首乌丸对卵巢早衰模型大鼠SIRT1/PGC-1α/Cytochrome C通路的影响

目的探讨首乌丸是否通过调控线粒体介导的细胞凋亡通路抑制卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)进展。方法60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、首乌丸4周组、首乌丸6周组、首乌丸预防组、补佳乐组。腹腔注射去氧乙烯基环己烯(deoxyvinylcyclohexene,VCD)建立POF大鼠模型,予相应药物灌胃治疗后,采用Elisa法检测各组大鼠血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织结构变化,电镜观察卵巢超微结构变化,荧光标记TUNEL法检测卵巢细胞凋亡水平,荧光定量PCR及Western blot检测大鼠卵巢组织中沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、过氧化物酶增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator1α,PGC-1α)、抑凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、促凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(bcl2-associated X protein,Bax)的mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血清促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平显著升高(P<0.01),抗缪勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH)、雌激素(estradiol,E2)水平显著降低(P<0.01);大鼠卵巢组织结构被破坏,各级卵泡减少,卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)内线粒体减少;细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);SIRT1、PGC-1α及Bcl-2的mRNA及蛋白表达均显著下降(P<0.01),Cyt C及Bax的mRNA及蛋白表达均显著上升(P<0.01)。与模型组比较,首乌丸各治疗组血清性激素水平均显著改善(P<0.01,P<0.05);大鼠卵巢萎缩减轻,各级卵泡增多;卵巢超微结构改善,线粒体数量增加,嵴增多;细胞凋亡指数显著下降(P<0.05);SIRT1、PGC-1α及Bcl-2的mRNA及蛋白表达均显著上升(P<0.05),Cyt C及Bax的mRNA及蛋白表达均显著下降(P<0.05),其中首乌丸预防组的作用最明显。结论首乌丸可以延缓POF进展,早期预防作用更显著;其具体机制可能与调节线粒体介导的SIRT1/PGC-1α/Cyt C细胞凋亡通路,减少卵巢GCs凋亡有关。

高效液相色谱法测定首乌丸中大黄素的含量

目的建立首乌丸中大黄素含量的测定方法。方法运用正交实验优化样品处理的提取条件，采用高效液相色谱法检测大黄素含量，色谱柱为UhimateXB—C18（5μm，250mm×4．6mm），流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（87：13），检测波长254nm。结果大黄素在1．89～60．37μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0．9998，游离大黄素和总大黄素的平均加样回收率分别为100．16％和99．87％，RSD分别为0．91％和1．50％。结论此法简便、准确、快捷，可用于首乌丸的质量控制。

HPLC-MS法测定首乌丸中五种蒽醌类成分的含量

目的建立首乌丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚等五种蒽醌类成分的含量测定方法。方法 HPLC-MS联用法对首乌丸中五种蒽醌类物质的含量同时测定。色谱条件为:Phenomenex Luna C18(3μm,150 mm×2 mm)柱,流动相:甲醇-5 mmol/L醋酸铵溶液(90∶10),流速:0.2 mL/min,电喷雾型质谱检测器。结果大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.18～56.6,0.016～10.03,0.024～14.94,0.18～11.33,0.011～6.85 ng范围内线性良好;r分别为0.999 8,0.999 9,0.998 8,0.999 9,0.999 9;水解前平均回收率分别为108.5%(RSD=0.93%),98.67%(RSD=1.57%),100.2%(RSD=0.69%),99.73%(RSD=1.27%),105.4%(RSD=1.54%);水解后平均回收率分别为99.67%(RSD=1.12%),99.21%(RSD=1.78%),98.94%(RSD=1.23%),98.32%(RSD=2.08%),96.10%(RSD=2.67%)。结论此法简便、准确、快捷,可用于首乌丸的质量控制。

近红外光谱技术快速测定首乌丸水分含量

目的应用近红外光谱技术测定首乌丸中水分的质量分数。方法烘干法测定115批首乌丸样品水分的质量分数,采集其近红外光谱数据,经一阶导数法与S-G平滑法预处理,结合偏最小二乘法建立测定首乌丸中水分质量分数的近红外光谱定量分析模型。结果该模型内部交叉验证决定系数为0.944,校正均方差为0.121,内部交叉验证均方差为0.205,验证集的预测均方差为0.127。结论该近红外光谱水分定量分析模型稳定,准确可靠,可用于首乌丸中水分质量分数的测定。

高效液相色谱法测定首乌丸中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量

目的高效液相法测定测定首乌丸中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷成分含量;方法采用RP-HPLC,色谱柱Ultimate XB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水(25:75);检测波长:320nm;流速:1mL.min-1;柱温30℃。结果 3批首乌丸中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量为3.895～4.136mg.g-1;结论该法稳定、简便,适用于首乌丸制剂质量控制。

近红外漫反射光谱法快速测定首乌丸中二苯乙烯苷的含量

目的:建立快速测定首乌丸中二苯乙烯苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定首乌丸中二苯乙烯苷的含量(作为实测值):色谱柱为ODS-C_18,流动相为乙腈-水(25∶75,V/V),流速为0.8 m L/min,检测波长为320 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。采用偏最小二乘法-近红外漫反射光谱法建立预测首乌丸中二苯乙烯苷含量的定量校正模型:根据实测值,采集校正集样品76份、验证集样品18份,以标准归一化法、一阶导数法联合滤波法预处理光谱,最佳波段为9 000~4 150 cm^(-1),主成分因子数为12。结果:首乌丸中二苯乙烯苷的含量测定方法学考察符合要求。二苯乙烯苷含量预测的定量校正模型内部交叉验证决定系数为0.991 90,校正均方根偏差为0.020 1,预测均方根偏差为0.023 6,交叉验证均方根偏差为0.076 29,预测值与实测值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法准确、稳定、简便,可用于首乌丸中二苯乙烯苷含量的快速测定。

首乌丸中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC法测定

目的:建立首乌丸中二苯乙烯苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,选用C18ODS(250mm×4.6mm)色谱柱。流动相:乙腈-水(20∶80)。检测波长:320nm。结果:二苯乙烯苷在0.4556-2.278μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,样品的平均加样回收率为96.28%,RSD=0.32%,n=5。结论:本法简便,快速,结果准确可靠,可作为该制剂定量控制依据。

首乌山楂降脂丸治疗高脂血症临床研究

目的:探讨首乌山楂降脂丸治疗高脂血症的临床疗效。方法:选取高脂血症患者140例,按随机数字表法分为两组,治疗组72例运用首乌山楂降脂丸(方药组成:山楂30 g,何首乌18 g,黄精18 g,三七(粉)9 g,决明子18 g,泽泻12 g,白术15 g,茯苓15 g,莱菔子15 g,神曲15 g,枸杞子15 g,瓜蒌15 g,丹参18 g,半夏12 g,白芍15 g,荷叶10 g,甘草6 g)治疗,对照组68例采用非诺贝特片治疗。2个月为1个疗程。结果:治疗组有效率为97.22%,对照组有效率为72.56%。两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:首乌山楂降脂丸具有补益肝肾、健脾祛湿、化痰祛瘀之功效,治疗高脂血症疗效显著。

RP-HPLC法测定首乌丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的：建立一种可测定首乌丸中补骨脂素和异补骨脂素的RP-HPLC方法。方法：采用Shim-packVP-ODS（250mm×4.6mm,5μm）为色谱柱;流动相为甲醇-水（45∶55）;检测波长为246nm;流速为1.0mL/min;柱温为40℃;峰面积外标法定量。结果：此法补骨脂素在9.10×10-4～0.2742μg范围内呈良好的线性关系,（r=0.99999）,平均回收率为97.8%,RSD为2.27%;异补骨脂素在9.90×10-4～0.2970μg范围内呈良好的线性关系,（r=0.99999）,平均回收率为100.4%,RSD 2.44%。结论：此方法简便、快速、准确可靠,可作为该制剂的质控方法。

HPLC法测定复方首乌地黄丸中二苯乙烯苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定复方首乌地黄丸中制何首乌的2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-0-/3-D-葡萄糖苷（简称二苯乙烯苷）的含量。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为WIech UItimateRXB-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-水（18∶82）,检测波长为320nm,流速为1.0m L·min-1。结果：二苯乙烯苷在0.052-1.05μg范围内线性关系良好（R=0.9999）。平均回收率为99.42%（RSD=0.52%n=6）。结论：此方法简单,快速,重现性好,可作为复方首乌地黄丸的质量控制方法。

高效液相色谱法测定首乌旱莲滴丸中葡萄糖苷的含量

目的:本文采用高效液相色谱法对首乌旱莲滴丸中葡萄糖苷进行含量测定。方法:流动相选用乙腈-水(25:75);检测波长为320nm。结果:本品重现性好,平均回收率X=99.6%,RSD%=1.75%。结论:该方法可以有效地控制制剂质量。

首乌丸调节肠道菌群延缓D-半乳糖模型大鼠脑衰老作用及机制研究

目的探讨首乌丸延缓脑衰老的可能作用机制。方法将SPF级SD雄性大鼠50只任意分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸组及首乌丸2倍剂量组。除正常组外,其余4组均用D-半乳糖(120 mg/kg)复制衰老模型,同时首乌丸组和首乌丸2倍剂量组分别予首乌丸1.08、2.16 g/kg灌胃,维生素E组予维生素E 0.018 g/kg灌胃。6周造模结束后,各组任意选取6只小鼠进行16S rRNA测序分析肠道菌群多样性和物种丰度的变化,检测海马β-半乳糖苷酶活力,苏木素-伊红(HE)染色观察空肠组织病理形态学变化,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清及海马的氧化三甲胺(TMAO)含量。Spearman相关性分析基于属水平的差异菌群与血清TMAO的相关性。结果与正常组相比,模型组海马β-半乳糖苷酶活性上升(P<0.01);与模型组相比,首乌丸组和首乌丸2倍剂量组海马β-半乳糖苷酶活性下降(P<0.01)。与模型组相比,首乌丸组和首乌丸2倍剂量组回肠纹状缘比较整齐,黏膜上皮细胞脱落减少。与正常组相比,模型组Chao1指数、Faith指数、Observed_otus指数下降(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,首乌丸组Chao1指数、Faith指数、Observed_otus指数、Shannon指数上升(P<0.05,P<0.01),首乌丸2倍剂量组Chao1指数、Shannon指数上升(P<0.05)。肠道菌群Beta多样性分析,各组样本能够区分。门水平肠道菌群,与正常组相比,模型组拟杆菌门、放线菌门相对丰度下降(P<0.01),变形菌门、蓝藻菌门相对丰度上升(P<0.01);与模型组相比,首乌丸组和首乌丸2倍剂量组放线菌门丰度升高(P<0.01),蓝藻菌门丰度降低(P<0.01),厚壁菌门与拟杆菌门相对丰度的比率均降低。属水平,与正常组相比,模型组普雷沃菌属、乳酸杆菌属、颤螺菌属、拟杆菌属、副雷沃菌属相对丰度下降(P<0.01);与模型组相比,经首乌丸干预后,普雷沃菌属、乳酸杆菌属、颤螺菌属、拟杆菌属、副雷沃菌属、布劳特菌属、狄氏副拟杆菌属相对丰度均上升(P<0.01)。与正常组相比,模型组血清及海马TMAO含量升高(P<0.01);与模型组相比,首乌丸组和首乌丸2倍剂量组血清及海马TMAO含量下降(P<0.01)。Spearman相关性分析提示,普雷沃菌属、乳酸杆菌属、副雷沃菌属、布劳特菌属相对丰度与血清TMAO含量呈负相关。结论首乌丸能够降低D-半乳糖衰老大鼠海马β-半乳糖苷酶活性,改善空肠病理形态,其作用机制可能是通过调节肠道菌群,减少TMAO的生成,进而延缓脑衰老。

首乌丸对衰老大鼠海马组织PP1γ及病理形态的影响

目的通过观察衰老大鼠海马组织中蛋白磷酸酶1γ(PP1γ)的表达及海马组织病理形态的变化,探讨首乌丸对学习记忆能力的作用机制。方法将SPF级SD雄性大鼠40只随机分为正常组、模型组、首乌丸组及维E组,除正常组外,其余各组均用D-半乳糖造成衰老模型,同时首乌丸组以首乌丸进行干预,维E组予维生素E。6周后取海马组织,Real-time PCR检测海马组织中PP1γmRNA的转录水平,HE染色观察海马组织病理形态学变化。结果正常组PP1γ的mRNA表达显著低于模型组(P<0.01),首乌丸组PP1γ的mRNA表达低于模型组(P<0.05)首乌丸组海马组织中锥体细胞胞核固缩形状不规则等情况较模型组明显减少,结论首乌丸可能通过降低PP1γ的mRNA表达,减轻海马组织的病理损伤来改善学习记忆功能。

HPLC法同时测定天麻首乌片中12种活性成分

目的建立HPLC梯度洗脱法同时测定天麻首乌片(TSP)中12种活性成分芍药苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮IIA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素的量。方法采用HPLC法,Hypersil GOLD C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,体积流量1.0 m L/min,梯度洗脱;进样量为10μL。结果 12种活性成分芍药苷、二苯乙烯苷、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮IIA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素分别在3.12~31.20μg/m L(r=0.999 5)、4.98~49.80μg/m L(r=0.999 4)、1.05~10.50μg/m L(r=0.999 5)、0.99~9.90μg/m L(r=0.999 2)、1.11~11.10μg/m L(r=0.999 2)、3.24~32.40μg/m L(r=0.999 2)、3.63~36.30μg/m L(r=0.999 2)、1.13~11.30μg/m L(r=0.999 3)、1.9~19.0μg/m L(r=0.999 5)、1.55~15.50μg/m L(r=0.999 5)、1.48~14.80μg/m L(r=0.999 5)、102.8~1028.0μg/m L(r=0.999 9)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0%;平均加样回收率和相应的RSD分别为99.88%、1.55%,101.25%、0.98%,99.67%、1.29%,102.04%、1.17%,101.17%、1.67%,98.27%、1.51%,100.28%、1.20%,99.11%、0.95%,98.49%、1.67%,101.57%、0.94%,102.37%、0.58%,97.89%、0.69%。12批次供试品中12种指标成分质量分数分别为1.241~1.261、2.116~2.133、0.540~0.558、0.077~0.099、0.089~0.110、1.111~1.134、0.158~0.183、1.375~1.399、0.342~0.372、0.542~0.571、0.648~0.672、45.05~45.93 mg/g。结论建立的HPLC梯度洗脱法可同时测定TSP中12种活性成分,该方法操作简便、快速、准确,可作为TSP全面可靠的质量控制方法。

首乌丸质量标准的研究

目的:建立首乌丸质量标准。方法:采用TLC法对地黄、牛膝进行鉴别;用HPLC法测定大黄素的含量,色谱柱为Kro-masil ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1),流速1.0 mL·min-1,检测波长437 nm。结果:TLC色谱斑点清晰;大黄素在13.66～136.6μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.92%(RSD为0.84%)。结论:本法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。