HL-60和SiHA细胞株ATM表达量与^(60)Co照射后细胞周期阻滞之间的关系

背景与目的:毛细血管扩张性共济失调综合征(ataxiatelangiectasia,AT)是由ATM(ataxiatelangiectasiamutant)基因所致,其突出特点是对放射线非常敏感,因此,ATM表达与放射敏感性应存在相关性。本研究旨在探讨两种肿瘤细胞株ATM表达量与60Co照射后细胞周期阻滞功能之间的关系。方法:使用半定量RT-PCR和流式细胞仪技术检测HL-60细胞和SiHA细胞中ATMmRNA和ATM蛋白表达量,同时以6、10和15Gy60Co照射SiHA细胞,HL-60细胞仅以6、10Gy照射,于照射后6、12、24、48及60h观察细胞周期阻滞现象和细胞凋亡率的变化。结果:HL-60细胞ATM平均蛋白荧光强度为14.11±2.38,SiHA细胞为27.74±1.16,约为HL-60细胞的2倍;HL-60细胞ATMmRNA相对表达量为0.09,SiHA细胞为0.80,约为HL-60细胞的9倍。照射后HL-60细胞和SiHA细胞均表现G2/M期阻滞。射线对HL-60细胞周期阻滞功能明显较SiHA细胞弱。结论:放射线对HL-60细胞和SiHA细胞的周期阻滞功能与ATM表达量相符,即ATM表达量低,细胞周期阻滞功能差。

苦参碱联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞株中TSLC1基因表达的影响研究

目的:探究苦参碱联合顺铂对宫颈癌Si Ha细胞株、肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因的表达及Si Ha细胞株对顺铂敏感性的影响,为宫颈癌的临床治疗提供根据。方法:采取四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度苦参碱组、顺铂组以及联合组干预Si Ha细胞株48 h后的抑制率;采取实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测TSLC1 mRNA表达程度的变化。结果:苦参碱及顺铂对Si Ha细胞株的抑制率均呈剂量依赖关系,随着各组浓度的增高,TSLC 1mRNA的表达上调(P<0.05),不同浓度联合组对Si Ha细胞株的抑制率分别为40.13%、62.88%、67.35%、71.33%和75.11%,TSLC1 mRNA的表达量分别为8.61±0.02、14.29±0.01、27.52±0.06、62.19±0.01和93.12±0.01,与不同浓度苦参碱组及不同浓度顺铂组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱联合顺铂可抑制宫颈癌Si Ha细胞株的生成和发展,此机制可能和TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱可以增强Si Ha细胞株对顺铂的敏感性。

氧化苦参碱对人宫颈癌SiHa细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究氧化苦参碱对体外人宫颈癌SiHa细胞株增殖活性及凋亡的影响。方法对人宫颈癌SiHa细胞株进行体外培养,经氧化苦参碱处理的细胞组为实验组,未经处理组为对照组。采用MTT细胞存活实验检测氧化苦参碱对入宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖影响,并计算IC50;倒置相差显微镜下观察不同浓度的氧化苦参碱作用48h后SiHa细胞的形态改变;Hoechst33258染色法和Western blot法检测氧化苦参碱对SiHa细胞核及凋亡相关蛋白(P53、Bax及Bcl-2)表达水平的影响。结果 MTT结果显示氧化苦参碱剂量-时间依耐性抑制人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖(P<0.05),计算24 h、48 h和72 h的IC50分别为(1 028.41±3.57)μg/ml、(701.72±6.01)μg/ml和(406.88±2.15)μg/ml;氧化苦参碱处理48 h后,SiHa细胞的形态特征及数目发生显著变化,且随氧化苦参碱浓度的增加而愈加明显;Hoechst33258染色证实氧化苦参碱处理后SiHa细胞发生凋亡,可见典型的凋亡特征;Western blot结果证实氧化苦参碱(700μg/ml、1 600μg/ml)处理48 h后,和对照组比较,药物处理组细胞凋亡周期蛋白P53、Bax表达上调(P<0.05),而Bcl-2表达下调(P<0.05),Bax/Bcl-2的比率明显增加(P<0.05)。结论氧化苦参碱可抑制体外人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖活性发挥其抗肿瘤作用,其作用机制可能诱导SiHa细胞的凋亡有关。

人端粒酶逆转录酶siRNA诱导宫颈鳞癌耐药细胞株SiHa/DDP凋亡的分子机制研究

目的研究人端粒酶逆转录酶siRNA(h TERT SiRNA)诱导宫颈鳞癌耐药细胞株Si Ha/DDP凋亡的可能机制。方法每毫升培养液中加顺铂2μg常规培养Si Ha/DDP细胞,实验分为4组,空白对照组(A组):仅用细胞培养液培养的Si Ha/DDP组;脂质体对照组(B组):仅添加转染试剂的Si Ha/DDP组;不针对任何基因的Negative Control siRNA对照组(C组);转染组(D组):h TERT SiRNA与脂质体混合液转染Si Ha/DDP细胞。按要求转染细胞后常规培养,于转染后24 h、48 h、72 h分别收集各组细胞进行相关检测,各组均应用实时荧光定量技术检测细胞h TERT mRNA表达、应用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测Si Ha/DDP细胞凋亡率、应用MTT法检测h TERT SiRNA转染后Si Ha/DDP细胞增殖情况。结果 1转染后24 h、48 h、72 h各组细胞相对A组的TERT mRNA含量分别为:D组(0.249±0.019)、(0.138±0.009)、(0.174±0.016);C组(0.931±0.036)、(0.940±0.025)、(0.901±0.042);B组(0.956±0.052)、(0.961±0.037)、(0.943±0.28);各时间点siRNA-1组h TERT mRNA相对表达量与各对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2转染后SiRNA-1组早期细胞凋亡率[(86.48±7.25)%]明显高于C组[(0.11±0.08)%]、B组[(5.23±1.22)%]和A组[(0.09±0.08)%],差异有统计学意义(P<0.05)。3转染后各时间点各组细胞OD490值比较差异有显著统计学意义(P<0.01),生长曲线显示SiRNA-1组慢于对照组。结论 h TERT siRNA转染Si Ha/DDP细胞可降低h TERT mRNA表达,抑制细胞增殖,促进细胞的凋亡。

缺氧诱导宫颈癌Siha细胞发生上皮-间叶转化的研究

目的探讨宫颈癌Siha细胞在二氯化钴(CoCl2)诱导的化学缺氧环境中能否发生上皮-间叶转化(EMT),从而获得侵袭性表型,并初步分析其分子机制。方法划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测化学缺氧对细胞迁移、侵袭及转移能力的影响;Western blot印迹法、细胞免疫化学及免疫荧光检测缺氧对Siha细胞缺氧诱导因子1α(HIF-lα)、上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测缺氧对EMT诱导因子snail、zeb、twist mRNA表达的影响。结果缺氧可促进人宫颈SCC Siha细胞的迁移、侵袭和转移能力;宫颈癌Siha细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对表达逐渐减少,vimentin蛋白的相对表达逐渐增加,缺氧组与常氧组比较差异有统计学意义(P<0.05);缺氧状态下HIF-1α在Siha细胞中聚集,发现Siha细胞形态发生明显变化、且伴有上皮性标记蛋白E-cadherin的表达减弱;Siha细胞twist及snail mRNA的表达与HIF-lαmRNA表达成正相关,且在缺氧12h后差异均有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧微环境可能通过活化HIF-lα,调节twist、snail等转录因子的表达,促进宫颈癌细胞发生上皮-间叶转化,产生侵袭性表型。

circPUM1靶向调控miR-144-3p对宫颈癌细胞放射抵抗的影响

目的:探讨环状RNA pumilio RNA结合家族成员(circPUM)1对宫颈癌细胞放射抵抗的影响及其可能的作用机制。方法:收集2019年8月至2020年2月郑州大学第二附属医院收治的47例宫颈癌患者的癌组织及其相应癌旁组织(距离癌组织5 cm处正常组织)标本。定量反转录聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中circPUM1、miR-144-3p的表达量;Pearson法分析宫颈癌组织中circPUM1与miR-144-3p表达量的相关性。将circPUM1慢病毒短发夹RNA(sh-circPUM1)及其阴性对照(sh-NC)、miR-144-3p寡核苷酸模拟物(miR-144-3p mimic)及其阴性对照(miR-NC)、sh-circPUM1与miR-144-3p抑制物(anti-miR)、sh-circPUM1与anti-miR阴性对照(anti-miR-NC)分别转染至人宫颈癌细胞SiHa,并通过0、4 Gy照射剂量照射,采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测活化的胱天蛋白酶3(cleaved-caspase3)蛋白表达量;Starbase平台分析及细胞实验检测circPUM1与miR-144-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circPUM1的表达量增加(P<0.05),miR-144-3p的表达量减少(P<0.05);circPUM1与miR-144-3p呈负相关(r=–0.9282,P<0.01);转染sh-circPUM1或miR-144-3p mimic后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平升高(均P<0.05),集落形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05);circPUM1可靶向结合miR-144-3p;共转染sh-circPUM1与anti-miR后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平降低(均P<0.05),集落形成数、迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05)。结论:沉默circPUM1可通过靶向调控miR-144-3p表达而抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及诱导细胞凋亡,从而减弱细胞放射抵抗性。

miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P<0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P<0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P<0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P>0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。

As_2O_3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗对宫颈癌治疗的体外实验研究

目的:研究As2O3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗(MFH)对宫颈癌Siha细胞株的治疗作用。方法:采用改良的乳化冷冻凝聚法制备As2O3磁性纳米微球,能谱仪、原子荧光光谱仪对其进行表征;高频交变磁场中进行体外升温实验。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测As2O3磁性纳米微球联合MFH对宫颈癌Siha细胞株生长的影响,流式细胞仪(FCM)检测凋亡。结果:所制备As2O3磁性纳米微球近似球形,粒径约为120nm,含砷量为0.61%,在输出电流I=300A的高频交变磁场中具有升温能力,且能达到肿瘤治疗的有效温度(41℃～46℃);As2O3磁性纳米微球联合MFH能抑制宫颈癌Siha细胞株的生长,促进其凋亡,且均较单纯As2O3液及单纯MFH明显。结论:As2O3磁性纳米微球可同时发挥As2O3的细胞毒性作用和磁感应加热的联合定向治疗作用,效果优于单一治疗,为临床治疗宫颈癌提供新的方法。

iNOS抑制剂1400W通过p53途径增强顺铂对宫颈癌SiHa细胞的化疗效果

该文探讨了iNOS抑制剂1400W联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞株生长抑制作用及其机制。应用MTT法检测1400W及顺铂对宫颈癌Si Ha细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测1400W及顺铂对宫颈癌Si Ha细胞凋亡的影响;quantitative RT-PCR和Western blot检测1400W及顺铂对宫颈癌Si Ha细胞p53、鼠双微基因2(murine double minut 2,MDM2)、DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)蛋白及m RNA表达的影响。结果显示,通过i NOS抑制剂1400W联合顺铂作用于宫颈癌Si Ha细胞株发现,1400W联合顺铂能明显抑制Si Ha细胞生长,其抑制作用与剂量呈正相关。1400W可以增强顺铂诱导的细胞凋亡作用。进一步研究证实,1400W可以抑制顺铂诱导的p53积聚,增加鼠双微基因2及DNA依赖蛋白激酶的表达。该实验结果为治疗宫颈癌患者提供了新的治疗策略,即通过联合使用i NOS抑制剂,可以增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤作用,提高顺铂对宫颈癌患者的治疗作用。

昆虫抗菌肽的诱导及其对荷瘤裸鼠抗瘤作用研究

研究了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导草地贪夜蛾卵细胞系SF-9产生抗菌肽的过程.以三氯醋酸提取抗菌肽,抑菌圈法测定抗菌活性,结果显示形成了明显的抑菌圈;体外实验证实,提取的抗菌活性物质能显著抑制人宫颈癌细胞SiHa的生长;体内实验利用已建立的荷人宫颈癌细胞SiHa裸鼠模型,通过局部注射途径进行治疗干预实验,结果显示治疗组与对照组比较肿瘤明显缩小,有显著差异(P<0.01).研究结果表明昆虫抗菌肽具有较明显的抗瘤作用.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞凋亡作用的体外研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡的效果。方法:以1μmol/L SAHA、2μmol/L SAHA、4μmol/L SAHA和1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml DDP分别组成单药组和不同SA-HA+DDP联合用药组,分别应用MTT方法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测SiHa细胞早期凋亡的情况。结果:联合用药组肿瘤细胞大量坏死明显,对细胞增殖的抑制率明显高于相应单药组(P<0.05);SAHA与中低剂量的DDP联合给药表现为协同作用,而与较高剂量的DDP联合用药表现为单纯相加作用;联合作用较二者单独用药细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:SAHA对宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,SAHA联合DDP有协同增敏作用。

蓝萼甲素及其包合物的抗肿瘤活性研究

目的研究蓝萼甲素(GLA)及其包合物(GLA-SBE-β-CD)的抗肿瘤活性。方法以S180实体瘤荷瘤小鼠为模型,考察GLA和GLA-SBE-β-CD对小鼠实体瘤的抑瘤率;在体外用不同浓度的GLA和GLA-SBE-β-CD处理人宫颈癌Hela细胞株、人肺腺癌A549细胞株、人肝癌Hep G2细胞株、人宫颈鳞癌Si Ha细胞株,用MTT法测定药物对各细胞株的抑制率,考察其细胞毒性。结果 GLA和GLA-SBE-β-CD能有效抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长,且GLA-SBE-β-CD的抑瘤效果明显高于GLA的;GLA和GLA-SBE-β-CD对4种肿瘤细胞株均有较强的细胞毒性,且对肿瘤细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性。结论 GLA-SBE-β-CD的抗肿瘤作用明显强于GLA;两者均具较强的细胞毒性。