舒肝化癥方对肝纤维化模型大鼠VEGF、CTGF、CD31及vWF表达的影响及其相关性研究

目的:以四氯化碳(CCl_(4))致大鼠肝纤维化为研究对象,研究舒肝化癥方(SGHZD)对大鼠肝纤维化血瘀证的影响及机理,分析血管内皮生长因子(VEGF)、结缔组织生长因子(CTGF)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)及血管性血友病因子(vWF)在SGHZD抗肝纤维化过程中的表达及其相关性。方法:SPF级SD大鼠,雄性,54只,按随机原则分成空白组、模型组(2.0 mg/kg 40%CCl_(4)橄榄油溶液+等量的0.9%的生理盐水)、阳性对照组(2.0 mg/kg 40%CCl_(4)橄榄油溶液+0.2 mg/kg秋水仙碱溶液)、SGHZD高剂量组(2.0 mg/kg 40%CCl_(4)橄榄油溶液+29.52g/kgSGHZD)、SGHZD中剂量组(2.0 mg/kg 40%CCl_(4)橄榄油溶液+14.76 g/kgSGHZD)和SGHZD低剂量组(2.0 mg/kg 40%CCl_(4)橄榄油溶液+7.38 g/kgSGHZD),各9只。造模时间为8周,每周2次,从造模第2天起,用药治疗每天1次,治疗8周,实验期间动态监测所有大鼠的生理情况,马松染色(Masson)对肝组织病理形态学变化和胶原纤维沉积情况进行观察,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGF、CTGF、CD31、vWF mRNA的表达水平,Western blot检测VEGF,CTGF,CD31,vWF的蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠整体状况明显下降,Masson染色结果显示大鼠汇管区和中央静脉区形成假小叶,并伴有纤维间隔形成,胶原纤维沉积增多且有显著意义(P<0.05);RT-qPCR、Western blot结果显示,VEGF、CTGF、CD31、vWF mRNA和蛋白表达均上升(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组和SGHZD组各剂量Masson染色显示胶原纤维沉积明显减少,纤维间隔程度减轻,差异有统计学意义(P<0.05),RT-qPCR、Western blot结果显示VEGF、CTGF、CD31、vWF mRNA及蛋白的表达量均下降,但以阳性对照组及中药高剂量组效果最好(P均<0.05);将Masson染色胶原容积分数分别与VEGF、CTGF、CD31及vWF蛋白表达进行相关性分析,发现VEGF、CTGF、CD31及vWF在肝纤维化的形成过程中随着肝纤维化程度加重其表达上调,而在SGHZD抗肝纤维化过程中随着胶原容积分数减少其表达减少;对VEGF、CTGF、CD31及vWF蛋白表达进行相关性分析,发现VEGF、CTGF、CD31及vWF在肝纤维化的形成发展中和SGHZD抗肝纤维化的过程中均呈显著正相关。结论:SGHZD对CCl_(4)所致肝纤维化大鼠有显著疗效,其作用机理可能与VEGF、CTGF、CD31及vWF的表达、病理性血管生成、肝窦毛细血管化及肝纤维化血瘀证相关。