,其内草酸钙针晶散在或成束于皮层细胞中。中柱由18~22个木质部与韧皮部相间排列组成。盘龙参根的皮层细胞和中柱中有内生真菌的分布;内生真菌由表皮、外皮层侵入到皮层薄壁细胞和中柱的薄壁细胞中,在皮层和中柱中形成菌丝和菌丝结,并扩展成一定的侵染区域,同时在部分皮层细胞中菌丝结已被消化吸收。

濒危药用植物盘龙参根际真菌与内生真菌的多样性研究

对盘龙参的根际真菌和内生真菌进行分离鉴定并进行比较分析;结果表明,分离得到盘龙参的根际真菌分属于9个属的真菌:木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、镰刀孢属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、毛霉属(Mucor)、丝核菌属(Rhizoctonia)、轮枝孢属(Verticillium)、拟茎点霉属(Phomopsis);从盘龙参根、茎、叶等组织分离得内生真菌分属13个属:丝核菌属(Rhizoctonia)、青霉属(Penicillium)、木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、镰刀孢属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)、头孢霉属(Cephalosporium)、小孢霉属(Microsporum)、枝孢属(Cladosporium)、小尾孢属(Cercosporella)、地霉属(Geottrichum)、长蠕孢属(Helminthosporium)和弯孢霉属(Currularia)。盘龙参根际真菌和内生真菌存在丰富的多样性和一定的相关性。

盘龙参组织培养的初步研究

以盘龙参(Spiranthes sinensis)的花梗为外植体,探讨了不同前灭菌处理及植物生长调节剂对盘龙参花梗组织培养的影响。结果表明:75%的酒精浸30s的前灭菌处理效果较好;植物生长调节剂组合6-BA0.1(mg/L)+NAA1(mg/L)组合和6-BA1.5(mg/L)+NAA1(mg/L)组合的效果较好,其生存率分别达到了60%和66%。

井冈山大学绶草群落植物区系与物种多样性研究

采用样地调查方法,对分布于井冈山大学的国家Ⅱ级保护植物绶草群落的物种组成、区系成分和物种多样性进行了研究。结果表明:井冈山大学绶草群落物种组成简单,共有维管植物16科20属20种,其中蕨类植物和裸子植物均有1科1属1种,被子植物14科18属18种。井冈山大学绶草群落植物科的区系地理成分较简单,以世界分布为主,所占比例高达87.5%;属的区系地理成分较复杂,有7个分布区类型3个变型,区系成分以热带性成分占优势,温带性成分和世界分布所占比例仍较大。井冈山大学绶草群落垂直结构简单,除Pielou指数较高外,其它3种物种多样性指数均较低,群落物种丰富度、Simpson指数、Shannon-wiener指数和Pielou指数的平均值分别为6.20、0.78、2.36和0.91;10个样地间的各种多样性指数测值存在一定的差异,4种多样性指数在绶草群落中的变化趋势不一致。加强绶草自然生长环境和群落物种多样性的保护、合理开发利用是绶草的保护利用策略。