Livin靶向si-RNA对胶质瘤TJ905干细胞及肿瘤坏死因子α的影响

目的从人脑胶质瘤TJ905细胞中分离肿瘤干细胞,制作livin基因干扰模型si-RNA livin,探讨livin靶向si-RNA对TJ905干细胞增殖及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 TJ905细胞经免疫磁珠法分离获取肿瘤干细胞,构建干扰livin基因si-RNA,通过慢病毒转染干细胞建立干扰组,另设对照组转染空病毒,利用替莫唑胺(TMZ)干预,观察肿瘤干细胞的形态学改变,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞增殖,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测livin、TNF-α的表达。结果成功制作慢病毒转染TJ905干细胞livin靶向si-RNA模型。干扰组TJ905干细胞增殖活性及livin的表达较对照组显著降低(P<0.01)。相同药物浓度下干扰组TNF-α的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论Livin靶向si-RNA可能通过上调TNF-α基因的表达,并促使化疗药物TMZ对干细胞TNF-α的表达产生诱导作用,最终降低了干细胞的化疗耐药。

桃红四物汤对大脑中动脉闭塞大鼠环状RNA表达谱的影响

目的筛选和研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠环状RNA(circular RNA,circRNA)表达的影响,探讨THSWD的可能作用及分子机制。方法采用下一代RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠circRNA表达谱,并与MCAO模型组和对照组进行比较。生物信息学分析预测潜在的靶向微小RNA(micro RNA,miRNA)和mRNAs。应用GO富集分析和KEGG通路富集分析方法分析差异表达的circRNAs的潜在作用。对表达差异显著的circRNA进行RT-qPCR验证。结果MCAO组与对照组之间存在87个差异表达的circRNA,MCAO组与THSWD组之间存在86个差异表达的circRNA。其中,THSWD可逆转MCAO模型诱导的17个circRNAs。为了证明DECs靶向的mRNAs的作用,使用了GO和KEGG数据库。进一步分析表明,5个表达差异显著circRNAs表达量与测序结果相似。结论首次确定了THSWD治疗后MCAO大鼠circRNAs的全面表达谱,提示THSWD对MCAO的治疗作用可能是通过调节circRNAs的表达实现的。

桃红四物汤对大脑中动脉闭塞大鼠lncRNA表达的影响

目的研究中药复方桃红四物汤(Tao Hong Si Wu decoction,THSWD)治疗大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达,并确定THSWD治疗MCAO大鼠可能的分子机制。方法从对照组、MCAO组和MCAO+THSWD组各获得3个大脑半球组织。采用RNA测序技术鉴定三组中的lncRNA基因表达。鉴定了THSWD调节的lncRNA基因,然后构建了THSWD调节的lncRNA-mRNA网络。通过MCODE插件鉴定lncRNA-mRNA网络的模块。基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书数据库(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)用于分析富集的生物功能和信号通路。鉴定了THSWD调节的lncRNA的顺式和反式调控基因。采用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证lncRNA。分子对接用于验证lncRNA-mRNA网络靶点和通路相关蛋白结合能力。结果在MCAO大鼠中,THSWD共调节了302个lncRNA。生物信息学分析表明,一些核心lncRNA可能在THSWD治疗MCAO大鼠中发挥重要作用,此外,我们进一步发现THSWD可能也通过lncRNA-mRNA网络以及网络富集的补体和凝血级联反应等多通路治疗MCAO大鼠。分子对接结果表明,THSWD活性化合物没食子酸和苦杏仁苷与蛋白质靶点具有一定的结合能力。结论THSWD可以通过调节lncRNA保护MCAO大鼠脑损伤,为THSWD治疗缺血性中风提供了新见解。

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRNA+NC inhibitor组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA与miR-491-5p inhibitor、BAIAP2-AS1 shRNA与NC inhibitor,空白对照组不予转染。转染48 h,收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率,采用RT-qPCR法检测BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA表达。采用StarBase在线数据库预测miR-491-5p与BAIAP2-AS1、MGMT的互补位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证其靶向调控关系。结果与NHA细胞比较,A172、LN229、U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低(P均<0.05)。以U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低,故以U251细胞进行后续实验。与空白组、NC shRNA组比较,BAIAP2-AS1 shRNA组细胞活性、细胞迁移率、BAIAP2-AS1、MGMT表达显著降低(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著升高(P均<0.05);与BAIAP2-AS1 shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+inhibitor NC组比较,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组细胞活性、细胞迁移率、MGMT表达显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著降低(P均<0.05)。经StarBase在线数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证,BAIAP2-AS1可靶向调控miR-491-5p表达、miR-491-5p可靶向调控MGMT表达。结论敲减BAIAP2-AS1可通过调节miR-491-5p/MGMT轴抑制胶质瘤细胞增殖、迁移并促进其凋亡。

干预GPR1通路对实验性小鼠脂肪累积的影响

一直以来,肥胖是令人担忧和烦恼的健康问题,可导致包括2型糖尿病在内的代谢综合征发生.与肥胖相关疾病的发病机制是多因子影响的结果,但是,越来越多的证据表明,脂肪组织分泌的细胞因子(脂联素、瘦素、TNF-α等)的改变,以及局部的炎症反应对于这些疾病的发生具有重要作用.Chemerin(也被称为他扎罗汀诱导基因2或者视黄酸受体反应子2),是近年来发现的一种脂肪细胞因子,是G蛋白偶联受体1(GPR1)的配体,在调节代谢、先天免疫等方面具有重要的作用.为了研究Chemerin及其受体GPR1对小鼠脂肪累积的影响,本课题组通过高脂饲料喂养,成功建立小鼠肥胖模型,利用si RNA干扰技术沉默小鼠和分化前3T3-L1细胞中Chemerin或GPR1基因的表达发现:a.Chemerin及其受体GPR1在高脂饲料喂养小鼠的腹股沟脂肪以及肩胛下脂肪中的表达高于正常饲料组;b.沉默C57BL/6小鼠体内Chemerin或GPR1基因的表达后,肝脏以及腹股沟脂肪组织中脂质的累积受到抑制;c.3T3-L1细胞在体外分化成熟过程中,Chemerin和GPR1也呈高表达的趋势,沉默分化前3T3-L1细胞中Chemerin或GPR1基因的表达后,3T3-L1细胞向脂肪细胞的分化受到影响,降低了脂肪细胞中脂质的累积以及与脂质代谢相关基因的表达,改变了成熟脂肪细胞中新陈代谢功能.这些结果提示,Chemerin及其受体GPR1可能在小鼠脂肪累积中具有调控作用.综上所述,Chemerin/GPR1可能是一种调节脂肪组织中脂质累积的潜在信号通路,为肥胖症等代谢紊乱疾病的治疗提供了可能的作用靶点.

沉默Toll样受体4表达对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响。方法体外化学合成针对TLR4的小干扰RNA(TLR4-si RNA),通过脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞。采用Real-time PCR和流式细胞仪检测分析干扰后A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达情况。另外,采用流式细胞仪检测分析干扰72 h后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果与对照组比较,转染TLR4-si RNA后,A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达显著下降(P<0.05),细胞的凋亡率明显增加[(1.73±0.32)%vs.(7.40±0.75)%(P<0.01)],细胞周期出现G0/G1期停滞[(48.21±1.15)%vs.(66.26±2.45)%(P<0.05)],同时S期细胞比例明显减少[(34.25±1.46)%vs.(22.63±3.39)%(P<0.05)]。结论 TLR4-si RNA能有效沉默A549细胞中TLR4的表达,在促进细胞凋亡的同时能够影响细胞周期分布从而抑制肿瘤细胞的生长,特异性干预TLR4基因的表达有望成为治疗肺癌的一种新手段。

骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2基因表达水平及其对肿瘤细胞迁移/侵袭的影响

目的 探讨骨肉瘤患者肿瘤组织中赖氨酸羟化酶2(PLOD2)基因表达水平及其对肿瘤细胞迁移/侵袭的影响。方法 选取西安交通大学第二附属医院骨科采集的95例新鲜骨肉瘤患者肿瘤组织及其癌旁正常组织标本,采用免疫组化染色和实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测其表达水平,分析PLOD2表达与临床病理特征的关系。取对数生长期人骨肉瘤细胞系MG-63,随机分为小干扰RNA(si RNA)-PLOD2组、阴性对照组(NC组)以及空白组,si RNA-PLOD2组转染si RNA-PLOD2干扰序列,NC组转染空载体,空白组不予任何处理。采用RT-PCR方法检测各组PLOD2基因表达水平,观察抑制PLOD2基因表达对骨肉瘤细胞迁移、侵袭能力的影响。结果 免疫组化染色结果显示,骨肉瘤肿瘤组织中PLOD2阳性表达率(96. 84%)明显高于癌旁正常组织(7. 37%),差异有显著性(P <0. 05);骨肉瘤肿瘤组织中PLOD2 m RNA表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有显著性(P <0. 05);PLOD2表达与TNM分期、软组织浸润、淋巴结远处转移密切相关(P <0. 05),与Ⅰ、Ⅱ期、不存在软组织浸润以及未发生淋巴结远处转移骨肉瘤患者比较,Ⅲ、Ⅳ期、存在软组织浸润以及发生淋巴结远处转移骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2表达水平明显升高(P <0. 05),而与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型无关(P> 0. 05);转染48 h,si RNA-PLOD2组PLOD2基因表达水平明显低于NC组、空白组(P <0. 05),NC组、空白组PLOD2基因表达水平无显著差异(P> 0. 05);Transwell侵袭实验以及划痕实验结果显示,si RNA-PLOD2组骨肉瘤细胞穿透基底膜数量、迁移细胞数量明显少于NC组、空白组(P<0. 05),NC组、空白组骨肉瘤细胞穿透基底膜数量、迁移细胞数量无显著差异(P> 0. 05)。结论 骨肉瘤患者肿瘤组织中PLOD2基因表达水平高于癌旁正常组织,其表达水平与骨肉瘤患者肿瘤TNM分期、软组织浸润、淋巴结远处转移有关,抑制PLOD2基因表达可抑制骨肉瘤肿瘤细胞迁移、侵袭。

沉默Nrf2基因的骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死后心室重构和纤维化的影响

目的探讨以si RNA为载体沉默骨髓间充质干细胞(MSC)中核因子E2相关因子2(Nrf2)基因后细胞移植对大鼠心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能机制。方法建立心肌梗死大鼠模型,随机分为沉默Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2-/-组)、过表达Nrf2基因的MSC移植组(MSCNrf2+/+组)和生理盐水转染MSC移植组(对照组),每组12只。细胞移植后28天,采用Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原沉积含量和纤维化程度,Western blot检测梗死心肌Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平,超声心动图评价梗死后心功能。结果 si RNA-Nrf2转染MSC后,Nrf2蛋白表达明显减少。移植后第28天,MSCNrf2-/-组心肌组织纤维化程度较对照组加重,MSCNrf2+/+组心肌组织纤维化程度较对照组减轻(P<0.05);MSCNrf2-/-组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组下降(P<0.05),而MSCNrf2+/+组梗死心肌中Nrf2、HO-1蛋白表达较对照组增加(P<0.05);超声心动图结果显示,与对照组比较,MSCNrf2-/-组左心室舒张期末内经(LVEDD)和左心室收缩期末内经(LVESD)增大,左心室射血分数(LVEF)下降(P<0.05),MSCNrf2+/+组LVEDD和LVESD均减小,LVEF无下降(P<0.05)。结论 si RNA-Nrf2可有效干扰MSC中Nrf2蛋白的表达,降低外源性MSC对梗死心脏的修复能力,增加心肌梗死区胶原沉积,进而促进心室重构,降低心功能。由此推测Nrf2信号通路在干细胞移植治疗心肌梗死后心肌重构和纤维化中起了关键作用。

马关无角山羊卵巢颗粒细胞INHA基因siRNA的筛选与鉴定

为了研究INHA基因在马关无角山羊卵泡发育中的作用,设计并化学合成了3条针对INHA基因的si RNA,脂质体法转染至马关无角山羊的卵巢颗粒细胞,Real-time PCR技术和WesternBlot技术对其干扰效率进行了筛选。结果表明:si RNA-2对INHA基因m RNA表达抑制率达到了94.3%,对蛋白表达的抑制率达到了93.4%,是INHA基因沉默的最佳干扰质粒,可为今后研究INHA基因的功能提供基础。

溶藻弧菌肽聚糖和vp28-siRNA对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时间点的干扰效果。结果表明:在注射vp28-si RNA 6 h后,实验组与对照组WSSV病毒拷贝数差异有统计学意义(P<0.05);在48 h时实验组病毒拷贝数急剧下降,对照组则保持较高水平,可较好干扰WSSV病毒复制,干扰效果持续120 h,对凡纳滨对虾的保护率为40%。凡纳滨对虾用0.10 mg/m L肽聚糖(Peptidoglycan)免疫24 h后感染WSSV,检测6、12、24 h注射vp28-si RNA的保护率。结果显示:6 h注射组的保护率为80%,12 h注射组为63.33%,24 h注射组为56.67%。凡纳滨对虾在肽聚糖和vp28-si RNA作用后,可增加其对WSSV抗感染作用,降低死亡率,干扰时间越早,对对虾的保护率越高。

Tat-LK15运载nNOS siRNA治疗慢性炎性疼痛的实验研究

目的:慢性疼痛如炎性疼痛的基因治疗缺乏安全且高效的载体,本实验探讨了细胞穿透肽Tat-LK15介导si RNA干扰大鼠脊髓背角n NOS表达进而治疗慢性炎性疼痛的可行性。方法:参照前期实验,检测鞘内注射Tat-LK15/si RNA对完全弗氏佐剂(CFA)炎性痛模型大鼠脊髓背角(SCDH)n NOS蛋白表达的影响,并测定鞘内注射此复合物后炎性痛大鼠机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射持续时间(TWD)的变化。结果:Tat-LK15/si RNA注射后3 d,炎性疼痛大鼠SCDH n NOS蛋白水平的表达下降51%(P<0.01),Tat-LK15/sc RNA注射后n NOS的表达无明显变化。Tat-LK15/si RNA鞘内注射后3、7、14及21d炎性痛大鼠的MWT显著增高,TWD显著缩短(P<0.01),Tat-LK15/sc RNA无此治疗作用。结论:TatLK15可有效运载si RNA抑制CFA所致慢性炎性痛大鼠n NOS的过度表达,从而对炎性疼痛大鼠具有治疗作用。

泛素水解酶22siRNA对宫颈癌CD133^+宫颈癌干细胞增殖和侵袭的影响

【目的】采用USP22 si RNA对宫颈癌CD133+Ca Ski宫颈癌干细胞进行基因治疗,观察其对USP22含量和对增殖侵袭能力的影响,并对其分子生物学机制进行初步探讨。【方法】流式分选获得CD133+Ca Ski宫颈癌干细胞,分为USP22组、阴性对照(NC)组、空白对照组(MOCK)组。采用western blot法比较各组细胞USP22蛋白的含量,MTT法检测3组细胞的增殖能力,Transwell法检测3组细胞的侵袭能力,荧光素酶报告基因实验检测3组细胞Wnt/β-catenin信号通路的活性。【结果】采用流式细胞术分选CD133阳性细胞后Ca Ski细胞CDl33阳性率为(96.87±5.31)%,显示流式分选宫颈癌干细胞成功(P<0.05)。Western blot检测结果显示,USP22组CD133+Ca Ski细胞中USP22蛋白表达量明显降低。MTT结果显示USP22组细胞增殖能力明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示USP22组CD133+Ca Ski细胞侵袭能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,USP22组Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】USP22 si RNA有降低CD133+Ca Ski宫颈癌干细胞内Wnt/β-catenin信号通路活性的作用,进而可以实现对宫颈癌干细胞增殖和侵袭功能的抑制,该治疗方法有望成为宫颈癌基因治疗的新手段。

siRNA抑制人肝癌细胞MDM2表达及细胞增殖的研究

目的探讨siRNA对人肝癌HepG2细胞MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响。方法体外合成针对MDM2基因的siRNA质粒,转染HepG2细胞株;应用RT-PCR和western blot方法检测siRNA对MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用MTT法检测siRNA对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期。结果和空白组比转染siMDM2-1,2的HepG2细胞的MDM2基因和蛋白表达减低,而P53基因和蛋白表达增加。阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变。转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,转染siMDM2-1,2和阴性对照质粒后的抑制率分别是46.3%、56.1%和3%。和对照组比较,转染siMDM2-1,2的hepG2细胞的细胞周期发生明显改变,而转染对照质粒的hepG细胞周期未发生明显变化。结论 siRNA MDM2可以有效抑制HepG2细胞株中MDM2的表达,促进P53的表达,同时可以使细胞周期发生变化,这可能是其抑制肿瘤细胞增殖的主要机制之一。

THBS1在乳腺癌细胞中的表达及对生物学行为的影响

目的探讨THBS1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法生物信息学分析THBS1在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异。利用si-RNA沉默人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中THBS1基因,检测细胞的增殖、侵袭能力和凋亡率变化。结果THBS1在乳腺癌组织中表达量高于癌旁组织(P<0.05);与si-NC组比较,MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞si-THBS1组的沉默效率分别为62.9%±2.9%和94.98%±0.37%(P<0.05);MCF-7细胞在450nm波长处的吸光度降低(P<0.05),MDA-MB-231细胞吸光度比较差异无统计学意义(P>0.05);MDA-MB-231细胞si-THBS1组细胞侵袭数为95.8±11.5个/HP,MCF-7细胞为13.7±5.0个/HP,均小于si-NC组(P<0.05);MDA-MB-231细胞si-THBS1组细胞凋亡率为4.68%±0.83%,MCF-7细胞为4.91%±0.82%,均小于si-NC组(P<0.05)。结论THBS1在乳腺癌组织中高表达。THBS1基因可能促进MCF-7细胞增殖,促进两种乳腺癌细胞侵袭,并抑制凋亡。

叉头框蛋白M1过表达在结直肠癌中的作用

目的:评估叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生发展中的作用。方法:研究103例原发CRC和配对的正常组织标本,探讨FOXM1表达变化的潜在机制及其对体外CRC细胞模型的增殖和转移的影响。结果:103例CRC组织染色后FOXM1阳性率为85.44%(88/103),癌旁正常组织中阳性率为20.39%(21/103)。两组间的FOXM1的表达差异具有统计学意义(P<0.001);FOXM1沉默能抑制结肠癌细胞的增殖,且侵袭和迁移也明显受抑。结论:CRC的发病机制可能是由FOXM1介导,FOXM1可能代表CRC分子靶向治疗的选择性靶点。

肝再生磷酸酶-3在肝内胆管癌中的表达及其在肝内胆管癌侵袭转移中的作用

背景与目的探讨肝再生磷酸酶-3（PRL-3）在肝内胆管癌中的表达及其与肝内胆管癌侵袭转移及预后的关系,并进一步研究PRL-3在侵袭转移过程中的作用。 方法应用免疫组化方法检测102例肝内胆管癌原发灶及相应癌旁组织和62例淋巴结转移灶中PRL-3表达，分析其表达水平与临床病理资料的关系及其对肝内胆管癌预后的影响。并用PRL-3基因小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）转染处理肝内胆管癌HCCC-9810细胞力，分别采用实时定量RT-PCR和Western Blot检测干扰后PRL-3基因mRNA和蛋白水平，

三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。

四君子汤体外对ConA诱导的小鼠脾细胞表达IL-3mRNA的影响

用斑点杂交法分析了四君子汤体外对 Con A诱导的小鼠脾细胞表达 IL - 3m RNA的影响 ,结果四君子汤使鼠脾细胞表达 IL- 3m RNA在 2 0 h左右达高峰 ,有效剂量范围较大 (2 5 mg/ ml～ 40 0 mg/ ml) ,尤以 10 0 mg/ ml浓度效果为佳 ,提示四君子汤促进造血的作用与其提高 T细胞表达 IL- 3m

小干扰RNA沉默骨桥蛋白对球囊损伤大鼠颈动脉后基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-14的影响

目的观察经动脉外膜转染骨桥蛋白(OPN)的小干扰RNA对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)表达的影响,并初步探讨OPN-si RNA-002抑制球囊损伤后内膜增生的机制。方法以前期细胞实验筛选出的最敏感的OPN-si RNA-002序列作为动物实验转染基因,在转染试剂聚醚胶介导下,经血管外膜转染OPN-si RNA-002,于术后不同的实验终点处死大鼠,检测内膜增生程度及OPN、MMP-2、MMP-14的表达变化,以及OPN-si RNA-002对它们的抑制作用。结果OPN-si RNA-002组内膜增生显著减轻,OPN、MMP-2、MMP-14的表达减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 OPN-si RNA-002可能通过特异性抑制OPN的表达,进而抑制MMP-2、MMP-14的表达,减轻血管损伤后内膜的增生。