Primary culture and identification about brain microvascular endothelial cells of rabbits

Objective:To establish a simple and efficient culture method of primary rabbit brain microvascular endothelial cells,provide important carriers and tool cells for the research of related cerebrovascular diseases.Methods:The cerebral cortexes of rabbits were collected aseptic and inoculated after cutting,passing through cell sieve,bovine serum albumin density gradient centrifugation,typeⅡcollagenase digestion,finally inoculated and cultured.The cultured cells were identified by cell morphological observation and angiogenesis experiment.Results:Under the inverted microscope,the cells were short fusiform or polygonal,and grew in clusters and adhere to the wall.After the cells were densely fused,they would be in a typical monolayer flat,“pebbled"mosaic arrangement.Tube formation test had the ability to form tubes structure.Conclusion:This method can successfully separate and cultivate primary rabbit brain microvascular endothelial cells.

台湾榕组培快繁技术研究

【目的】建立台湾榕(Ficus formosana)组培高效繁育技术体系。【方法】以台湾榕茎段为试验材料,研究不同基础培养基对台湾榕茎段诱导率和萌芽数的影响;利用正交试验研究不同植物生长调节剂、活性炭及其质量浓度配比对丛生芽增殖系数、生根率和生长发育的影响;最后通过设置不同移栽基质对生根的组培苗开展移栽驯化研究,筛选能提高组培苗移栽成活率和质量的基质。【结果】同样添加1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.5 mg/L激动素(KT)、0.2 mg/L萘乙酸(NAA),以WPM为基础培养基对台湾榕茎段的诱导效果优于MS培养基,培养30 d后其诱导率达97.13%,萌芽数为3.38。正交试验的极差结果显示,NAA是影响丛生芽增殖的主要植物生长调节剂,其次是6-BA,丛生芽增殖的最佳培养基为WPM+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA,接种60 d后,增殖系数达到5.77,丛生芽健壮;同时NAA也是影响丛生芽生根的主要因素,吲哚丁酸(IBA)、活性炭对生根率的影响差异不显著,丛生芽生根的最佳培养基为WPM+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+1 g/L活性炭,接种60 d后,生根率达到100%,组培苗健壮、根系发达、不易折断;组培苗最适移栽基质是河沙∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1的组合基质,移栽30 d后,苗株成活率97.78%,长势很好。【结论】台湾榕茎段经过WPM+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L NAA诱导,再利用WPM+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA和WPM+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+1 g/L活性炭进行丛生芽的增殖和生根,最后由河沙∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1的组合基质进行移栽驯化,是最适合台湾榕组培高效繁育的技术体系。

番木瓜试管苗生根的研究进展

试管苗诱导生根培养是番木瓜组织培养的关键技术。不定根的数量和质量是试管苗成功驯化的关键性因素。通过查阅文献,总结了国内外近几十年来番木瓜组织培养中不定根诱导的研究进展,主要从品种差异、外植体来源、培养基、植物生长调节物质、培养程序等方面进行综述,并对其进一步的研究方向进行展望,旨在为番木瓜组培生根技术的深入研究提供一些策略和思路。

微生物培养体系预处理在MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌的应用价值

目的分析微生物培养仪(HB&L)微生物培养体系预处理在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)快速鉴定血培养阳性样本病原菌的临床应用价值。方法收集2022年1月至2022年12月安阳市人民医院实验室常规方法鉴定的120份血培养报警后单一细菌感染的阳性样本,所有样本均接受HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理,将传统方法的鉴定结果作为“金标准”对照,运用MALDI-TOF MS鉴定。对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定的鉴定率;另外对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法在不同分值下MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定结果。结果HB&L微生物培养体系预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为116例,鉴定率为96.67%;分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为92例,鉴定率为76.67%,两种预处理方法鉴定率对比差异有统计学意义(P<0.05);在3.000~2.300分值下HB&L微生物培养体系MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定率均高于分离胶促凝管法,差异有统计学意义(P<0.05);在2.299~2.000、1.999~1.700、<1.700分值下两种预处理方法菌属鉴定率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论HB&L微生物培养体系是MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性样本病原菌优质的预处理方法,可大幅提升鉴定率,值得应用。

不同软枣猕猴桃雄株花粉离体培养条件及花粉性状的比较

【目的】为初步筛选授粉性状优良的软枣猕猴桃雄株提供依据,进而促进授粉雄株的合理配置及育种效率的提高。【方法】对15份雄株的花粉离体培养条件、萌发特性和花粉量进行了测定与比较。【结果】1)软枣猕猴桃花粉萌发和花粉管生长所需的适宜离体培养条件略有不同,总体来看,适宜花粉培养的蔗糖浓度为5.0%~10.0%,硼酸浓度为25~50 mg/L,培养温度为30℃,最佳观察时间为4.5~6.0 h。2)不同雄株的花粉量及花粉萌发特性存在明显的株间差异。单花花药数的变幅为32.67~47.88枚,单药花粉量为3267~26000粒。单花花粉量,S3和S13的均较多,均超过1000000粒;S4、S6的均较少,均低于150000粒。15份雄株的花粉萌发率均较高,其中,Z1与S8的萌发率达到90%以上,Z2、S4、S9的萌发率虽均较低,但也都在65%以上;花粉管长度,Z1、S2与S8的均相对较高,均极显著高于其余雄株的。3)依据单花花粉量、萌发率与花粉管长度进行聚类分析,15份雄株可分为4个类群:类群1的萌发率、花粉管长度最高,单花花粉量也较高但其变幅大,筛选结果表明,Z1的综合表现较好;类群2的单花花粉量最高且其变幅小,其萌发率和花粉管长度也都相对较高;类群3和类群4的8个雄株则存在单花花粉量少、萌发率偏低或花粉管生长速度慢等缺点。【结论】以单花花粉量、花粉萌发率及花粉管长度为参考依据,Z1和类群2的授粉性状均较优,均可考虑用作进一步优选的候选授粉树。

马铃薯试管薯诱导培养基及诱导技术改良研究

为提高脱毒马铃薯试管薯生产效率,本文开展了马铃薯试管薯诱导培养基及诱导技术的优化试验。结果表明,改良壮苗培养基配方(MS+活性炭10 g/L+蔗糖50 g/L+椰子汁100 m L/L)较常规培养基配方(MS+蔗糖30 g/L+活性炭5 g/L)培养的马铃薯组培苗平均茎粗增加了42%,平均叶面积增加了60%;将壮苗培养后的组培苗暗培养时间改为10 d,然后散射光培养10 d,随后继续暗培养,改良条件下诱导试管薯平均单株数量为4.2个,较对照增加35.8%;平均单薯质量为319 mg,较对照增加10.9%。本文为脱毒马铃薯试管薯的生产提供了新的方法。

胚胎与输卵管互作研究前沿

哺乳动物自然繁殖过程中,在输卵管内精子与卵母细胞结合形成受精卵,随后在输卵管中缓慢移动并进行卵裂发育,这一阶段在不同物种中需要大致相当长的时间(3∼4天),随后胚胎才会进入子宫完成着床,进入妊娠后发育.输卵管为受精和胚胎早期发育提供了合适的场所,同时也是初始态生命体初次接触的环境,胚胎与输卵管完成初次对话(互作),互作对胚胎的发育产生积极的影响,也对输卵管的生理状态产生了适应性调节.体外受精等辅助生殖技术的出现,使胚胎可以在体外产生和发育,但完全缺少了与输卵管互作的机会,造成了胚胎在形态、耐低温性、发育能力、妊娠率和表观遗传特征等方面比体内产生的胚胎差.然而,输卵管的作用一直被低估,胚胎与输卵管互作未被充分研究.通过解读输卵管与胚胎互作相关的研究进展,系统阐释互作的细胞与分子基础、已开展的互作研究、已有的互作研究方法.帮助读者更好地认识胚胎是如何完整准确完成早期发育的,提示在辅助生殖实践中需要关注胚胎与输卵管的互作事件.

铁甲秋海棠花粉离体萌发研究

为探究铁甲秋海棠Begonia masoniana花粉离体萌发适宜条件,采用液体培养法,通过单因素试验考察蔗糖、硼酸、PEG-4000、氯化钙浓度以及不同培养时间对花粉管生长的影响。结果表明,铁甲秋海棠花粉离体萌发的最适培养基为5%蔗糖+0.01%硼酸+5%PEG-4000+0.003%氯化钙;最佳观察时间为120 min。利用该培养基进行培养,铁甲秋海棠花粉萌发率达90.86%,花粉管长度达511.51μm。该研究结果可为同属其他种类秋海棠的花粉研究及育种提供参考。

百合试管鳞茎诱导及膨大技术的研究

以东方百合"Sorbonne"试管苗为材料,研究了蔗糖浓度、大量元素、培养基状态、多效唑和水杨酸浓度对百合试管鳞茎诱导及膨大的影响。结果表明,蔗糖浓度为60 g.L-1时新增鳞茎数最多,鳞茎形成率达75%,蔗糖浓度120g.L-1处理最有利于鳞茎膨大;高浓度的大量元素有利于鳞茎的膨大,而不利于鳞茎的诱导,3MS时形成的鳞茎最大,但鳞茎形成率则下降到14.6%;液体培养基对鳞茎鲜重影响显著;多效唑浓度10mg.L-1处理能促进鳞茎的诱导和膨大;水杨酸处理则能显著提高试管鳞茎的数量。

薄壳山核桃花粉离体萌发和花粉管生长特性研究

以6年生薄壳山核桃优良品种‘金华’的新鲜花粉为试材,采用离体培养法,研究了不同复水时间、不同培养基组分、不同培养温度及培养时间对薄壳山核桃花粉萌发和花粉管生长的影响。结果显示：（1）薄壳山核桃花粉萌发试验前进行4h复水处理可显著提高萌发率,萌发率可达51.78%,为对照（2.51%）的20.68倍。（2）蔗糖、H3BO3、Ca（NO3）2·4H2O在一定浓度范围内均具有促进花粉萌发和花粉管生长的作用,但浓度过高则起抑制作用。（3）正交试验结果经实验验证表明,薄壳山核桃花粉萌发和花粉管生长的最适培养基为20%蔗糖＋0.02%~0.03%H3BO3＋0.05%Ca（NO3）2·4H2O,最佳培养条件为25℃下恒温培养24h,此时的花粉萌发率高达74.46%,花粉管平均长度为258.84μm。

翅果油树脱毒试管苗的组织培养技术研究

对翅果油树的无菌苗培养、愈伤组织诱导、继代愈伤组织诱导和生根诱导、褐化现象及预防等进行了研究 .结果表明 :种子无菌培养的最佳培养基为 1 / 2 MS;继代愈伤组织诱导的最佳培养基为 N2 MS+BA0 .5+NAA0 .0 2 、N4 MS+BA0 .5+NAA0 .0 4 ;植物激素类型及浓度配比是生根诱导的关键 ,NAA、GA、IBA为必需激素类型 ;用多种途径避免和预防了实验过程中的褐化现象 ,降低了褐化率 ;

牛皮杜鹃的组培快繁及种质试管保存技术

以牛皮杜鹃休眠芽为外植体,筛选最适合萌发、再分化、生根和种质试管保存的培养基。结果表明最适合休眠芽萌发的培养基为:1/4MS+GA31.5mg·L-1+维生素C20mg·L-1;基部直接再分化培养基为:1/4MS+6-BA4.0mg·L-1+NAA0.3mg·L-1;生根培养基为:MS+IBA0.46mg·L-1+活性炭450mg·L-1;种质试管保存培养基为:1/6MS(大量元素)+1/4MS(微量元素)+1/2MS(铁盐)+1/4MS(有机物质)+B93.5mg·L-1。牛皮杜鹃组织培养的不同阶段需要不同的培养基,常温条件下,利用低营养矮化常温的方法在试管内保存种质资源。

光质对小苍兰茎尖试管培养的影响

以小苍兰茎尖为外植体，分别置于白光（４００～６９０ｎｍ）、红光（５９０～６９０ｎｍ）、黄光（５２０～６４０ｎｍ）、蓝光（４００～５３０ｎｍ）、绿光（５００～５９０ｎｍ）和黑暗下培养，研究不同光质对小苍兰茎尖试管培养的影响。结果表明：白光下愈伤组织及芽的分化速度最快，芽的分化率和生物量最高，试管苗叶片数多、生长良好，但愈伤组织诱导率及根分化受到明显的抑制；红光下根的分化速度最快，根分化率及综合培养力最高；蓝光对愈伤组织诱导率、叶绿素含量以及试管苗的干重／生物量有明显的促进；绿光和黑暗对茎尖的分化与生长均有不利影响，试管苗出现玻璃化现象。

中国樱桃半野生种对樱的茎尖培养

以中国樱桃半野生种对樱茎尖为外植体进行试管繁殖 ,最佳灭菌方法为二次灭菌 (70 %乙醇30s→ 0 1%新洁尔灭 15min→ 0 1%升汞 3min)结合培养基添加抗生素羧苄西林二钠 5 0mg/L。最佳培养条件 :(1)初代培养基为F14+6 BA 0 5mg/L +IBA 0 2mg/L +GA3 0 5mg/L ;(2 )继代培养基为F14+6 BA0 5mg/L +IAA 1 0mg/L +GA3 0 5mg/L ,碳源采用白砂糖 2 0g/L +山梨糖醇 5g/L。同时研究表明 ,外植体种类、茎尖大小及抗氧化剂维生素C均影响茎尖初代培养成活率。

试管芋诱导的研究

以芋组培苗为试材 ,研究了蔗糖浓度、激素浓度、光照时间、培养温度、不同大小试管苗 ,不同芋品种类型等因素对试管芋诱导的影响及不同基质对试管芋育苗成活率的影响。结果表明 :诱导试管芋较理想的培养基为MS +蔗糖 8% +BA 1.0mg·L-1+NAA 0 .5mg·L-1,光照 12h/d ,培养温度 30℃ ;试管苗越大越有利于试管芋的形成 ;试管芋可保持其原有的特性 ;基质影响试管芋育苗的成活率 ,4种基质中蛭石最好。

东方百合试管鳞茎膨大的研究

以东方百合‘S iberia’试管苗为材料,研究了激素种类及其质量浓度、蔗糖浓度、大量元素浓度、低温处理对试管鳞茎形成和膨大的影响。结果表明,低质量浓度NAA有利于提高结鳞茎率;90 g/L蔗糖处理结鳞茎效果最好,所结鳞茎的平均直径为1.59 cm,平均鲜重为2.09 g,但与70 g/L蔗糖处理差异不显著;增加大量元素浓度可以促进鳞茎的形成和膨大,当浓度为2M S时,鳞茎直径最大达2.06 cm,平均直径1.65 cm,平均鲜重2.68g,较处理前的单芽增加了12.8倍;5℃低温处理可使试管苗100%结鳞茎,处理30 d对结鳞茎的效果最好,鳞茎的直径、鲜重平均分别为1.50 cm,2.06 g。

不同MS和B9浓度对马铃薯脱毒试管苗生长的研究

选用米拉、凉薯 97、金冠 3个品种和MS液体培养基 (全量、半量 )、B 9含量 (5mg/L ,1 5mg/L ,2 5mg/L)进行 3因素完全随机试验 ,调查各处理后脱毒试管苗的苗重、株高、茎节、根重和根数。其结果显示 :1 / 2MS培养基和B 9浓度为5mg/L时对脱毒试管苗的苗重和株高伸长有促进作用 ,但在试管苗茎节数的增加上因品种不同所选用的MS培养基成分含量及B 9浓度有差异。

金边富贵竹的茎段培养及试管繁殖

以金边富贵竹带腋芽的茎段为外植体进行试管繁殖，筛选出各培养阶段适宜的培养基分别为：（１）腋芽萌生，ＭＳ＋ＢＡ２．０～２．５ｍｇ／Ｌ＋椰子水１０％；（２）丛生芽分化及继代，ＭＳ＋ＢＡ３．０～３．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ；（３）生根，ＭＳ＋ＩＢＡ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３１．５ｍｇ／Ｌ＋活性碳０．５％。

培养环境条件对猕猴桃花粉萌发的影响

采用离体培养法,在筛选出最佳培养基后,研究猕猴桃花粉在不同培养时间、pH值、培养基种类、温度条件下花粉萌发和花粉管伸长状况。结果表明:猕猴桃花粉离体萌发及花粉管伸长的最适培养基为10%蔗糖+100 mg.L-1硼酸+10 mg.L-1Ca(NO3)2;离体培养最适观察时间为5 h,最适培养温度为30℃,最佳培养pH值为6.0。