青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、磷酸化SHP-2蛋白表达的影响

目的探讨青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、Src同源区2含域磷酸酶-2(SHP-2)蛋白磷酸化的影响。方法分离培养原代慢性粒细胞白血病细胞,采用不同浓度青蒿琥酯(0、5、10、20μg·mL^(-1))进行干预,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制情况;细胞计数法检测细胞生存情况;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞术(FCM)检测青蒿琥酯对细胞凋亡及胀亡的影响;荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcr/abl融合基因mRNA表达;Western Blot检测P210、SHP-2及磷酸化SHP-2蛋白表达。结果青蒿琥酯可抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,降低细胞存活率和线粒体膜电位水平(P<0.05),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度药物和不同作用时间可导致细胞凋亡率及胀亡率明显升高(P<0.01),同时可降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2和磷酸化SHP-2蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,促进其凋亡和胀亡,以及降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2、磷酸化SHP-2蛋白在原代慢性粒细胞白血病细胞中的表达水平,达到治疗慢性粒细胞白血病(CML)的目的。

SHP-2在造血细胞发育及血液系统肿瘤中的作用研究进展

SHP-2作为1种蛋白酪氨酸磷酸酶,由PTPN11基因编码,参与多种细胞信号转导通路。在造血细胞发育过程中,功能性SHP-2是正常造血细胞生长与发育必需的。同时,在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统肿瘤的发生,病理发展过程中,SHP-2的激活突变以及磷酸化都起到了重要的调控作用。SHP-2可能是1个新的潜在的抗血液肿瘤药物靶分子。

SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。

酪氨酸蛋白磷酸酶2高表达对p210bcr/abl诱导的慢性粒细胞白血病细胞增殖与凋亡抵抗的影响

目的研究Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶2(Shp2)在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达,及其在p210bcr/abl诱导的白血病细胞恶性增殖和凋亡抵抗中的作用。方法收集25例p210bcr/abl阳性CML患者白血病细胞样本,8例非肿瘤病人骨髓和10例正常人外周血细胞样本作阴性对照,K562和KU812白血病细胞系作为p210bcr/abl阳性对照,KG1白血病细胞作为Shp2阳性对照。用Western印迹技术定量分析与比较Shp2在白血病细胞和正常骨髓造血细胞中的表达情况,通过特异性抑制剂分别下调Shp2和白血病融合基因p210bcr/abl后,观察Shp2表达对p210bcr/abl阳性白血病细胞增殖与凋亡的作用。细胞增殖与凋亡检测应用流式细胞仪。结果(1)磷酸化Shp2蛋白在92%患者CML白血病细胞样本中呈高表达状态,而在8例非肿瘤患者骨髓和10例正常人外周血细胞中低表达或不表达。磷酸化Shp2/β肌动蛋白比值分别为0.91±0.62、0.16±0.09和0.03±0.05(P均<0.01)。(2)下调Shp2蛋白表达后,白血病细胞凋亡率从4.89%上升到38.69%(P<0.01),而S期细胞从33.6%下降到10.8%(P<0.01)。(3)特异性抑制p210bcr/abl融合基因表达蛋白后,白血病细胞中磷酸化Shp2蛋白明显下降,同时出现明显细胞凋亡与生长抑制现象。结论(1)磷酸化Shp2蛋白在慢性粒细胞白血病细胞患者中呈过度表达状态,并且与白血病细胞恶性增殖与凋亡抵抗密切相关。(2)bcr/abl融合基因阳性患者的白血病细胞中Shp2的过度表达可能由p210bcr/abl蛋白激活引起。

PHPS1促进ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的不稳定性研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2特异性抑制剂苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(PHPS1)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响。方法2019年1—12月于河北省人民医院临床研究中心进行实验。6~8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠18只,随机数字表法分为模型组(生理盐水灌胃,0.25 mg·kg^(-1)·d^(-1))和PHPS1组(PHPS1灌胃,0.25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),各9只。4周后处死小鼠取血清,检测总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及IL-1β、TNF-α水平;主动脉根部病理切片HE染色评估斑块大小;免疫组化评估斑块内巨噬细胞、平滑肌含量;天狼星红染色评估斑块内胶原表达情况;TUNEL染色评估斑块内细胞凋亡情况;Movat染色评估斑块内坏死核心面积;Western-blot检测内质网应激凋亡相关通路蛋白表达量。结果与模型组比较,PHPS1组血脂水平差异无统计学意义(P>0.05),炎性因子IL-1β和TNF-α水平明显升高(t/P=2.934/0.010,2.240/0.040);斑块面积、斑块内巨噬细胞含量显著增加(t/P=4.869/0.001,4.241/0.001);斑块内平滑肌和胶原含量差异无统计学意义(P>0.05);TUNEL和Movat染色显示凋亡阳性区域和斑块内坏死核心面积显著增大(t/P=7.636/0.000,17.212/0.000);Western-blot结果显示内质网应激蛋白p-PERK、ATF4表达升高,凋亡相关蛋白CHOP、cleaved-caspase3、bax表达显著上升,bcl-2蛋白表达显著下降(P均<0.01)。结论蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2可通过抑制斑块细胞的内质网应激从而抑制凋亡进而稳定动脉粥样硬化斑块。