四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体NADH脱氢酶亚基1基因(ND1)的序列分析

以四川境内的四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)为研究对象,根据已报道的若干物种的NADH脱氢酶亚基1基因(ND1)序列信息设计引物.运用PCR技术从四川黑熊毛囊组织的总DNA中扩增出ND1基因序列.采用GenScan、Blast2·1、ORF finder和Clustal W等软件分别对DNA序列进行预测、相似性比较、ORF查找以及多序列比对,并利用PredictProtein软件对蛋白质进行预测和结构分析.结果表明;PCR扩增所得DNA序列长度为957bp,包含了ND1基因,其ORF为957bp,编码317个氨基酸,编码蛋白的分子量为35·6×103Da,pI为7·83.四川黑熊的ND1基因序列及其所编码的氨基酸序列与其它熊、浣熊和小熊猫等动物的ND1基因序列和对应的氨基酸序列具有较高的相似性.

四川黑熊NADH脱氢酶亚基4基因的序列分析

目的探讨黑熊线粒体ND4基因的序列特点。方法根据已报道的若干物种的NADH脱氢酶亚基4基因(ND4)设计引物。运用PCR技术从四川黑熊毛囊组织的总DNA中扩增出ND4基因。并对ND4基因进行分析。结果PCR扩增所得DNA序列长度为1402bp,该序列包含了ND4基因,其ORF为1377bp,编码459个氨基酸,编码蛋白的分子量为51.5×103,pI为9.37。四川黑熊的ND4基因序列及其所编码的氨基酸序列与美洲黑熊、马来熊、棕熊、北极熊、人、大鼠、小鼠和狗等其他哺乳动物的ND4基因序列和对应的氨基酸序列具有较高的相似性,分别为68%～91%和71%～95%。拓扑结构预测显示四川黑熊ND4基因的蛋白质上分别存在N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N-酰基化位点、亮氨酸拉链以及富含亮氨酸的区域。结论哺乳类动物的ND4基因具较高的保守性,而其所编码的蛋白在功能上具有高度的一致性。

四川黑熊线粒体12S和16S rRNA基因的克隆及序列分析

利用哺乳动物线粒体基因的保守序列设计引物,采用PCR方法,首次从亚洲黑熊四川亚种(Ursusthibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中扩增出了线粒体12S rRNA和16S rRNA基因并进行了序列测定及分析.结果表明,四川黑熊12S rRNA基因长965 bp;16S rRNA基因长1 580 bp.通过进一步的序列分析表明,四川黑熊的12S rRNA和16S rRNA基因有较高的进化速率,与美洲黑熊、棕熊、北极熊、眼镜熊及大熊猫的相应基因相比较有较大差异,其中与美洲黑熊的同源性相对较高.

四川黑熊ND3、ND4L和tRNA-Arg基因的克隆和序列分析

克隆并测定了四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体基因组764 bp的片段,根据序列同源性比较,该DNA片段包括2个蛋白质编码基因:ND3和ND4L基因,以及1个tRNA-Arg基因.四川黑熊的ND3基因和ND4L基因的DNA序列和所编码的氨基酸序列与马来熊、棕熊、美洲黑熊和北极熊的同源性分别为:90%和95%、93%和97%、91%和96%、93%和97%;89%和98.98%、88%和98.98%、89%和100%、89%和98.98%.与棕熊、美洲黑熊和北极熊tRNA-Arg(CGA)的同源性分别为95.65%、94.20%和94.20%.拓扑结构比较显示,四川黑熊的ND3基因所编码的氨基酸序列比美洲黑熊的少了1个蛋白激酶C磷酸化位点.

四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的克隆及序列分析

目的探讨四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的特征。方法根据已经报道的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochromecoxidasesubunitⅠ,COXⅠ)基因设计引物、PCR扩增和直接测序,并用软件对四川黑熊及其他几个物种的COXⅠ基因序列及COXⅠ蛋白的氨基酸序列进行了分析。结果四川黑熊COXⅠ基因长1605bp,编码含514个氨基酸残基的前体蛋白。碱基的含量分别为A26.9%,C23.1%,G18.3%,T31.8%。起始密码子为“ATG”,终止密码子为“TAA”。蛋白质等电点为6.29,分子质量为57.2×103。以四川黑熊和已报道的其他6种动物的COXⅠ基因序列为数据构建的分子系统发育树表明在所比较的其他3种熊类中,四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近;在牛,狗和大鼠中,四川黑熊与狗的亲缘关系最近。结论四川黑熊COXⅠ基因的DNA序列和蛋白的氨基酸序列和其他动物的相应序列有很高相似性,表明COX基因在所比较的几个物种中具有高度保守性。

四川黑熊RPS16亚基基因的克隆与序列分析

根据已报道的部分哺乳动物RPS16基因的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从四川黑熊的肌肉组织总RNA中对核糖体蛋白亚基RPS16基因的表达序列进行克隆、测序和分析.结果表明:四川黑熊RPS16基因的表达序列全长为481bp,开放阅读框(ORF)为441bp,编码146个氨基酸,相对分子质量为16.4KDa,pI为10.81.拓扑预测显示含有6个类型的功能位点:1个依赖cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,3个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N-糖基化位点,1个乙酰化位点及1个核糖体蛋白S9信号位点.进一步分析发现,四川黑熊RPS16基因与已报道的大熊猫、牛、野猪、人、小家鼠和褐家鼠等6个哺乳动物物种的表达序列及其编码的氨基酸序列有很高的相似性,说明RPS16基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性.

川东北南江震旦系-寒武系界线岩层含矿性分析

从岩石地质特征和地球化学角度探讨川东北南江地区震旦系顶部和寒武系底部的岩层中是否存在镍钼钒多金属元素异常和富集成矿的可能。对金属元素分析表明,寒武系底部的这套黑色岩系存在镍钼钒多金属的富集现象,尤其是钒最为富集,达工业品位。岩性特征和有机碳含量分析表明,震旦系顶部灯影组第三段的白云岩和寒武系底部马家梁页岩段具有生油岩特征,区域上可能存在工业性油藏。另外,金属的富集与有机碳含量呈简单的正相关关系,表明金属元素富集与油气运移存在一定的相关性。