双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。

双龙方对大鼠心肌缺血／再灌注后无复流影响的研究

目的探索双龙方对大鼠心肌缺血/再灌注后无复流的影响。方法将200只大鼠随机分为5组,每组40只:模型组、假手术组、双龙方5 g生药/kg组、双龙方2.5 g生药/kg组、双龙方1.25 g生药/kg组。各组大鼠在造模前连续灌胃5 d,模型组和假手术组灌胃同体积蒸馏水。给药结束后,对大鼠冠状动脉左前降支进行结扎,假手术动物只穿线不结扎。结扎后4 h,实施再灌注。再灌注4 h后,采用小动物高分辨率超声影像系统对各组大鼠行超声心动图检查和心肌声学造影;超声检查结束后,于腹主动脉取血,分离血清,测定血清cTnT、CRP、CK、LDH水平;大鼠取血完毕后,取出心脏,切片,分别用硫磺素S和硝基四氮唑蓝(N-BT)染色评估心肌无复流面积和梗死面积。结果与模型组比较,双龙方组的心肌无复流面积和梗死面积均明显减小(P<0.01或P<0.05);心脏B超显示心功能指标明显改善,左心室前壁缺血区厚度明显增加,收缩末期左心室内径和容积明显降低,短轴缩短率、射血分数和每搏输出量明显提高(P<0.01或P<0.05);心肌声学造影显示心肌血液灌注明显改善,左心室前壁心肌组织的微血管密度、血流速和血液灌注量明显增加(P<0.01或P<0.05);心肌损伤相关的血液学指标未见明显改善,血清cTnT、CRP、CK、LDH水平未见明显变化。结论双龙方可以明显减小大鼠的心肌梗死面积和无复流面积,可明显对抗心肌缺血/再灌注后的无复流,改善受损心肌组织的血液灌注,改善心功能,抑制心肌损伤。

基因芯片用于组分中药新双龙方的配伍机制研究

采用基因芯片技术研究了中药新双龙方及其有效组分人参总皂苷和丹参总酚酸治疗急性心肌梗塞(AMI)大鼠的作用机制.以结扎大鼠冠脉左前降支的方法制备急性心梗模型,采用大鼠全基因组表达谱芯片分别筛选出AMI大鼠给药前及新双龙方与组分给药后的差异表达基因(Ratio>2或<0.5),通过对4组差异基因的综合分析,比较了新双龙方与组分作用方式的异同,从分子调控水平上探讨复方配伍后的增效作用,同时对与药效作用机理直接相关的钙离子转运相关的Cacna1d基因和血管修复相关的Flnb基因进行了实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)定量.结果表明,新双龙方与2种有效组分对心梗大鼠基因表达的影响不同.对差异基因的聚类分析以及药物的调控作用比较结果均表明复方比组分的疗效更好;通路分析结果表明,新双龙方与组分均主要通过调控钙信号转导通路、丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(MAPK)信号等通路发挥药效作用,且复方涉及更多通路;筛选出了复方与组分共同调控的靶点基因,其在3组中具有不完全相同的表达趋势,但复方具有更积极的调控作用.本研究结果从分子调控角度证实了复方新双龙方的配伍优势.

双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的影响

目的评价双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的治疗作用。方法冠状动脉结扎法制备大鼠急性心肌梗死模型;造模后10 min十二指肠给药;造模后4 h,取血测定血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;取出心脏,切片,氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色,测定心肌梗死面积。结果所有给药大鼠组的血清CK,LDH,SOD,MDA水平与模型组比较均无显著性差异。与模型组比较,双龙保心方高、中剂量组的心肌梗死面积显著降低(P<0.05)。结论双龙保心方对大鼠急性心肌梗死有显著保护作用。

Preliminary Research on a Mesenchymal Stem Cell-model for Screening Traditional Chinese Medicines

The authors focused their attention on the establishment of a mesenchymal stem cell（MSC） model for screening traditional Chinese medicines（TCMs） so as to investigate the effects of Shuanglong Formula（SLF） components（Ginsenosides and salvianolic acids） and ingredients（ginsenoside Rb1 and salvianolic acid B） on cardiomyocyte differentiation from MSCs.The SLF components were analyzed and quantified by HPLC-TOF-MS.Cardiomyocyte differentiation was induced by culturing MSCs in the induction medium supplemented with SLF ingredients,SLF components,5-azacytidine（5-aza）,5-aza＋SLF ingredients and 5-aza＋SLF components,respectively,for up to 30 d,and evulated by the expression of Cardiac-specific myosin heavy chain（MHC） and troponin I（TnI） via immunofluoresent staining.Slow growth rate and changed morphology were observed during cardiomyocyte differentiation.After 20 d of induction,differentiating MSCs were positive for MHC and TnI staining.The effects of SLF components were better than those of SLF ingredients.Taken together,SLF can induce the differentiation of MSCs into cardiomyogenic cells in vitro,and MSCs can be used as a powerful tool for screening TCMs.

应用基因表达谱芯片研究中药复方对心肌梗死的药效机制

目的:麝香保心丸、双龙方等具有益气活血的中药复方均可有效治疗心肌梗死,该文以麝香保心丸、双龙方为研究对象,从基因表达的角度探讨该类中药复方治疗心肌梗死的药效机制。方法:建立大鼠左冠状动脉结扎心肌梗死模型,药物干预7 d后取心肌梗死区边缘缺血组织,建立基因表达谱,筛选治疗前后的差异表达基因,进行生物信息学分析,同时采用RT-PCR对芯片数据进行验证。结果:两种益气活血方干预后,大鼠心肌组织的基因表达谱发生改变,筛选得到224个共有的差异表达基因,涉及能量代谢相关的甘油三磷酸脱氢酶活性、糖酵解/糖质新生等通路。结论:心肌梗死是一种多基因表达异常的心血管疾病,益气活血中药在发挥其治疗作用时,对224个共有差异表达基因具有相似调节作用,且主要通过改善大鼠心肌能量代谢异常,达到治疗心肌梗死的作用。

双龙方配伍配比对大鼠急性心肌缺血模型的影响

目的:验证中药双龙方配伍的合理性和科学性。方法:通过盐酸异丙肾上腺素造成大鼠的急性心肌缺血模型,从生理层面(心电图)、病理层面(心肌梗死面积)和细胞分子层面(细胞酶学指标CK,LDH,SOD,MDA含量变化),观察单方以及双龙方不同配比预防给药对心肌缺血的拮抗作用。结果:各给药组均能改善心电图缺血指标、降低血清中CK,LDH,SOD,MDA含量及减少心肌梗死面积,但双龙方配伍高剂量组比其他组具有更好的效果,其中以3∶7高剂量组效果最优。结论:药效学筛选结果表明,按照双龙方配比3∶7高剂量对防治大鼠急性心肌梗死效果最优。