改良的Sihler's染色法显示成人输尿管和回肠壁内神经分布

目的探讨改良的Sihler’s染色法显示成人输尿管和回肠壁内神经分布的应用。方法选取教学解剖尸体中输尿管和回肠6具,最终获得12条输尿管和6段回肠进行改良的Sihler’s染色法整体染色,于X线阅片灯下、组织压片、免疫组化观察输尿管和回肠壁内神经分支、分布、走形总结两者肌内神经分支、分布规律及形态学特征。结果大体解剖很难辨认输尿管的神经来源,可见回肠系膜内一些纤细的白色神经支进入肠壁。Sihler’s染色后,见输尿管和回肠呈透明胶冻状,壁内神经支呈深蓝色,浆膜面更为清晰。输尿管外膜层内的神经与血管伴行,近似垂直进入管壁,逐渐向肌层延伸并沿纵轴分布;整体见管壁上、中段神经稀少,分支逐渐变细,相邻分支间交叉较少;输尿管下段神经较为密集,见经膀胱输尿管连接部成簇状进入输尿管下段向近端延伸的粗大神经支,分布密集,向上逐渐分出初级及次级神经支,相邻神经间有分支交错及伴行,每根神经的分支不在一个平面上固定,可观察视野内未发现神经节。回肠外形完整,浆膜层神经分支呈现深蓝色,与动脉伴行,并向肠壁分出初级及次级神经支,部分直接跨越血管网分布至肠系膜侧壁,到达肠壁的壁内神经环形、垂直分布于肠管壁,呈树枝状。相邻的神经分支相互交叉,每根神经束的分支不在一个平面上固定,可观察视野范围内未见明确神经节。Sihler’s染色透明的输尿管、回肠切取组织压片:见两者神经纤维均由外向内至黏膜层分布,输尿管壁内沿纵轴走向,肠壁呈近似垂直向对系膜侧走向,呈网状分布,分支逐渐变细,神经纤维间明显交叉,均未见明确神经节样结构。免疫组化见输尿管肌内神经纤维呈束状、纵行分布,交叉较少;回肠壁内肌间有神经纤维网格状分布,肌间见有大量的神经节结构。结论成人输尿管和回肠壁内神经能被染色,神经分布各具特色。壁外神经均伴随其支配动脉走行,壁内由外向内至黏膜层走行,分支逐渐变细,未见明确神经节。除黏膜下层外,管壁结构类似,环肌与纵行平滑肌均受内脏神经支配,器官壁外神经走向沿其动脉伴行,壁内神经有类似节段性分布规律,此结果可能为临床上回肠代输尿管类似原输尿管蠕动节律性及排尿的神经解剖提供参考。

粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

超声联合染色体筛查在Down’s综合征诊断中的应用

目的探究超声联合染色体非整倍体无创DNA产前检测(Non-invasive prenatal genetic testing,NIPT)在Down’s综合征(DS)诊断中的应用。方法回顾性收集2020年6月-2023年6月太康县人民医院收治的疑似DS高危患者210例为研究对象,通过超声、NIPT及两项联合对DS进行诊断,与羊水细胞染色体核型分析结果进行对比,采用ROC曲线分析三者诊断敏感度、特异性、准确性与诊断价值。结果在210例疑似DS患者中,经羊水细胞染色体核型分析证实,DS患者26例(12.38%,26/210),非DS患者184例(87.62%,184/210)。以羊水细胞染色体核型分析结果作为金标准,超声诊断DS的敏感度为69.23%(18/26),特异度为92.93%(171/184),超声诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性一般(Kappa=0.574);NIPT诊断DS的敏感度为84.62%(22/26),特异度为97.83%(180/184),NIPT诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.806);两项联合诊断DS的敏感度为92.31%(24/26),特异度为98.37%(181/184);两项联合诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.892)。两项联合检出率明显高于超声检查,且两项联合、NIPT检查诊断误诊率均明显低于超声检查(P<0.05)。ROC曲线分析显示,超声、染色体筛查、两项联合检查诊断DS的AUC为0.811、0.871、0.953,提示两项联合检查对DS的诊断价值更高。结论超声联合染色体筛查进行DS诊断具有高准确性,利于提高孕妇接受度,具有较高临床价值,值得临床推广应用。

Sihler’s神经染色法再改良在中空器官中的应用

目的探讨Sihler’s肌内神经染色法再改良在中腔器官染色中的应用。方法使用再改良的Sihler’s肌内神经染色法整体染色人的食管、胃、膀胱。结果各器官染色后,不需要剪开器官,支配食管、胃、膀胱的神经在器官壁内清晰可见,神经的分支以及分支间的联系可见。结论 Sihler’s肌内神经染色法不仅适用于骨骼肌肌内神经染色,也适用于平滑肌,只要处理得当较大的器官不剪开的情况下也适用。

Sihler's肌内神经染色法的再改良

目的 寻找一种更省时、经济实用的sihler's肌内神经染色方法。方法 分别使用再改良前、后的sihler's肌内神经染色法对家兔不同形态肌进行整肌染色。结果 用再改良前的sihler's肌内神经染色法整个染色周期至少需要14wk,肌外观轻度变形,肌内神经终末分支显示差,而且消耗的药品较多,所需费用较高;用再改良后的sihle's肌内神经染色法染色整个周期减少到10wk,肌外观轮廓完整,肌内神经终末分支清晰可见,消耗的药品较改良前更少。结论 再改良后的sihler's肌内神经染色法较再改良前更省时、更经济、更实用。

绿色复合还原剂在靛蓝染色中的应用

靛蓝是纺织工业中最重要的还原染料之一,靛蓝染色时,必须在还原剂作用下转化为水溶性隐色体形式。该研究旨在寻找一种复合绿色还原剂,以替代靛蓝染色中使用的对环境不利的连二亚硫酸钠(sodium dithionite,SD)。首先,比较了三种还原剂,SD、二氧化硫脲(thiourea dioxide,TD)和葡萄糖(glucose,GS)的稳定性。采用TD作还原剂剧烈搅拌2h仍能保持靛蓝染色所需还原电位,而SD和GS剧烈搅拌1h达不到靛蓝染色所需的还原电位,靛蓝染色性能下降。鉴于GS的环境友好性,选择TD与GS复合物作为靛蓝染色的复合绿色还原剂。其次,分析复合还原剂不同质量比对棉织物靛蓝染色的还原电位、pH值和K/S值的影响。当TD与GS的质量比为7:3,体系具有稳定的还原电位,可获得较好的染色性能。

NOTCH3基因C260S位点突变导致CADASIL的临床和影像学特征分析

目的探讨NOTCH3基因第5外显子C260S位点突变导致的伴有皮层下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)家系的临床和影像学特征。方法选取2021年12月首都医科大学附属北京同仁医院来自同一家庭的CADASIL患者,对所有患者进行NOTCH3基因测序,回顾性分析患者的临床表现和头颅影像学特征。复习既往文献报道的导致同一位置氨基酸改变的其他突变类型的临床及影像学特征。结果4名家庭成员中,包括先证者(46岁,女)及其两个姐姐(分别为48岁和50岁)和女儿(18岁)。先证者及其父亲、两个姐姐都有偏头痛病史,其中大姐有记忆力减退;先证者患有脑梗死及伴有视觉先兆的偏头痛;先证者女儿体健;先证者父亲因脑梗死去世。4名家庭成员均存在C260S位点的NOTCH3基因突变。既往文献无此位点突变的报道,先证者头颅MRI示右侧脑桥亚急性梗死,颞叶、脑室周围及脑干异常高信号改变,其大姐脑桥可见腔隙性梗死灶。结论NOTCH3基因第5外显子c.778T>A(p.C260S)的罕见突变导致的CADASIL发病时间早,早期会出现认知障碍。合并偏头痛的脑干梗死患者,需警惕CADASIL的可能。

改良Sihler's神经染色法显示股前内侧区皮肤内神经分布

目的构建肉眼可见的股前内侧区皮肤内神经分布模式。方法紧贴脂肪表面取下6具12侧甲醛固定的中国成年尸体股前内侧区皮肤。无水乙醇脱脂3d,胶原酶和胰酶消化3 d后,改良的Sihler’s神经染色法染色皮肤内神经。Photoshop软件测数神经纤维密度。结果运用改良的Sihler’s神经染色法染色皮肤,肉眼即可观察到皮下和真皮内神经次级分支。真皮内可见神经扭曲与打结走行,神经分支间存在吻合。股前内侧区外侧、中间及内侧部的上、中、下1/3区神经密度分别为(0.90±0.31、1.46±0.67、1.84±0.67、1.66±0.79、2.77±0.77、2.60±0.78、3.86±1.10、4.99±1.38、6.65±1.39)根/cm^2。即外侧部上1/3区最稀疏,内侧部下1/3区最密集。结论改良的Sihler's神经染色法能清晰显示肉眼可见的股前内侧区皮肤内神经;这些结果为皮瓣移植感觉重建选材匹配和提高皮肤活检成功率提供了形态学依据。

Sihler肌内神经染色的研究进展

Sihler肌内神经染色自提出以来,历经国内外学者几度改良,现已广泛应用于动物和人的肌内神经染色,以清晰观察肌内神经的各种分布,为临床提供基础资料。本文就近年对Sihler染色改良,以及临床应用现状做一综述。

应用Sihler氏染色研究人喉神经分支分布类型

采用Sihler氏染色,经过染色后,在立体显微解剖镜下、可清晰地观察到喉内肌肌肉神经支配类型及神经间的联系,结果:(1)喉返神经支配除环甲肌以外的所有喉内肌,环甲肌由喉上神经外支支配.(2)喉上神经内支不仅支配声门上粘膜,也支配杓间肌(包括的横肌和杓斜肌)和声门下粘膜.(3)在每侧杓间肌肉.喉返神经和喉上神经内支之间百多个吻合支.(4)喉返神经的杓间肌神经和环杓后肌神经之间常有交通支.

葡萄染色体制片技术优化及14个葡萄品种rDNA分布特征分析

【目的】优化葡萄染色体制片技术并分析14个葡萄品种rDNA分布特征,为葡萄染色体鉴定、变异分析及葡萄品种间的细胞遗传学背景差异解析研究提供参考依据。【方法】以14个葡萄品种当年生半木质化枝条水培长出的根尖为试验材料,以冰水混合物处理根尖24 h后1 MPa笑气(N2O)处理30 min为对照,设0.2μmol/L的甲基氨草磷溶液(APM)浸泡根尖2 h后1 MPa N2O不同时长(0、30和60 min)处理,筛选染色体制片条件并计算各处理下形态良好的中期分裂相占比;比较酶解滴片法及火焰干燥法的染色体制片效果。以45S rDNA和5S rDNA为探针采用双色荧光原位杂交(FISH)技术分析rDNA在14个葡萄品种染色体上的分布特征。【结果】对照中葡萄根尖材料形态良好的中期分裂相占比仅为32.22%,FISH后易产生背景信号且信号模糊,采用APM处理2 h后1 MPa N2O处理30 min得到的染色体制片形态良好的中期分裂相占比最高,达80.00%,且染色体浓缩适当,FISH信号质量良好。采用火焰干燥法获得的制片细胞分散程度适中,中期分裂相多。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上始终呈连锁状态;5S rDNA信号与染色体组数目相关,在二、三、四倍体中的数量分别为2、3和4个。45S rDNA信号在二、三、四倍体中的数量分别为4、6和7个,在红香蕉葡萄中只有3个;5S rDNA信号位于17号染色体上,45S rDNA位于17和15号染色体。意大利和碧香无核葡萄例外,意大利葡萄2个未与5S rDNA连锁的45S rDNA位于15和16号染色体,碧香无核葡萄1个与55 rDNA连锁的45 rDNA位于15号染色体,1个未与55 rDNA连锁的45S rDNA位于17号染色体上。【结论】制作葡萄根尖中期染色体制片较优方法是APM预处理2 h后1 MPa N2O处理30 min,使用火焰干燥法制片。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上呈连锁排列,在二、三、四倍体中数量不同。14个葡萄品种的45S rDNA和5S rDNA在染色体上呈L形排列,5S rDNA位点数量比45S rDNA位点数量更稳定。

面部和颈前部皮神经的Sihler’s染色及意义

目的:通过改良的Sihler’s染色法揭示肉眼可见的面部和颈前部皮神经的整体分支分布模式。方法:经福尔马林固定的12具成年和6具儿童中国人尸体。取下含皮下脂肪的面部和颈前部皮肤标本,行改良的Sihler’s染色。结果:解剖发现面部皮肤除了接受三叉神经支配外,还广泛接受面神经的分支支配;颈前部皮肤除了受颈前皮神经支配外,还接受来自穿过肌肉后的神经支配。面部和颈前部标本Sihler’s染色后,大体解剖不能展示的皮神经整体分支分布模式肉眼可见。每条皮神经的走行、树枝样的神经分支及分布范围清晰可见。面神经分支与三叉神经分支在额颞交界区、眶下区和颏区等处形成广泛交通。在中线处,左右侧的神经支间存在交通。颈横神经与锁骨上神经分布范围相对较大,两者间也有交通,颈横神经还支配到下唇区。结论:本研究结果可为颌面外科、整形与美容术免于皮神经损伤,感觉重建的选材匹配,以及局部麻醉阻滞等提供形态学指导。

尼龙染色宝TF-217N的应用性能

介绍了尼龙染色宝TF-217N的应用性能,其可以替代匀染剂用于深色尼龙酸性染料及金属络合染料染色工艺中。实验表明:尼龙染色宝TF-217N对酸性染料具有较好的缓染性,优于常规的酸性匀染剂,而且还可以提高织物的水泡牢度、耐皂洗色牢度及耐汗渍色牢度等各项色牢度至4级或以上。尼龙染色宝TF-217N还能够提升织物后道的防水和柔软整理效果。经尼龙染色宝TF-217N处理后,织物不含苯酚、双酚F,双酚S含量小于10 mg/kg,能够满足客户的环保要求。因此,尼龙染色宝TF-217N的应用可以直接省去后道固色工艺,缩短工艺流程,实现节能降耗,提高效率。

5S rDNA在百合染色体上的定位及其联会特点研究

利用FISH技术追踪不同倍性百合中5S rDNA在染色体上的位置,发现5S rDNA位点稳定位于3号染色体长臂近端部。通过观察铁炮百合小孢子母细胞减数分裂过程中染色体的联会配对特点,发现不同染色体联会特点不同,以5S rDNA重复序列为探针的FISH结果可发现铁炮百合3号染色体上5S rDNA区域在减数分裂过程中不发生联会,这是5S rDNA能稳定在3号染色体遗传的主要原因。

茜素红S对异齿裂腹鱼稚鱼标记效果研究

为探索茜素红S对异齿裂腹鱼稚鱼浸泡标记的适宜条件,采用半静态式水生生物急性毒性试验法确定茜素红S对异齿裂腹鱼稚鱼安全质量浓度,利用不同质量浓度的茜素红S溶液对45日龄的异齿裂腹鱼稚鱼浸泡不同时间,探究各试验组稚鱼死亡率、生长情况、标记效果和标记有效保存时间,确定茜素红S对异齿裂腹鱼稚鱼的适宜标记条件。试验结果表明:茜素红S对异齿裂腹鱼稚鱼24、48、72、96 h半致死质量浓度分别为225.85、147.72、139.21、137.66 mg/L,安全质量浓度为28.99 mg/L;0~125 mg/L的茜素红S溶液浸泡稚鱼24 h,质量浓度为75~125 mg/L稚鱼耳石标记效果可见,当茜素红S质量浓度为125 mg/L时,稚鱼死亡率显著升高(P<0.05);75 mg/L茜素红S浸泡稚鱼12~96 h,浸泡24~96 h稚鱼耳石标记效果可见,当浸泡时间为96 h时,稚鱼死亡率显著升高(P<0.05);在4个月的续养过程中,75 mg/L茜素红S溶液浸泡72~84 h,4个月后稚鱼耳石标记效果依旧可见。综合生长、存活率、染色效果及标记保存时间,建议采用75 mg/L茜素红S浸泡标记异齿裂腹鱼72~84 h。

三种葱莲属植物的倍性及FISH核型分析

本研究以5S rDNA为探针,利用FISH技术对3种葱莲属栽培品种有丝分裂中期染色体上的rDNA位点进行物理定位,分析3种葱莲属栽培品种的倍性及FISH核型。结果表明:3个品种存在两种倍性,其中‘Lily Pies’和‘Fragrance’为二倍体、‘King′s ramson’为四倍体。它们的核型特点表现为:(1)‘Lily Pies’核型公式2n=2x=24=6 m+18 sm,染色体相对长度范围为6.17%~12.80%,属于2B型;(2)‘Fragrance’核型公式2n=2x=24=14 m+10 sm,染色体相对长度范围为6.36%~12.08%,属于2A型;(3)‘King’ s ramson’核型公式2n=4x=48=28 m+20 sm,染色体相对长度范围为5.68%~13.55%,属于2B型。3种葱莲属植物的FISH位点均位于染色体的长臂末端,分别为‘Lily Pies’含有4个5S rDNA位点,在6号和8号的两条染色上;‘Fragrance’含有3个5S rDNA位点,在两条6号染色体以及一条8号染色上;‘King′s ramson’含有4个5S rDNA位点,分别在一条2号染色体、两条6号染色体和一条8号染色体上。本研究对葱莲属3个栽培品种的倍性和FISH核型的分析,将为该物种的遗传多样性分析和基因组结构解析提供新的信息。

Steedman’s wax包埋切片DAPI染色法证实铝诱导花生根尖细胞程序性死亡

【目的】检验Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是否适用于观察花生根尖细胞核形态。【方法】分别采取100μmol/L AlCl3处理不同时间(0、4、8、12 h)后两个花生品种(铝敏感型中花2号和耐铝型99-1507)的根尖,经过Steedman’s wax包埋切片等一系列过程,利用荧光染料DAPI染色观察细胞核形态变化。【结果】100μmol/L AlCl3可引起花生根尖细胞核形态发生改变,核质浓缩、核边缘化、呈新月状等,具有明显的PCD特征。花生根尖细胞在铝胁迫下发生PCD,PCD程度与花生耐铝性呈负相关,与处理时间呈正相关。【结论】Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是一种快速、高效的适用于观察花生根尖细胞核形态的方法。

鲤45S rDNA的染色体荧光原位杂交定位

应用荧光原位杂交技术,通过设计位于5.8S rDNA、18S rDNA和非转录IGS区域的3条探针CAAG1191、CAAG1845和CAAG3602,分别对散鳞镜鲤Cyprinus carpio var.scattered mirror和松浦鲤Cyprinuscarpio Songpu的45S核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)进行染色体定位及共定位。结果表明:45S rDNA均位于两品种鲤一对近端着丝粒染色体的短臂末端,具有染色体特异性,表明45S rDNA序列的探针能够在鲤细胞遗传学研究中用于标识其所在染色体,并与鲤遗传连锁图谱中长度为227 cM的1号连锁群相对应;两品种鲤的染色体数目均为2n=100,45S rDNA在鲤基因组内仅定位于一对同源染色体,不存在复制位点,证实了鲤基因组在全基因组复制事件之后又经历了重新二倍化过程。

Carnoy's预固定剂量对中期染色体分散度的影响

目的定量研究Carnoy's预固定剂量变化对外周血淋巴细胞中期染色体分散度的影响。方法用0．075 mol／L KCl对经培养的外周血淋巴细胞于37℃低渗处理35 min;在预固定环节,Carnoy's液的量分别控制在1．25％、2．50％、3．75％、6．25％和12．25％(终体积浓度);常规制备中期染色体标本,Giemsa染色后观察不同预固定剂量下淋巴细胞及中期染色体的分散质量,计算中期染色体铺展的面积及染色体的分散质量。结果当预固定剂量占总体积的1．25％、2．50％或3．75％时,染色体的分散质量较好,可用核型多,当预固定剂比例≥16．25％后,细胞间相互黏连的程度和染色体间相互积聚的倾向愈发明显。对染色体铺展面积的定量结果显示,预固定剂比例为1．25％、2．50％和3．75％时,分裂相核型的平均分布面积分别为1 246±236 mm2、1 143±178 mm2和1 017±163 mm2,均显著高于预固定剂用量为6．25％和12．25％时中期分裂相核型的平均分布面积:876±81 mm2和518±65 mm2,双侧t检验显示组间比较差异显著(P<0．05)。结论在染色体标本制备过程中,预固定剂的用量是最终影响染色体分散质量的重要因素之一。

Calretinin、S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠诊断中的应用价值研究

目的探讨钙视网膜蛋白(Calretinin)、S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠(HD)诊断中的应用价值。方法选取2016年5月至2018年5月西安市儿童医院收治的HD新生儿46例,并选取同期无HD的新生儿18例。取HD患儿近端扩张段和远端狭窄段肠壁及无HD患儿手术部位结肠组织,分别行Calretinin和S100免疫组化染色检测,随后观察Calretinin和S100免疫组化染色情况,分析Calretinin联合S100免疫组化染色在新生儿HD诊断中的灵敏度和特异度,并采用Kappa一致性检验验证该方法与传统诊断方法及单独采用Calretinin染色或S100染色的一致性。结果HD患儿结肠扩张段均可见Calretinin染色的神经节细胞、未见S100染色的增粗神经纤维,非HD患儿中17例可见Calretinin染色的神经节细胞、2例S100染色的增粗神经纤维,与HD患儿狭窄段染色情况(1例Calretinin染色神经节细胞、44例S100染色增粗神经纤维)均存在统计学差异(P<0.05)。Calretinin联合S100免疫组化染色诊断新生儿HD,灵敏度为97.83%,特异度为100.00%,与传统诊断方法的一致性较高(Kappa=0.962,P=0.038),优于单独使用S100染色(Kappa=0.886,P=0.064;灵敏度为95.65%,特异度为88.89%),但是与单独使用Calretinin染色相当(Kappa=0.962,P=0.038;灵敏度为97.83%,特异度为94.44%)。结论Calretinin联合S100免疫组化染色检测在新生儿HD诊断中具有较高的灵敏度和特意度且优于单独使用S100染色,但并不优于单独使用Calretinin染色;进行HD病理学诊断时,应注意取材深度以及取材部位。